廣州植物熒光壽命成像操作步驟

來源: 發(fā)布時(shí)間:2022-08-18

熒光壽命成像(FLI):這種技術(shù)相對(duì)較新,涉及到同時(shí)在圖像的每個(gè)像素處確定熒光衰減時(shí)間的空間分布。它基于熒光團(tuán)的熒光壽命取決于其分子環(huán)境而并非濃度的事實(shí)。它可以用于無法控制局部探針濃度的熒光顯微鏡中。熒光壽命成像(FLIM)可用于測(cè)量分子環(huán)境參數(shù),通過熒光共振能量轉(zhuǎn)移(FRET)進(jìn)行的蛋白質(zhì)相互作用,并可以通過細(xì)胞和組織的自發(fā)熒光來測(cè)量其代謝狀態(tài)。分子環(huán)境參數(shù)可以通過因熒光淬滅或熒光團(tuán)的構(gòu)象變化而引起的壽命變化來測(cè)量。FLIM可用于多種生物應(yīng)用,包括組織表面掃描、組織類型繪圖、光動(dòng)力治理、DNA芯片分析、皮膚成像等。熒光壽命成像(FLIM)對(duì)細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)及調(diào)控,蛋白間的相互作用等生物研究發(fā)揮著很大作用。廣州植物熒光壽命成像操作步驟

顯微熒光壽命成像應(yīng)用:材料科學(xué)領(lǐng)域:寬禁帶半導(dǎo)體等體系的少子壽命mapping 測(cè)量;量子點(diǎn)等用作熒光壽命成像顯微鏡探針;鈣鈦礦電池/LED 薄膜的組分分析、缺陷檢測(cè);銅銦鎵硒CIGS,銅鋅錫硫CZTS 薄膜太陽能電池的組分、缺陷檢測(cè);鑭系上轉(zhuǎn)換納米顆粒;GaAs 或GaAsP 量子阱的載流子擴(kuò)散研究;生命科學(xué)領(lǐng)域:細(xì)胞體自身熒光壽命分析;自身熒光相對(duì)熒光標(biāo)記的有效區(qū)分;活細(xì)胞內(nèi)水介質(zhì)的PH 值測(cè)量;局部氧氣濃度測(cè)量;具有相同頻譜性質(zhì)的不同熒光標(biāo)記的區(qū)分;活細(xì)胞內(nèi)鈣濃度測(cè)量;時(shí)間分辨共振能量轉(zhuǎn)移(FRET):納米級(jí)尺度上的遠(yuǎn)差測(cè)量,環(huán)境敏感的FRET 探針定量測(cè)量;代謝成像:NAD(P)H 和FAD 胞質(zhì)體的熒光壽命成像。深圳化學(xué)熒光壽命成像哪個(gè)品牌好熒光壽命顯微成像,可以定位不同的分子及濃度分布,在生物,材料,半導(dǎo)體領(lǐng)域具有重要的應(yīng)用價(jià)值。

熒光壽命成像 (FLIM)通過建立檢測(cè)到的熒光事件的直方圖來確定壽命??娠@示單指數(shù)或多指數(shù)熒光衰減。數(shù)值曲線擬合表示熒光壽命和振幅(即檢測(cè)到的光子數(shù))。由于FRET減少了供體壽命,因此如果無FRET的供體壽命已知,就可以量化FRET發(fā)生的程度。該供體壽命τ作為分析FRET樣品的一定參考。因此,F(xiàn)LIM-FRET為內(nèi)部參照—這一特點(diǎn)減少了基于強(qiáng)度測(cè)量FRET時(shí)的很多缺點(diǎn)。由于其熒光壽命是染料的固有特性,因此對(duì)其他不利影響(如光漂白、圖像明暗處理、不同濃度或表達(dá)水平)具有普遍的不變性。使用基于強(qiáng)度的FRET測(cè)量的主要限制是所有可觀察的供體分子都經(jīng)歷FRET的基本假設(shè)。通常情況并非如此。供體分子這種變化的“非結(jié)合”組分給測(cè)量的FRET效率帶來了相當(dāng)大的不確定性,使得無法在實(shí)驗(yàn)之間進(jìn)行比較。熒光壽命成像克服了這一缺點(diǎn)。

時(shí)域法熒光壽命的測(cè)量和熒光壽命成像主要有時(shí)間相關(guān)單光子計(jì)數(shù)法(time correlated single photon counting, TCSPC)、門控探測(cè)法(time-gated detection)、條紋相機(jī)測(cè)量法(streak-FLIM)、頻閃技術(shù)等四種常見的方法。TCSPC是目前測(cè)量熒光壽命的主要技術(shù),同軸脈沖光源發(fā)出的脈沖光引起起始光電倍增管產(chǎn)生電信號(hào),該信號(hào)通過恒分信號(hào)甄別器1啟動(dòng)時(shí)幅轉(zhuǎn)換器(time-amplitude converter,TAC),時(shí)幅轉(zhuǎn)換器產(chǎn)生一個(gè)隨時(shí)間線性增長的電壓信號(hào)。此外,同軸脈沖光源發(fā)出的脈沖光通過激發(fā)單色器后到達(dá)樣品池,樣品產(chǎn)生的熒光信號(hào)再經(jīng)過發(fā)射單色器到達(dá)終止光電倍增管,由此產(chǎn)生的電信號(hào)經(jīng)由恒分信號(hào)甄別器2到達(dá)時(shí)幅轉(zhuǎn)換器并使其停止工作。此時(shí),時(shí)幅轉(zhuǎn)換器根據(jù)累積電壓輸出一個(gè)數(shù)字信號(hào)并在多通道分析儀(multi-channel analyzer)的相應(yīng)時(shí)間通道計(jì)入一個(gè)信號(hào),表明檢測(cè)到壽命為該時(shí)間的一個(gè)光子。經(jīng)過幾十萬次的重復(fù)后,不同的時(shí)間通道累積下來的光子數(shù)目不相同。熒光壽命成像主要應(yīng)用領(lǐng)域包括:用于樣品分離。

熒光壽命成像在生物醫(yī)學(xué)研究和臨床診斷應(yīng)用中的許多場(chǎng)合都對(duì)多光譜分辨提出特殊要求,如在FRET測(cè)量中,要求能同時(shí)測(cè)量供體和受體的熒光強(qiáng)度隨時(shí)間的衰減,多光譜分辨的熒光壽命成像提供了一種新的定量研究手段.目前,基于門控像增強(qiáng)器的多光譜寬場(chǎng)FLIM 技術(shù)一次只能獲得至多兩個(gè)譜段的熒光壽命圖像,而基于TCSPC的多光譜分辨FLIM的成像速度又很低,這些都限制了其應(yīng)用范圍.目前的一個(gè)研究方向是,發(fā)展光譜分辨率高、成像速度快、價(jià)格低廉的多光譜分辨熒光壽命成像顯微技術(shù)。熒光壽命成像使用簡單,方便快捷,不需要進(jìn)行參數(shù)調(diào)節(jié)。上海顯微熒光壽命成像有哪些

熒光壽命成像不受光漂白的影響。廣州植物熒光壽命成像操作步驟

與熒光光譜一樣,熒光壽命也是熒光物質(zhì)的一種內(nèi)在特有性質(zhì),不受熒光物質(zhì)濃度、激發(fā)光強(qiáng)度等因素的影響。熒光壽命成像能在不受熒光強(qiáng)度影響因素影響的條件下,在納米分辨率水平對(duì)蛋白互作進(jìn)行研究,或者通過 FRET 探針研究分子環(huán)境變化,更重要的是其測(cè)量數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性高、易重復(fù)。通過熒光壽命成像還可以對(duì)樣本所處的微環(huán)境進(jìn)行檢測(cè)、對(duì)樣品組份進(jìn)行分離等等。在傳統(tǒng)的熒光強(qiáng)度和熒光光譜兩個(gè)維度的基礎(chǔ)上,又增加了熒光壽命這一新的成像維度,大幅度拓展了該系統(tǒng)的應(yīng)用范圍。廣州植物熒光壽命成像操作步驟

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