腦定位動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)

brain：腦組織；liver：肝臟；retina：視網(wǎng)膜，intestine：腸；muscle：肌肉；heart：心臟；kidney：腎臟；spleen：脾；b：圖1中a的統(tǒng)計(jì)結(jié)果；c:westernblot檢測gm20541蛋白在不同組織的表達(dá)；d:圖1中c的統(tǒng)計(jì)結(jié)果。圖2：gm20541基因敲除小鼠的構(gòu)建路線；圖中sixko或cko表示gm20541基因敲除純合子小鼠；ctr是指野生型；het是指雜合子。圖3：中長距離pcr鑒定子一代鼠的結(jié)果；圖中：a：擴(kuò)增5’端長臂使用引物對(duì)gm5’lrf和sa3’r,擴(kuò)增產(chǎn)物為；其中a2,3,6,9,10,b1為陽性；b：擴(kuò)增3’端長臂使用引物對(duì)neof和gm3’lrr，擴(kuò)增產(chǎn)物為。其中：a2,3,6,9,10,b6,9,es1g,es2g為陽性雜合子，+/+為野生型對(duì)照。圖4：gm20541基因敲除小鼠的鑒定；a：gm20541基因敲除小鼠的基因型鑒定結(jié)果；b：實(shí)時(shí)定量pcr實(shí)驗(yàn)分析gm20541敲除小鼠視網(wǎng)膜中基因敲除效率，證明gm20541在敲除小鼠視網(wǎng)膜中不再表達(dá)；sixko或cko表示gm20541基因敲除純合子小鼠；ctr是指野生型；het是指雜合子。圖5：暗適應(yīng)視網(wǎng)膜電圖(electroretinogram,erg)檢測結(jié)果；圖中：a-c：不同光強(qiáng)下gm20541基因敲除小鼠的暗適應(yīng)視網(wǎng)膜電圖軌跡圖；d：不同光強(qiáng)下gm20541基因敲除小鼠的暗適應(yīng)視網(wǎng)膜電圖a波統(tǒng)計(jì)。通過建立腦缺血-再灌注動(dòng)物模型，模擬人類ICVD的病理過程。腦定位動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)

微波爐中融化后制成1％的瓊脂糖膠。取10μlpcr產(chǎn)物于加樣孔中，120v恒壓瓊脂糖電泳15min.用凝膠成像系統(tǒng)成像。圖4中a上方是gm20541條件性敲除鑒定結(jié)果，wt表示野生型對(duì)照，條帶大小為223bp；het表示雜合子，有兩個(gè)條帶223bp和358bp；sixko表示純合子，條帶大小為358bp。圖4中a下方是six3－cre鑒定結(jié)果。six3－cre大小為200bp。根據(jù)圖4中a的結(jié)果，顯示所采用的鑒定方法可對(duì)新生小鼠的基因型進(jìn)行有效鑒定。其中，gm20541基因敲除純合子小鼠即可作為視網(wǎng)膜色素變性疾病模型(后文用sixko或cko表示gm20541基因敲除純合子小鼠；ctr是指野生型；het是指雜合子)，并進(jìn)行相關(guān)表型的驗(yàn)證。(5)rt-pcr實(shí)驗(yàn)分析six3-cre敲除小鼠視網(wǎng)膜中基因敲除效率驗(yàn)證，方法如下：(a)分別分離野生型和突變型小鼠視網(wǎng)膜組織，置于，加入1mltrizol提取液，室溫20分鐘；(b)加入200μl氯仿，充分混勻，室溫靜置10分鐘；(c)將樣品置于4度離心機(jī)，10000轉(zhuǎn)離心15分鐘；(d)小心吸取上清液，加入等體積異丙醇，充分混勻，10000轉(zhuǎn)離心沉淀rna；(e)75％乙醇清洗析出的總rna，離心再次沉淀，然后晾干加入depc水溶解；(f)提取的總rna用cdna合成試劑盒(invitrogen,waltham,ma,usa)合成cdna。腦定位動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)大鼠、小鼠動(dòng)物疾病模型技術(shù)。

再向老師、師兄師姐學(xué)習(xí)經(jīng)驗(yàn)和技術(shù)，如果實(shí)驗(yàn)平臺(tái)的儀器需要提前預(yù)約，建議提前規(guī)劃好使用的時(shí)間。反復(fù)總結(jié)尋找答案在整個(gè)預(yù)實(shí)驗(yàn)的過程中可能會(huì)出現(xiàn)很多問題。比如造模效果欠佳、灌胃操作不當(dāng)、腹腔注射操作失誤、物使用不當(dāng)?shù)纫饎?dòng)物死亡。每遇到問題都需要自己想辦法解決，可以從導(dǎo)師、師兄師姐、文獻(xiàn)、貼吧、視頻教程等找到答案。比如筆者曾遇到同樣的物給藥，發(fā)現(xiàn)有的大鼠麻醉得很深，有的大鼠還活蹦亂跳，在反復(fù)嘗試調(diào)整濃度，給藥劑量，更換麻醉方式，后來才發(fā)現(xiàn)是動(dòng)物體重秤的準(zhǔn)度有問題，導(dǎo)致體重秤得不準(zhǔn)。因此，需要自己反復(fù)琢磨到底是實(shí)驗(yàn)過程中哪一個(gè)環(huán)節(jié)出現(xiàn)問題，逐一排除。也要求在每一個(gè)實(shí)驗(yàn)步驟需要標(biāo)準(zhǔn)化，統(tǒng)一化，盡可能的排除干擾因素，這樣方便在遇到問題快的找到答案。同時(shí)，建議每日總結(jié)，大到動(dòng)物死亡原因分析，小到灌胃操作耗時(shí)多長時(shí)間。建議反復(fù)總結(jié)出每天實(shí)驗(yàn)的優(yōu)缺點(diǎn)。做任何一個(gè)操作之前，建議提前腦海中反復(fù)模擬，準(zhǔn)備好相關(guān)工具和試劑，避免臨用之際缺少藥的，影響實(shí)驗(yàn)操作節(jié)奏和個(gè)人心情。筆者曾經(jīng)灌胃操作的時(shí)候發(fā)現(xiàn)藥物竟然忘帶了，只好重新回實(shí)驗(yàn)室準(zhǔn)備，那真叫一個(gè)郁悶。仔細(xì)記錄每日實(shí)驗(yàn)過程無論是碩士還是博士。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的在于提供利用gm20541基因構(gòu)建視網(wǎng)膜色素變性疾病模型的方法和應(yīng)用，采用該構(gòu)建方法可以得到視網(wǎng)膜色素變性疾病模型，該模型可表現(xiàn)出視網(wǎng)膜色素變性性疾病特征，該模型可用于視網(wǎng)膜色素變性性疾病的研究，可以幫助闡明rp的發(fā)病過程及機(jī)制，并為該疾病的或預(yù)防提供新的靶標(biāo)。本發(fā)明是這樣實(shí)現(xiàn)的：方面，本發(fā)明實(shí)施例提供了一種利用gm20541基因構(gòu)建視網(wǎng)膜色素變性疾病模型的方法，其包括：敲除目標(biāo)動(dòng)物視網(wǎng)膜前體細(xì)胞中的基因組中的gm20541基因。心力衰竭(heart failure)簡稱心衰,是指由于心臟的收縮功能和(或)舒張功能發(fā)生障礙。

導(dǎo)師給我們上的堂課往往就是交代我們要詳細(xì)記好實(shí)驗(yàn)記錄，只要是和實(shí)驗(yàn)相關(guān)的，無論是照片，還是文字，必須要及時(shí)事無巨細(xì)地詳細(xì)記錄。并且要備份好每一份實(shí)驗(yàn)記錄。我個(gè)人一般喜歡每天及時(shí)地記在「科研實(shí)驗(yàn)記錄本」上面，然后拍照掃描成電子版儲(chǔ)存在電腦和云端。時(shí)間規(guī)劃首先，個(gè)人是不贊同每天24小時(shí)泡在實(shí)驗(yàn)室的，高效率是關(guān)鍵。建議提前一天規(guī)劃好第二天需要做的事情，按照代辦事項(xiàng)的格式逐條列出，哪一個(gè)時(shí)間段需要做什么事情？這樣的好處有兩點(diǎn)，一個(gè)是自己提前把時(shí)間預(yù)約好，可以留出足夠的時(shí)間休息和娛樂；另一個(gè)是在執(zhí)行計(jì)劃的時(shí)候往往會(huì)有一種時(shí)間緊迫感，辦事起來往往更高效且不會(huì)遺漏?？傊?，預(yù)實(shí)驗(yàn)就是迷你版正式實(shí)驗(yàn)，希望小伙伴們?cè)谶M(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)的時(shí)候一定要盡可能地準(zhǔn)備周全，這樣才能快的推進(jìn)正式實(shí)驗(yàn)。特發(fā)性肺纖維化（IPF）小鼠模型建立。湖南乳鼠動(dòng)物模型構(gòu)建

建立SD大鼠頸動(dòng)脈損傷（結(jié)扎套管）模型。腦定位動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)

堿燒傷致角膜損傷大鼠模型一、服務(wù)信息1、動(dòng)物模型名稱：堿燒傷致角膜損傷大鼠模型2、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物種屬：SD大鼠3、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物性別：雌雄不限4、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物年齡：成年5、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體重：160-200g6、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物環(huán)境：SPF級(jí)二、服務(wù)項(xiàng)目服務(wù)編號(hào)服務(wù)內(nèi)容服務(wù)周期價(jià)錢DH2020堿燒傷致角膜損傷大鼠模型1周詢價(jià)1、實(shí)驗(yàn)方法：氫氧化鈉致大鼠角膜化學(xué)性損傷。大鼠用戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉，用干棉棒拭去結(jié)膜囊多余液體，將統(tǒng)一規(guī)格直徑3mm的圓形濾紙片浸入1mol/LNaOH溶液中20s，飽和后取出置于干燥濾紙上1秒以吸去過多的堿液，將濾紙片貼敷于大鼠右眼角膜90s后移去，立即用滅菌水沖洗結(jié)膜囊及角膜2min。2、檢測標(biāo)準(zhǔn)：肉眼或裂隙燈下觀察到角膜有損傷。三、交付標(biāo)準(zhǔn):1.提供動(dòng)物模型構(gòu)建過程中的原始實(shí)驗(yàn)記錄及數(shù)據(jù)圖片。2.根據(jù)要求提供構(gòu)建成功的模型動(dòng)物或相關(guān)組織材料。四、服務(wù)項(xiàng)目說明：1、如有特殊要求，請(qǐng)另詢價(jià)。2、雙方簽訂合同后，收取70%首付后啟動(dòng)實(shí)驗(yàn)。腦定位動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)