熒光壽命成像和生物發(fā)光的異同點是什么?生物發(fā)光與熒光壽命成像不同點:產(chǎn)生光子的原理不同,類似于我們都是通過肉眼去觀察螢火蟲和發(fā)光水母一樣,生物發(fā)光與熒光成像在本質(zhì)上,都是機體中特定的細胞或材料發(fā)出光子,被高靈敏度的CCD檢測到形成圖像,但是生物發(fā)光與熒光壽命成像產(chǎn)生光子的過程和機制是完全不同的。生物發(fā)光與熒光成像相同點:都需要對細胞進行標記。生物發(fā)光產(chǎn)生的光子和熒光壽命成像產(chǎn)生的光子都可以被高靈敏的CCD檢測并形成圖像,就像一個人的眼睛就可以既看到螢火蟲又可以看到發(fā)光水母一樣。除此之外,生物發(fā)光和熒光壽命成像都需要對目標細胞進行標記,讓細胞產(chǎn)生熒光素酶或者熒光蛋白。熒光壽命成像(FLIM)可用于測量分子環(huán)境參數(shù)。熒光壽命成像售價
熒光壽命成像技術(Fluorescence Lifetime ImagingMicroscopy,F(xiàn)LIM)是一種在顯微尺度下展現(xiàn)熒光壽命空間分布的技術,由于其不受樣品濃度影響,具有其他熒光成像技術無法代替的優(yōu)異性能,目前在生物醫(yī)學工程、光電半導體材料等領域是一種重要的表征測量手段。熒光和熒光壽命:分子包含多個單能態(tài)S0、S1、S2…和三重態(tài)T1…,每個能態(tài)都包含多個精細的能級。正常情況下,大部分電子處在*低能態(tài)即基態(tài)S0 的*低能級上,當分子被光束照射,會吸收光子能量,電子被激發(fā)到更高的能態(tài)S1 或S2 上,在S2 能態(tài)上的電子只能存在很短暫的時間,便會通過內(nèi)轉(zhuǎn)換過程躍遷到S1 上,而S1 能態(tài)上的電子亦會在極短時間內(nèi)躍遷到S1 的*低能級上,而這些電子會存在一段時間后通過震蕩弛豫輻射躍遷到基態(tài),這個過程會釋放一個光子,即熒光。此外,亦會有電子躍遷至三重態(tài)T1 上,再由T1 躍遷至基態(tài),我們稱之為磷光。上海多色熒光壽命成像研發(fā)熒光壽命成像可用于多種生物應用,包括組織表面掃描、組織類型繪圖、光動力治理、皮膚成像等。
受光學衍射極限的限制,熒光顯微技術的空間分辨率只能達到200納米左右,難以滿足生命科學研究的需要。而對于熒光壽命成像來說,其空間分辨率受衍射極限的影響尤為嚴重。熒光壽命成像是一個新興的研究領域,尋求具有高度原創(chuàng)性的技術原理與方案,并率先解決熒光壽命成像在生命科學應用中存在的難題,具有重大的科學意義與應用價值。一種熒光壽命成像方法,所述方法包括下述步驟:對標記于樣品中的光開關染料分子進行稀疏激勵;激發(fā)樣品中被激勵的光開關染料分子,收集被激發(fā)的光開關染料分子所發(fā)射的光子并記錄光開關染料分子的熒光圖像,對熒光圖像中的光開關染料分子進行質(zhì)心定位;對在質(zhì)心定位處接收到的光子進行計數(shù),確定被激發(fā)的光開關染料分子的熒光壽命;結(jié)合得到的光開關染料分子的質(zhì)心定位結(jié)果和熒光壽命,構(gòu)建熒光壽命圖像。
熒光壽命顯微成像(Fluorescence lifetime imaging microscopy,FLIM)是熒光壽命測量和熒光顯微技術的結(jié)合,熒光壽命顯微成像具有高特異性、高靈敏度、可定量測量微環(huán)境變化和分子間相互作用、不受探針濃度、激發(fā)光強度和光漂白影響等優(yōu)點。在過去的十年中,光學技術硬件和軟件、材料科學和生物醫(yī)學的迅速發(fā)展,共同促進了FLIM技術及其應用的巨大進步。熒光壽命成像(FLIM)對細胞信號傳導及調(diào)控,蛋白間的相互作用等生物研究發(fā)揮著很大作用。利用熒光壽命成像顯微鏡技術可實現(xiàn)可以實時監(jiān)控發(fā)光納米顆粒在活細胞內(nèi)的穩(wěn)定性。
熒光壽命成像分析:熒光壽命是用于幾種生物測定的穩(wěn)健參數(shù)。它有可能替代傳統(tǒng)的測量技術,如吸收法、冷光法或熒光強度法3。熒光團物理化學環(huán)境的任何變化都會導致熒光壽命的改變??赏ㄟ^各種機制來研發(fā)基于壽命的分析,例如簡單的結(jié)合測定,涉及到兩個組分的結(jié)合(一個被熒光標記)而引起FLT的變化。另一種機制是猝滅釋放型測定,涉及大量過量存在的猝滅物質(zhì),其具有低而有限的熒光。一旦熒光化合物被釋放(通過酶促反應或與互補DNA結(jié)合),系統(tǒng)的壽命就會改變。FLT可與FRET(熒光共振能量轉(zhuǎn)移)分析結(jié)合用于能量轉(zhuǎn)移效率測量。熒光壽命可以在頻域或者時間域測量。廣東紅外熒光壽命成像采購
將熒光壽命成像與共聚焦成像技術結(jié)合起來,實現(xiàn)人體三維熒光壽命成像,實現(xiàn)人體三維功能成像奠定基礎。熒光壽命成像售價
在基于時間相關單光子計數(shù)的熒光壽命成像實驗中,通過選用超快激光器可以優(yōu)化脈沖持續(xù)時間,單光子探測器和時間數(shù)字轉(zhuǎn)換器的時間抖動則成為制約時間分辨率的關鍵參數(shù)。熒光壽命成像可進行高質(zhì)量的多色成像實驗或?qū)崿F(xiàn)STED、PALM/STORM等超分辨率熒光顯微成像。目前TCSPC是主要應用的熒光壽命測定技術。熒光壽命通常在ps~us量級,在如此短的時間量級上進行測量,它是較為成熟準確的測試手段。TCSPC的工作原理是使用一個同步信號源驅(qū)動激光器,出射光脈沖照射樣品池,在利用光子探測裝置(多為PMT)對熒光信號進行探測,每一個光子計數(shù)信號在FT1010中都會落入一個對應的時間窗口,經(jīng)過一定時間的統(tǒng)計疊加后即得到熒光壽命曲線。幾十萬次重復以后,不同的時間通道累積下來的光子數(shù)目不同。熒光壽命成像售價
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