缺口平移法是**常用的探針標(biāo)記法,反應(yīng)體系的主要成分有DNA酶I(DNase I)、大腸桿菌DNA聚合酶I(DNA polymerase I)、三種三磷酸脫氧核糖核苷酸、一種同位素標(biāo)記的核苷酸(如dATP、dTTP、dCTP,”P—dGTP),其原理如圖1。首先用適當(dāng)濃度的DNA酶I在探針DNA雙鏈分子上隨機切開若干個缺口(不是切斷DNA或?qū)⑵浣到猓?,然后再借助于DNA聚合酶I的5 '→3'的外切酶活性,切去5’末端的核苷酸;同時又利用該酶的5’→3’聚合酶活性,使32P標(biāo)記的互補核苷酸補入缺口.DNA聚合酶I的這兩種活性的交替作用,使缺口不斷向3’的方向移動,DNA鏈上的核苷酸不斷為32P標(biāo)記的核苷酸所取代。由于反應(yīng)體系中含有同位素標(biāo)記的單核苷酸,使新合成的鏈帶有同位素標(biāo)記,所以缺口平移實際上是同位素標(biāo)記的核苷酸取代了原DNA鏈中不帶同位素的同種核苷酸。電子探針主要由電子光學(xué)系統(tǒng)(鏡筒),X射線譜儀和信息記錄顯示系統(tǒng)組成。嘉定區(qū)特制探針維修價格

電子探針是運用電子所形成的探測針(細(xì)電子束)作為X射線的激發(fā)源來進(jìn)行顯微X射線光譜分析的儀器。分析對象是固體物質(zhì)表面細(xì)小顆?;蛭⑿^(qū)域,**小范圍直徑為1μm。電子探針可測量的化學(xué)成分的元素范圍一般從原子序數(shù)12(Mg)至92(U),原子序數(shù)大于22的元素可在空氣通路的X射線光譜儀上進(jìn)行測量。電子探針的靈敏度低于X射線熒光光譜儀,原因是電子探針X射線的本底值高于后者,但電子探針的***感量比其他儀器都高。此外,后期生產(chǎn)的儀器,可作X射線背散射照相、******照相。能兼作透射電鏡、能進(jìn)行電子衍射、能作電子熒光觀察等。崇明區(qū)質(zhì)量探針按需定制電子探針的構(gòu)成除了與掃描電鏡結(jié)構(gòu)相似的主機系統(tǒng)以外,還主要包括分光系統(tǒng)、檢測系統(tǒng)等部分。

(1)電子光學(xué)系統(tǒng)。電子束直徑0.1~1μm,電子束穿透深度1~3μm。被激發(fā)原子發(fā)射特征X射線譜過程如下:圍繞原子核運動的內(nèi)層電子,被電子束的電子轟擊后,其他外層電子為補充轟擊出的電子而發(fā)生躍遷,在躍遷過程中釋放出能量,即發(fā)射出X射線。(2)X射線譜儀。測量各種元素產(chǎn)生的X射線波長和強度,并以此對微小體積中所含元素進(jìn)行定性和定量分析。特征X射線圖像顯像管的原理是:X射線束入射到一已知晶面間距的晶體上(X射線分光光度計的彎曲晶體上),經(jīng)衍射后各種波長的X射線按不同的布拉格角彼此分開,因此如轉(zhuǎn)動晶體,改變衍射角,同時以兩倍于晶體的轉(zhuǎn)速轉(zhuǎn)動計數(shù)器,就可以依次測量出各種元素所產(chǎn)生的X射線波長和強度,達(dá)到定性和定量分析的目的。
探針DNA克隆的篩選也可采用血清學(xué)方法,所不同的是所建DNA文庫為可表達(dá)性,克隆菌落或噬斑經(jīng)裂解后釋放出表達(dá)抗原,然后用來源細(xì)菌的多克隆抗血清篩選陽性克隆,所得到多個陽性克隆再經(jīng)其它細(xì)菌的抗血清篩選,***只與本細(xì)菌抗血清反應(yīng)的表達(dá)克隆即含有此細(xì)菌的特異性基因片段,它所編碼的蛋白是該菌種所特有的。用這種表達(dá)文庫篩選得到的顯然只是特定基因探針。對于基因探針的克隆尚有更快捷的途徑。這也是許多重要蛋白質(zhì)的編碼基因的克隆方法。該方法的第一步是分離純化蛋白質(zhì),然后測定該蛋白的氨基或羥基末端的部分氨基酸序列,然后根據(jù)這一序列合成一套寡核苷酸探針。近年形成了掃描電鏡-顯微分析儀的聯(lián)合裝置,可在觀察微區(qū)形貌的同時逐點分析試樣的化學(xué)成分及結(jié)構(gòu)。

為了確定探針是否與相應(yīng)的基因組DNA雜交,有必要對探針加以標(biāo)記,以便在結(jié)合部位獲得可識別的信號,通常采用放射性同位素32P標(biāo)記探針的某種核苷酸α磷酸基。但近年來已發(fā)展了一些用非同位素如生物素-親合素系統(tǒng)、地高辛配體等作為標(biāo)記物的方法。非同位素標(biāo)記的優(yōu)點是保存時間較長,而且避免了同位素的污染。**常用的探針標(biāo)記法是缺口平移法(nick translation)。首先用適當(dāng)濃度的DNA酶Ⅰ(DNAseⅠ)在探針DNA雙鏈上造成缺口,然后再借助于DNA聚合酶Ⅰ(DNa poly merasⅠ)的5’→3’的外切酶活性,切去帶有5’磷酸的核苷酸;同時又利用該酶的5’→3’聚酶活性,使32P標(biāo)記的互補核苷酸補入缺口,DNA聚合酶Ⅰ的這兩種活性的交替作用,使缺口不斷向3’的方向移動,同時DNA鏈上的核苷酸不斷為32P標(biāo)記的核苷酸所取代。計算時應(yīng)用布拉格方程:nλ=2dsinθ。崇明區(qū)質(zhì)量探針商家
探針卡是IC制造中對制造成本影響相當(dāng)大的重要制程之一。嘉定區(qū)特制探針維修價格
在不損耗試樣的情況下,電子探針通常能分析直徑和深度不小于1微米范圍內(nèi)、原子序數(shù)4以上的所有元素;但是對原子序數(shù)小于12的元素,其靈敏度較差。常規(guī)分析的典型檢測相對靈敏度為萬分之一,在有些情況下可達(dá)十萬分之一。檢測的***靈敏度因元素而異,一般為10-14~10-16克。用這種方法可以方便地進(jìn)行點、線、面上的元素分析,并獲得元素分布的圖象。對原子序數(shù)高于10、濃度高于10%的元素,定量分析的相對精度優(yōu)于±2%。電子探針儀是 X射線光譜學(xué)與電子光學(xué)技術(shù)相結(jié)合而產(chǎn)生的。1948年法國的R.卡斯坦制造了***臺電子探針儀。1958年法國首先制造出商品儀器。電子探針儀與掃描電子顯微鏡在結(jié)構(gòu)上有許多共同處。70年代以來生產(chǎn)的電子探針儀上一般都帶有掃描電子顯微鏡功能,有的還附加另一些附件,使之除作微區(qū)成分分析外,還能觀察和研究微觀形貌、晶體結(jié)構(gòu)等。嘉定區(qū)特制探針維修價格
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