影響熒光壽命成像測(cè)量的因素:高濃度樣品的影響:1)當(dāng)激發(fā)光照射高濃度樣品時(shí),在激發(fā)光入口附近產(chǎn)生熒光,但這些熒光并不能進(jìn)入熒光檢測(cè)器。2)高濃度的分子之間相互作用而發(fā)生活性阻礙現(xiàn)象。3)熒光的再吸收:即熒光光譜的短波長(zhǎng)端和激發(fā)光譜的長(zhǎng)波長(zhǎng)端如果相互重疊,則發(fā)生熒光再吸收。熒光壽命成像具有200 nm的空間分辨率和皮秒量級(jí)的時(shí)間分辨率。散射光的影響: 主要是瑞利散射光和拉曼散射光的影響較大。校正辦法:先用短的激發(fā)光激發(fā),檢出溶液的拉曼峰,然后進(jìn)行熒光光譜校正。因?yàn)闊晒夤庾V不隨激發(fā)光波長(zhǎng)的改變而改變,而拉曼光卻隨之改變。熒光壽命成像具高靈敏度、可檢測(cè)人體生物樣品等優(yōu)點(diǎn)。上海紅外熒光壽命成像費(fèi)用
為什么說(shuō)熒光壽命成像技術(shù)是先進(jìn)的?熒光壽命成像可以提供熒光強(qiáng)度(光子數(shù))和光子壽命的空間分布,具有200 nm的空間分辨率和皮秒量級(jí)的時(shí)間分辨率。通過(guò)雙光子激發(fā)(結(jié)合飛秒脈沖和共焦顯微鏡)可以直接檢測(cè)熒光和時(shí)間分辨的熒光壽命。這種無(wú)損檢測(cè)技術(shù),無(wú)需解剖或?qū)iT制造分層樣品,不但可在樣品表面,還可在樣品表面以下實(shí)現(xiàn)深度解析測(cè)量。特別適用于新材料、光子學(xué)、光伏、光催化、生物材料、納米材料和納米復(fù)合材料以及其相關(guān)的原理探究和設(shè)計(jì)優(yōu)化。安徽分子熒光壽命成像熒光壽命成像中的熒光壽命是什么意思?
熒光壽命成像顯微術(shù)是一種利用熒光染料固有特性的成像技術(shù)。除了具有特有的發(fā)射光譜外,每個(gè)熒光分子還有特有的壽命,它反映了熒光基團(tuán)在發(fā)射光子之前處于激發(fā)態(tài)的時(shí)間。除了標(biāo)準(zhǔn)的熒光強(qiáng)度測(cè)量外,壽命分析還可以提供其他信息。提高質(zhì)量,熒光壽命成像提供了額外的信息,有助提高共聚焦成像的質(zhì)量。 它非常適合用于區(qū)分熒光發(fā)射光譜重疊的熒光探針,或消除不需要的背景熒光信號(hào)。功能成像,F(xiàn)LIM 是一種用于測(cè)量和量化成像數(shù)據(jù)的重要應(yīng)用。 由于壽命信息與熒光基團(tuán)濃度無(wú)關(guān),因此它非常適合用于功能成像。功能成像超越了傳統(tǒng)的分子樣本位置和濃度記錄,通過(guò)該技術(shù)可以進(jìn)一步研究分子功能、相互作用及其環(huán)境。
熒光壽命的測(cè)量和熒光壽命成像主要有時(shí)間相關(guān)單光子計(jì)數(shù)法(time correlated single photon counting, TCSPC)、門控探測(cè)法(time-gated detection)、條紋相機(jī)測(cè)量法(streak-FLIM)、頻閃技術(shù)等四種常見(jiàn)的方法。TCSPC是目前測(cè)量熒光壽命的主要技術(shù),同軸脈沖光源發(fā)出的脈沖光引起起始光電倍增管產(chǎn)生電信號(hào),該信號(hào)通過(guò)恒分信號(hào)甄別器1啟動(dòng)時(shí)幅轉(zhuǎn)換器(time-amplitude converter,TAC),時(shí)幅轉(zhuǎn)換器產(chǎn)生一個(gè)隨時(shí)間線性增長(zhǎng)的電壓信號(hào)。此外,同軸脈沖光源發(fā)出的脈沖光通過(guò)激發(fā)單色器后到達(dá)樣品池,樣品產(chǎn)生的熒光信號(hào)再經(jīng)過(guò)發(fā)射單色器到達(dá)終止光電倍增管,由此產(chǎn)生的電信號(hào)經(jīng)由恒分信號(hào)甄別器2到達(dá)時(shí)幅轉(zhuǎn)換器并使其停止工作。熒光壽命成像不但可在樣品表面,還可在樣品表面以下實(shí)現(xiàn)深度解析測(cè)量。
熒光壽命成像可以干什么?熒光壽命成像圖像中每一個(gè)像素點(diǎn)在phasor圖上都有一個(gè)對(duì)應(yīng)的點(diǎn)。因此我們可以獲取每個(gè)像素點(diǎn)的壽命信息,也可以獲知每一壽命所對(duì)應(yīng)的圖像區(qū)域。熒光壽命成像可以提供熒光強(qiáng)度(光子數(shù))和光子壽命的空間分布,具有200 nm的空間分辨率和皮秒量級(jí)的時(shí)間分辨率。通過(guò)雙光子激發(fā)(結(jié)合飛秒脈沖和共焦顯微鏡)可以直接檢測(cè)熒光和時(shí)間分辨的熒光壽命。這種無(wú)損檢測(cè)技術(shù),無(wú)需解剖或?qū)iT制造分層樣品,不但可在樣品表面,還可在樣品表面以下實(shí)現(xiàn)深度解析測(cè)量。特別適用于新材料、光子學(xué)、光伏、光催化、生物材料、納米材料和納米復(fù)合材料以及其相關(guān)的原理探究和設(shè)計(jì)優(yōu)化。熒光壽命成像主要可以用于樣品分離。杭州開放式熒光壽命成像采購(gòu)
熒光壽命(FLT)是熒光團(tuán)在發(fā)射光子并返回基態(tài)之前花費(fèi)在激發(fā)態(tài)的時(shí)間。上海紅外熒光壽命成像費(fèi)用
熒光壽命成像分析是什么?熒光壽命是用于幾種生物測(cè)定的穩(wěn)健參數(shù)。它有可能替代傳統(tǒng)的測(cè)量技術(shù),如吸收法、冷光法或熒光強(qiáng)度法。熒光團(tuán)物理化學(xué)環(huán)境的任何變化都會(huì)導(dǎo)致熒光壽命的改變??赏ㄟ^(guò)各種機(jī)制來(lái)研發(fā)基于壽命的分析,例如簡(jiǎn)單的結(jié)合測(cè)定,涉及到兩個(gè)組分的結(jié)合(一個(gè)被熒光標(biāo)記)而引起FLT的變化。另一種機(jī)制是猝滅釋放型測(cè)定,涉及大量過(guò)量存在的猝滅物質(zhì),其具有低而有限的熒光。一旦熒光化合物被釋放(通過(guò)酶促反應(yīng)或與互補(bǔ)DNA結(jié)合),系統(tǒng)的壽命就會(huì)改變。FLT可與FRET(熒光共振能量轉(zhuǎn)移)分析結(jié)合用于能量轉(zhuǎn)移效率測(cè)量。上海紅外熒光壽命成像費(fèi)用
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