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來源: 發(fā)布時間:2025-10-17

***是內(nèi)分泌腺或細胞分泌的、通過血液循環(huán)作用于靶***的化學信使。準確測定***水平對于內(nèi)分泌疾病的診斷、***監(jiān)測和生理研究至關(guān)重要。ELISA是臨床和科研中檢測多種***的主流技術(shù)?!z測對象:血清、血漿、尿液(如24h尿皮質(zhì)醇)中的肽類/蛋白類***和部分小分子類固醇***(需競爭法)。o肽類/蛋白類***:胰島素、C肽、胰***素、生長***(GH)、促腎上腺皮質(zhì)***(ACTH)、促甲狀腺***(TSH)、黃體生成素(LH)、卵泡刺***(FSH)、泌乳素(PRL)、甲狀旁腺***(PTH)、降鈣素等。通常使用夾心法。o類固醇***:皮質(zhì)醇、睪酮、雌二醇(E2)、孕酮(P)、脫氫表雄酮(DHEA-S)、25-羥基維生素D等。由于是小分子,主要采用競爭法ELISA。也可檢測尿液中的***代謝物(如雌三醇)。國際品牌如R&D Systems的試劑盒質(zhì)量較有保障。貴州進口ELISA試劑盒價格實惠

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樣本的質(zhì)量是ELISA成功的基礎(chǔ)。樣本類型多樣,包括血清、血漿、細胞培養(yǎng)上清、組織裂解液、尿液、唾液、腦脊液等。不同樣本的處理要求不同:·血清/血漿:是臨床檢測**常用的樣本。**后需盡快分離(血漿需抗凝劑,血清需自然凝固)。避免溶血(紅細胞破裂釋放內(nèi)容物干擾)、脂血(脂質(zhì)干擾光學檢測)和反復凍融(破壞蛋白)。通常需離心去除顆粒物。儲存于-20°C或-80°C?!ぜ毎囵B(yǎng)上清:收集時避免細胞碎片(需離心)。注意培養(yǎng)基中的酚紅可能干擾吸光度讀數(shù)(450nm附近),可能需要更換無酚紅培養(yǎng)基或設(shè)置含培養(yǎng)基的空白對照。·組織裂解液:需要勻漿或研磨組織,使用含蛋白酶抑制劑的裂解液提取總蛋白。離心取上清。蛋白濃度差異大,常需測定總蛋白濃度(如BCA法)并調(diào)整上樣量或稀釋度?!て渌w液:如尿液、唾液等,成分復雜,干擾物多,常需特殊處理(如離心、過濾、添加穩(wěn)定劑)和更高倍數(shù)的稀釋。關(guān)鍵原則:盡快處理、低溫保存、避免反復凍融、充分混勻、按說明書要求稀釋(使用試劑盒提供的稀釋液比較好)、記錄處理過程。不恰當?shù)臉颖咎幚硎荅LISA結(jié)果偏差和失敗的**常見原因之一。國產(chǎn)ELISA試劑盒以客為尊ELISA試劑盒是一種基于酶聯(lián)免疫吸附原理的高靈敏度檢測工具。

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在檢測系統(tǒng)集成方面,現(xiàn)代ELISA檢測正向"樣本進-結(jié)果出"的全自動化方向發(fā)展。以西門子ADVIA Centaur XP、雅培Architect i2000SR等全自動化學發(fā)光免疫分析系統(tǒng)為**,整合了樣本前處理、試劑存儲、溫控孵育、信號檢測和數(shù)據(jù)分析等完整流程,真正實現(xiàn)了檢測過程的無人化操作。這些系統(tǒng)通常配備智能軟件管理系統(tǒng),可自動進行質(zhì)控監(jiān)測、結(jié)果判讀和數(shù)據(jù)存儲,確保檢測結(jié)果的可追溯性。未來,隨著人工智能算法的引入,ELISA檢測系統(tǒng)將具備更強的異常結(jié)果識別能力和自動優(yōu)化功能,進一步推動免疫檢測技術(shù)向智能化方向發(fā)展。

ELISA技術(shù)歷經(jīng)數(shù)十年發(fā)展仍被廣泛應(yīng)用,歸功于其***的優(yōu)點:1.高靈敏度:通過酶促反應(yīng)放大信號,可檢測皮克(pg/mL)甚至飛克(fg/mL)級別的目標分子,遠高于許多傳統(tǒng)生化方法。2.高特異性:基于抗原-抗體高度特異的結(jié)合反應(yīng),尤其是使用單克隆抗體的夾心法,能有效區(qū)分結(jié)構(gòu)相似的分子。3.高通量:96孔板(或更多孔)的設(shè)計允許同時處理大量樣品和標準品,結(jié)合自動化設(shè)備(移液工作站、洗板機、酶標儀),非常適合大規(guī)模篩查和批量檢測。4.相對簡便快速:試劑盒化使得操作流程標準化,無需復雜設(shè)備(基礎(chǔ)實驗室配備移液器、孵育箱、洗板設(shè)備、酶標儀即可),實驗時間通常在幾小時內(nèi)完成。5.可定量:通過標準曲線可實現(xiàn)目標物的精確定量分析。6.應(yīng)用范圍極其***:可檢測幾乎所有類型的生物分子(蛋白質(zhì)、多肽、***、抗體、病原體抗原、小分子半抗原等),樣本來源多樣(血清、血漿、細胞上清、組織裂解液、尿液等)。7.成本效益相對較高:與質(zhì)譜、測序等更高級技術(shù)相比,儀器和試劑成本較低,單個樣本檢測成本可控。8.結(jié)果可視化/客觀化:顯色反應(yīng)肉眼可見(定性),吸光度讀數(shù)提供客觀數(shù)據(jù)。過期試劑盒可能導致假陽性或假陰性結(jié)果。

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顯色反應(yīng)是將酶催化轉(zhuǎn)化為可檢測信號的關(guān)鍵步驟,需要精確控制?!さ孜餃蕚洌喊凑f明書要求配制或平衡底物溶液(TMB通常需平衡至室溫,避免低溫影響反應(yīng)速率)。避光保存(尤其TMB對光敏感)。確保底物新鮮,無沉淀或變色。·加底物:使用多通道移液器或排***快速、均一地向所有孔加入等量底物(避免產(chǎn)生氣泡)。記錄準確的加底物時間點,因為反應(yīng)是動態(tài)進行的?!け芄夥跤簩⑽⒖装逯糜诎堤帲ɑ蛏w上避光蓋)按說明書要求的時間(通常5-30分鐘)和溫度(通常是室溫或37°C)進行孵育。顯色時間對結(jié)果影響很大,時間過短信號弱,時間過長可能飽和或背景升高。如需精確控制,可設(shè)置定時器?!そK止反應(yīng):當陽性對照孔顯色達到預期(如TMB顯藍色,標準曲線梯度明顯)或達到預定時間時,立即按相同順序和速度向每孔加入終止液(如HRP-TMB系統(tǒng)用1M或2MH?SO?)。終止液會改變pH,使酶失活并穩(wěn)定顏色(如TMB變黃)。加入終止液后,顏色會迅速變化并穩(wěn)定下來(但仍建議盡快讀數(shù))?!ぷx數(shù)窗口:終止后,應(yīng)在說明書規(guī)定的時間內(nèi)(通常5-30分鐘內(nèi))完成吸光度讀數(shù)。放置時間過長,顏色可能緩慢褪去或沉淀,影響準確性。競爭性ELISA適用于小分子物質(zhì)的檢測。陜西兔ELISA試劑盒售價

自動化洗板機可提高大規(guī)模檢測的重復性。貴州進口ELISA試劑盒價格實惠

自身免疫病的特征是機體免疫系統(tǒng)錯誤地攻擊自身組織。檢測血清中的自身抗體是診斷、分型、評估疾病活動度和預后的重要手段。ELISA因其高通量和定量能力,成為檢測自身抗體的優(yōu)先方法之一?!こR姍z測靶點:o抗核抗體(ANA):篩查系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)等結(jié)締組織病。ELISA可檢測針對特定核抗原(如dsDNA,Sm,RNP,SSA/Ro,SSB/La,Scl-70,Jo-1)的特異性抗體。o類風濕因子(RF):檢測針對自身IgGFc段的抗體,與類風濕關(guān)節(jié)炎(RA)相關(guān)(但也見于其他疾病和健康老人)。o抗環(huán)瓜氨酸肽抗體(Anti-CCP):對RA診斷特異性高。o抗中性粒細胞胞漿抗體(ANCA):如c-ANCA(抗PR3,韋格納肉芽腫)、p-ANCA(抗MPO,顯微鏡下多血管炎)。o抗磷脂抗體(aPL):如抗心磷脂抗體(aCL)、抗β2糖蛋白I抗體(anti-β2GPI)、狼瘡抗凝物(LA),與抗磷脂綜合征(APS)相關(guān)。o***特異性抗體:如抗甲狀腺過氧化物酶抗體(TPOAb)、抗甲狀腺球蛋白抗體(TgAb)(橋本甲狀腺炎);抗谷氨酸脫羧酶抗體(GADAb)、抗胰島細胞抗體(ICA)(1型糖尿病);抗組織谷氨酰胺轉(zhuǎn)移酶抗體(tTG-IgA)(乳糜瀉)。貴州進口ELISA試劑盒價格實惠