酶聯(lián)免疫吸附測定(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay, ELISA)是現(xiàn)***物醫(yī)學(xué)研究和臨床診斷中不可或缺的基石技術(shù)之一。其**原理是利用抗原-抗體特異性結(jié)合的高親和力與酶催化的高效信號(hào)放大作用相結(jié)合。簡單來說,就是將待測物(抗原或抗體)特異性吸附(固定)在固相載體(通常是96孔聚苯乙烯微孔板)表面,然后加入酶標(biāo)記的抗體或抗原進(jìn)行特異性識(shí)別結(jié)合。洗去未結(jié)合的物質(zhì)后,加入該酶的相應(yīng)底物。酶催化底物發(fā)生顯色、發(fā)光或熒光反應(yīng),產(chǎn)生的信號(hào)強(qiáng)度與待測樣品中目標(biāo)分子的含量在一定范圍內(nèi)呈正相關(guān)(或負(fù)相關(guān),取決于檢測模式)。通過測量吸光度、發(fā)光值或熒光強(qiáng)度,并與已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)品繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行比較,即可對(duì)待測樣品中的目標(biāo)物進(jìn)行定量或定性分析。這種巧妙的設(shè)計(jì)賦予了ELISA極高的靈敏度和特異性,使其能夠檢測極低濃度(皮克甚至飛克級(jí)別)的生物分子。部分標(biāo)志物檢測試劑盒已獲CFDA認(rèn)證。新疆人ELISA試劑盒價(jià)格實(shí)惠

·非特異性結(jié)合:基質(zhì)中的蛋白質(zhì)、脂質(zhì)、DNA等非特異性吸附到固相或抗體上,增加背景或阻斷特異性結(jié)合?!そY(jié)合蛋白的競爭:目標(biāo)物(如***)可能與基質(zhì)中的結(jié)合蛋白(如白蛋白、球蛋白)結(jié)合,減少其與檢測抗體的有效結(jié)合?!っ敢种苿┗?**劑:基質(zhì)中存在抑制或***報(bào)告酶(HRP/ALP)活性的物質(zhì)(如某些抗體、膽紅素、抗壞血酸、EDTA)。·異嗜性抗體(HeterophilicAntibodies):人血清中存在的能與多種動(dòng)物(如鼠、羊、兔)IgGFc段低親和力結(jié)合的抗體,能在沒有目標(biāo)抗原的情況下橋接捕獲抗體(鼠源)和酶標(biāo)檢測抗體(如羊抗鼠),導(dǎo)致假陽性。類風(fēng)濕因子(RF,抗人IgGFc的自身抗體)也可能干擾?!じ咧Y、溶血:影響光學(xué)檢測。識(shí)別基質(zhì)效應(yīng):通過回收率實(shí)驗(yàn)(RecoveryTest)和線性稀釋實(shí)驗(yàn)(LinearityofDilution)來評(píng)估。河南豬ELISA試劑盒比色法ELISA結(jié)果通常以450nm為檢測波長。

直接法(DirectELISA)是**簡單的形式,但應(yīng)用相對(duì)較少。其步驟為:1.包被抗原:將抗原直接固定在微孔板上。2.封閉。3.加酶標(biāo)一抗:加入酶標(biāo)記的特異性一抗,直接與包被抗原結(jié)合。4.洗滌:洗去未結(jié)合的酶標(biāo)一抗。5.加底物顯色。6.終止與讀數(shù)。信號(hào)強(qiáng)度與包被抗原的量成正比。也可用于檢測抗體(包被抗體,加酶標(biāo)抗原)。直接法省去了二抗步驟,操作更快,減少了交叉反應(yīng)的可能性。但主要缺點(diǎn)在于每個(gè)待測抗體都需要單獨(dú)進(jìn)行酶標(biāo)記,成本高且繁瑣;信號(hào)放大作用弱(沒有二抗或多層反應(yīng)),靈敏度通常較低。主要用于某些特定研究或高通量初篩。
相較于傳統(tǒng)的儀器分析方法(如高效液相色譜法 HPLC、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法 GC-MS),ELISA 技術(shù)具有***的優(yōu)勢。首先,其前處理流程簡單,大多數(shù)樣本*需均質(zhì)、提取、離心等基本操作即可上機(jī)檢測,省去了復(fù)雜的純化步驟,單個(gè)樣本的檢測時(shí)間可縮短至 1 小時(shí)內(nèi),大幅提高了檢測效率。其次,ELISA 試劑盒的成本較低,無需依賴昂貴的儀器設(shè)備,*需酶標(biāo)儀即可完成檢測,特別適合基層檢測機(jī)構(gòu)、市場監(jiān)管部門及企業(yè)自檢使用。此外,ELISA 技術(shù)可同時(shí)處理 96 孔板樣本,適用于大規(guī)模篩查,在突發(fā)食品安全事件中能夠快速鎖定問題批次,為監(jiān)管部門提供及時(shí)的數(shù)據(jù)支持。ELISA試劑盒的保存條件通常為2-8℃避光。

ELISA(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn))技術(shù)在食品安全檢測領(lǐng)域發(fā)揮著不可替代的作用,尤其適用于農(nóng)藥殘留、獸藥殘留、非法添加劑及生物***等有害物質(zhì)的快速篩查。針對(duì)不同食品基質(zhì)的檢測需求,市場上已開發(fā)出多種高靈敏度和高特異性的 ELISA 試劑盒,如牛奶中的三聚氰胺、肉類中的瘦肉精(如克倫特羅、萊克多巴胺)、水產(chǎn)品中的孔雀石綠、糧食中的黃曲霉***等。這些試劑盒通常采用競爭法或間接法檢測原理,通過抗原-抗體的特異性結(jié)合反應(yīng),實(shí)現(xiàn)對(duì)目標(biāo)物的定量或半定量分析。競爭性ELISA適用于小分子物質(zhì)的檢測。河南豬ELISA試劑盒
多克隆抗體包被的試劑盒檢測范圍更廣。新疆人ELISA試劑盒價(jià)格實(shí)惠
標(biāo)準(zhǔn)品(Standards)是ELISA定量分析的“尺子”。它是一系列已知精確濃度的目標(biāo)抗原(或抗體)溶液,濃度梯度覆蓋預(yù)期的檢測范圍(如0, 15.6, 31.2, 62.5, 125, 250, 500, 1000 pg/mL)。標(biāo)準(zhǔn)品通常由高純度的重組蛋白或天然純化蛋白配制在含有保護(hù)劑(如BSA)的緩沖液中。用戶需要嚴(yán)格按照說明書稀釋(如果需要)并隨樣品一起進(jìn)行檢測。將標(biāo)準(zhǔn)品測得的信號(hào)值(OD值)對(duì)其濃度作圖,即可繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(通常為四參數(shù)或雙對(duì)數(shù)曲線)。通過這條曲線,才能將未知樣品的信號(hào)值轉(zhuǎn)換為濃度值。質(zhì)控品(Quality Controls, QCs)則是已知濃度(通常在標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍內(nèi)的高、中、低值)但濃度對(duì)用戶保密的樣品,用于監(jiān)控整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程的準(zhǔn)確性和精密度。運(yùn)行質(zhì)控品是評(píng)估試劑盒性能和操作是否正常的重要手段。新疆人ELISA試劑盒價(jià)格實(shí)惠