熒光壽命成像如何理解？熒光壽命成像主要通過TCSPC技術（Time-Correlated Single Photon Counting）實現(xiàn)。系統(tǒng)采用超短脈寬激光器作為激發(fā)光源，通過光路耦合器，將激光引入顯微光路。激光通過物鏡聚焦照射樣品池，利用光子探測裝置（PMT）對熒光信號進行探測，再用TCSPC計數(shù)器對每一個光子進行計數(shù)，并將其放入一個對應的時間窗口，經(jīng)過一定時間的統(tǒng)計疊加后即得到熒光壽命曲線。幾十萬次重復以后，不同的時間通道累積下來的光子數(shù)目不同。以光子數(shù)對時間作圖可得到熒光衰減曲線。實現(xiàn)從百ps-ns-us的瞬態(tài)測試。綜上所述由于TCSPC系統(tǒng)，一個激光脈沖只采集一個光子信號，所以激光器的重復頻率決定了系統(tǒng)的數(shù)據(jù)采集速度。重頻越高，采集速度越快，數(shù)據(jù)信噪比越好。熒光壽命成像具有200 nm的空間分辨率和皮秒量級的時間分辨率。上海植物熒光壽命成像制造
紅外熒光壽命成像技術在生物多重檢測中的應用。相比于熒光強度，熒光壽命的數(shù)值具有很好的穩(wěn)定性，不依賴于生物組織穿透深度。因此可以實現(xiàn)生物多重成像和量化診斷。該團隊利用能量延遲方法并結合對發(fā)光離子濃度的調(diào)控，實現(xiàn)NIR-II區(qū)單一波長下熒光壽命三個量級以上的精確調(diào)節(jié)。將這種成像方法應用于乳腺的精確診斷，其對標志物的定量檢測結果與傳統(tǒng)的免疫印跡法和免疫組織化學法相比有很好的一致性。而相比于后兩者一次只能對一種標志物進行檢測，這種新的時間維度成像方法可以原位實現(xiàn)同時定量多個標記物，并且減少了傳統(tǒng)檢測方法在組織切片的制作、處理以及評分過程中所導致結果的差異性。深圳三維熒光壽命成像研發(fā)熒光壽命成像可用于多種生物應用，包括組織表面掃描、組織類型繪圖、光動力治理、皮膚成像等。
熒光壽命成像是一種什么樣的技術？是一種新型的熒光成像技術，它能夠?qū)Σ煌N類或處于不同狀態(tài)的生物組織提供更好的對比度，并反映熒光團及其所處微環(huán)境參數(shù)的定量分布。熒光壽命成像一般不受諸如激光或熒光強度擾動、熒光染料分布不均勻、染料的光漂白以及其他有礙熒光強度的因素的影響,是熒光光譜分析法的有效補充。超快激光技術，高速、高靈敏度探測技術，以及圖像處理技術的發(fā)展，都促進了FLIM 技術的發(fā)展．尤其是將熒光壽命成像和共焦顯微技術以及多光子激發(fā)熒光顯微技術結合，進一步拓寬了FLIM在生物學領域的應用范圍。
熒光壽命成像是熒光基團在通過發(fā)射熒光光子返回基態(tài)之前在其激發(fā)態(tài)下保持平均多長時間的量度。不同熒光基團激發(fā)態(tài)停時間不同，大多數(shù)生物熒光素的熒光壽命時間在 0.2 - 20 ns。熒光壽命檢測經(jīng)典方法為點對點的時間相關單光子計數(shù)（TCSPC），但由于過去檢測硬件的局限和復雜的使用而沒有被普遍地應用于科學研究。隨著技術的發(fā)展，在顯微鏡視野內(nèi)進行超快速全像素熒光壽命信號采集的熒光壽命成像成為可能。熒光壽命成像具有不同于熒光強度成像的眾多優(yōu)點：不受染料濃度的影響，無論染色或免疫熒光的效率高或低，熒光壽命都能呈現(xiàn)一致的數(shù)據(jù)，這意味著更少的實驗數(shù)量和重復性更好的實驗結果。不受光漂白的影響，熒光發(fā)射時間不受激發(fā)光強度的影響，因此不存在光漂白問題。不受樣本厚度和光源噪聲的影響。隨著技術的發(fā)展，在顯微鏡視野內(nèi)進行超快速全像素熒光壽命信號采集的熒光壽命成像成為可能。
熒光成像技術涉及精確測量已添加到組織中的自然熒光分子或熒光標簽的熒光衰減率或壽命。由于壽命取決于分子環(huán)境的特性，如溫度和pH，以及其與周圍分子的相互作用，因此可利用熒光成像技術獲得有關分子性質(zhì)及其微環(huán)境的信息。通常，使用激光掃描共聚焦顯微鏡進行熒光成像技術，通過掃描激光束穿過熒光樣品以形成圖像，從而實現(xiàn)高分辨率。為了在宏觀尺度上獲得熒光成像的信息，研究人員開發(fā)了一種共焦的宏觀系統(tǒng)，該系統(tǒng)結合了激光和非常短的脈沖，利用只有皮秒的長度和非常靈敏的檢測器來檢測熒光。該系統(tǒng)還包括計算光子的電子器件，并繪制它們相對于激光脈沖和樣品上激光束位置的時間分布。熒光壽命成像圖像中每一個像素點在phasor圖上都有一個對應的點。深圳三維熒光壽命成像研發(fā)
熒光壽命成像提供了壽命分布的二維圖形視圖。上海植物熒光壽命成像制造
熒光壽命顯微成像（Fluorescence lifetime imaging microscopy,FLIM）是熒光壽命測量和熒光顯微技術的結合，已普遍應用于生物醫(yī)學研究和其他領域。FLIM具有高特異性、高靈敏度、可定量測量微環(huán)境變化和分子間相互作用、不受探針濃度、激發(fā)光強度和光漂白影響等優(yōu)點。在過去的十年中，光學技術硬件和軟件、材料科學和生物醫(yī)學的迅速發(fā)展，共同促進了FLIM技術及其應用的巨大進步。盡管經(jīng)過幾十年的技術發(fā)展，F(xiàn)LIM技術在實際應用中仍然面臨著一些挑戰(zhàn)，例如：FLIM的成像分辨率也會受到光衍射的限制，因此，在實際應用中，我們經(jīng)常需要在成像速度、圖像質(zhì)量和微環(huán)境壽命精度之間進行權衡。上海植物熒光壽命成像制造
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