相較于熒光或比色法,化學發(fā)光作為均相檢測的信號系統(tǒng)具有多重獨特優(yōu)勢。首先,它無需外部激發(fā)光源,從而完全避免了光源不穩(wěn)定、樣本自發(fā)熒光及光散射所帶來的背景干擾,理論上能獲得極高的信噪比和靈敏度。其次,化學發(fā)光反應產(chǎn)生的光子信號強度在一定范圍內(nèi)與反應物濃度直接相關,動態(tài)范圍寬,可跨越數(shù)個數(shù)量級。再者,化學發(fā)光體系(如魯米諾、吖啶酯)的反應動力學多樣,可滿足從快速閃光到持久輝光的不同檢測需求。比較后,化學發(fā)光反應的啟動通常由單一試劑(如過氧化氫、堿)觸發(fā),易于控制,非常適合自動化儀器上的順序注射和即時讀數(shù)。這些特性使其成為實現(xiàn)超靈敏、高穩(wěn)健性均相檢測的理想信號輸出模式。體外診斷新機遇!均相發(fā)光新產(chǎn)品...
生物發(fā)光共振能量轉移(BRET)是一種天然的或工程化的均相檢測技術。它利用生物發(fā)光蛋白(如海腎熒光素酶Rluc)作為供體,催化底物(如腔腸素)產(chǎn)生化學發(fā)光,該能量直接轉移給鄰近的熒光蛋白(如GFP、YFP)受體,使其發(fā)出熒光。BRET無需外部光源激發(fā),完全消除了光散射和自發(fā)熒光的背景,信噪比極高。在活細胞研究中,可將Rluc和熒光蛋白分別與兩個可能相互作用的靶蛋白融合,通過監(jiān)測BRET信號來實時、動態(tài)地研究蛋白互作的空間接近性和動力學,是研究GPCR二聚化、信號轉導復合物組裝的強大工具。均相化學發(fā)光與電化學發(fā)光相比,有什么不同?均相化學發(fā)光均相發(fā)光優(yōu)點li'ru進行均相發(fā)光檢測需要專門應用的多...
適配體是通過體外篩選得到的單鏈DNA/RNA分子,能特異性結合小分子、蛋白質(zhì)甚至細胞。將適配體的高特異性與均相化學發(fā)光的高靈敏度結合,催生了新型生物傳感器。設計策略包括:構象開關型:適配體與化學發(fā)光標記物(如吖啶酯)和淬滅基團相連,結合靶標后構象變化,改變發(fā)光效率。分裂型:將化學發(fā)光酶或催化其反應的組分分割,分別與分裂的適配體序列連接,靶標存在時適配體重組,恢復發(fā)光活性。鄰近連接型:兩個適配體分別結合靶標的不同部位,拉近其攜帶的化學發(fā)光反應組分(如供體/受體珠),觸發(fā)信號。這些傳感器在環(huán)境監(jiān)測、食品安全和生物標志物檢測中潛力巨大。浦光生物均相化學發(fā)光新技術!山西干式化學發(fā)光均相發(fā)光與普通發(fā)光的...
報告基因(如熒光素酶、β-半乳糖苷酶)是研究基因表達調(diào)控的常用工具。傳統(tǒng)的報告基因檢測通常需要細胞裂解和底物孵育多步操作。均相發(fā)光報告基因檢測系統(tǒng)通過使用具有細胞膜滲透性的“前底物”(pro-substrate)或優(yōu)化反應條件,實現(xiàn)了“一步加樣”檢測。例如,某些熒光素酶底物配方穩(wěn)定,可直接加入含有細胞的培養(yǎng)液中,細胞裂解和酶反應同時發(fā)生,化學發(fā)光信號在數(shù)分鐘內(nèi)達到平臺期并穩(wěn)定數(shù)小時,便于在微孔板中連續(xù)或批量讀取。這極大簡化了基于報告基因的高通量藥物篩選和信號通路研究流程。POCT市場新機遇,浦光干式均相化學發(fā)光助您把握未來!河南技術升級均相發(fā)光臨床檢驗醫(yī)學中的應用研究自身免疫病的診斷常依賴于檢...
熱遷移分析(Cellular Thermal Shift Assay, CETSA)是一種研究靶點與藥物在細胞水平結合情況的技術。其原理是藥物結合會改變靶蛋白的熱穩(wěn)定性。傳統(tǒng)的CETSA依賴蛋白質(zhì)印跡法檢測,通量低?,F(xiàn)在,通過與均相發(fā)光免疫檢測(如Alpha)結合,開發(fā)出了均相CETSA(簡稱CETSA? HT)。該方法將細胞在不同溫度下加熱后裂解,使用針對目標蛋白的抗體對(偶聯(lián)Alpha供體/受體珠)檢測溶液中剩余的未聚集的天然蛋白量。通過比較藥物處理組與對照組的蛋白熱穩(wěn)定性曲線偏移,即可高通量地確認化合物是否與細胞內(nèi)靶點結合,并評估結合強度。均相化學發(fā)光在醫(yī)學中的作用和地位如何?江蘇化學發(fā)...