·應(yīng)用:o糖尿病診斷與分型(胰島素、C肽)。o甲狀腺功能評估(TSH,FreeT3,FreeT4-后者常用化學(xué)發(fā)光)。o生殖內(nèi)分泌(LH,FSH,E2,P,PRL,睪酮)。o腎上腺功能評估(皮質(zhì)醇、ACTH)。o骨質(zhì)疏松相關(guān)(PTH,25-OHVitD)。o生長發(fā)育評估(GH,IGF-1)?!?yōu)勢:靈敏度能滿足多數(shù)***檢測需求;特異性好(尤其使用單克隆抗體);高通量;成本適中。·挑戰(zhàn):o***存在結(jié)合蛋白(如皮質(zhì)醇結(jié)合球蛋白CBG,性***結(jié)合球蛋白SHBG),影響游離(有活性)***的檢測。一些ELISA檢測總***,一些則需專門方法測游離***。o***分泌有節(jié)律性(如皮質(zhì)醇的晝夜節(jié)律)...
盡管快速ELISA技術(shù)前景廣闊,但仍面臨一些挑戰(zhàn),如復(fù)雜樣本(如全血、唾液)的基質(zhì)干擾、低濃度目標(biāo)的檢測靈敏度不足等。未來,隨著納米材料、微流控技術(shù)和人工智能算法的進(jìn)一步融合,新一代POCT-ELISA設(shè)備可能實(shí)現(xiàn)更高通量、更智能化的檢測模式。例如,基于CRISPR-Cas系統(tǒng)的信號放大技術(shù)可提升檢測靈敏度,而機(jī)器學(xué)習(xí)算法可優(yōu)化圖像識別準(zhǔn)確性,減少人為判讀誤差。此外,可穿戴式ELISA傳感器的研發(fā)可能推動實(shí)時健康監(jiān)測的發(fā)展,真正實(shí)現(xiàn)"隨時隨地檢測"的愿景??焖貳LISA技術(shù)的革新不僅使免疫檢測更加普惠化,也為精細(xì)醫(yī)療和遠(yuǎn)程健康管理提供了重要工具。未來,隨著技術(shù)的持續(xù)優(yōu)化和監(jiān)管政策的完善,這類便...
自身免疫病的特征是機(jī)體免疫系統(tǒng)錯誤地攻擊自身組織。檢測血清中的自身抗體是診斷、分型、評估疾病活動度和預(yù)后的重要手段。ELISA因其高通量和定量能力,成為檢測自身抗體的優(yōu)先方法之一?!こR姍z測靶點(diǎn):o抗核抗體(ANA):篩查系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)等結(jié)締組織病。ELISA可檢測針對特定核抗原(如dsDNA,Sm,RNP,SSA/Ro,SSB/La,Scl-70,Jo-1)的特異性抗體。o類風(fēng)濕因子(RF):檢測針對自身IgGFc段的抗體,與類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(RA)相關(guān)(但也見于其他疾病和健康老人)。o抗環(huán)瓜氨酸肽抗體(Anti-CCP):對RA診斷特異性高。o抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體(ANCA):如c-...
ELISA的結(jié)果可以根據(jù)實(shí)驗?zāi)康暮驮噭┖性O(shè)計進(jìn)行不同方式的判讀:·定量分析(Quantitative):這是最常見的應(yīng)用。通過精確的標(biāo)準(zhǔn)曲線,計算出樣品中目標(biāo)物的***濃度(如ng/mL,pg/mL,IU/mL)。要求標(biāo)準(zhǔn)品濃度準(zhǔn)確,曲線擬合良好(R2>0.99),樣品OD值落在曲線范圍內(nèi)(比較好在中間線性好的部分)。適用于需要精確數(shù)值的研究和診斷?!ぐ攵糠治觯⊿emi-quantitative):當(dāng)無法獲得或不需要***濃度值時使用。通常將樣品的OD值與標(biāo)準(zhǔn)品(或一個已知的強(qiáng)陽性對照)的OD值進(jìn)行比較,報告為“相當(dāng)于XXU/mL”或“高/中/低”?;蛘咴O(shè)定一個Cut-off值(臨界值),高...
ELISA之所以能廣泛應(yīng)用于科研和臨床,很大程度上得益于其試劑盒化。一個完整的ELISA試劑盒將實(shí)驗所需的關(guān)鍵組分進(jìn)行了標(biāo)準(zhǔn)化、預(yù)優(yōu)化和預(yù)先分裝,通常包括:預(yù)包被抗體的微孔板(或包被抗原,取決于檢測模式)、檢測抗體(可能已酶標(biāo))、標(biāo)準(zhǔn)品(濃度梯度已知)、樣品稀釋液、濃縮洗滌液、顯色底物(TMB、OPD等)、終止液(如硫酸)。此外,詳細(xì)的說明書會提供實(shí)驗流程、標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制方法、結(jié)果計算方式以及關(guān)鍵的注意事項。這種“開盒即用”或*需簡單準(zhǔn)備的模式,極大地簡化了實(shí)驗操作流程,減少了研究者自行優(yōu)化抗體配對、包被條件、反應(yīng)時間等繁瑣步驟所需的時間和資源,顯著提高了實(shí)驗的可重復(fù)性和不同實(shí)驗室間結(jié)果的可比性...
**標(biāo)志物(TumorMarkers)是指由腫瘤細(xì)胞本身產(chǎn)生或由機(jī)體對**反應(yīng)而產(chǎn)生的、可存在于血液、體液或組織中的生物分子。ELISA是檢測循環(huán)**標(biāo)志物(血清/血漿)**常用的技術(shù)之一,用于:·輔助診斷:某些標(biāo)志物升高提示特定**存在的可能性(需結(jié)合影像學(xué)、病理學(xué)確診)。例如:o甲胎蛋白(AFP):原發(fā)性肝細(xì)胞*、生殖細(xì)胞**。o*胚抗原(CEA):結(jié)直腸*、胃*、胰腺*、肺*、乳腺*等(廣譜但特異性不高)。o前列腺特異性抗原(PSA):前列腺*篩查(爭議較大)及***后監(jiān)測。o糖類抗原CA125:卵巢*。o糖類抗原CA15-3:乳腺*。o糖類抗原CA19-9:胰腺*、膽管*。96孔板設(shè)計...
過敏性疾病(如過敏性鼻炎、***、特應(yīng)性皮炎、食物過敏)日益普遍。ELISA在過敏原檢測中扮演著雙重角色:1.檢測血清中過敏原特異性IgE(sIgE):o這是體外診斷I型(速發(fā)型)過敏反應(yīng)的金標(biāo)準(zhǔn)方法之一(另一種是免疫印跡/芯片)。o原理:將純化的或重組的單一過敏原(如塵螨Derp1、花生蛋白Arah2、貓毛蛋白Feld1)包被在微孔板上(或使用多孔板同時檢測多種過敏原)。加入患者血清,如果血清中含有針對該過敏原的sIgE抗體,則與之結(jié)合。洗滌后,加入酶標(biāo)記的抗人IgE抗體(二抗),形成“固相過敏原-sIgE-酶標(biāo)抗IgE”復(fù)合物。顯色后信號強(qiáng)度與sIgE含量成正比。o優(yōu)勢:可定量或半定量報告...
ELISA技術(shù)在食品安全檢測領(lǐng)域發(fā)揮著不可替代的作用,其**價值在于能夠快速、準(zhǔn)確地檢測各類危害物質(zhì)。在農(nóng)藥殘留檢測方面,針對有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥開發(fā)的ELISA試劑盒檢測限可達(dá)0.01-0.1ppm,完全滿足國際食品法典委員會(CAC)的限量標(biāo)準(zhǔn)。這些試劑盒多采用間接競爭法原理,通過特異性抗體識別農(nóng)藥分子,在30-45分鐘內(nèi)完成檢測,較傳統(tǒng)色譜方法效率提升5-10倍。獸藥殘留檢測是ELISA技術(shù)的另一重要應(yīng)用領(lǐng)域。以牛奶中β-內(nèi)酰胺類***檢測為例,現(xiàn)代ELISA試劑盒的靈敏度可達(dá)2-5μg/kg,遠(yuǎn)低于歐盟規(guī)定的比較大殘留限量(MRL)。這類檢測通常采用直接競爭法,利用青霉素結(jié)合蛋白(...
ELISA也存在一些固有的局限性:1.*能檢測已知目標(biāo)物:依賴于特異性的抗體對,只能檢測預(yù)先設(shè)定好的目標(biāo)分子,無法進(jìn)行無假設(shè)的發(fā)現(xiàn)研究(如蛋白質(zhì)組學(xué))。2.抗體依賴性:檢測性能(靈敏度、特異性、動態(tài)范圍)高度依賴所用抗體的質(zhì)量??贵w的交叉反應(yīng)性、批次差異會直接影響結(jié)果。3.可能存在的干擾:o基質(zhì)效應(yīng)(MatrixEffect):樣品中復(fù)雜的成分(如高脂、高蛋白、溶血、某些藥物、類風(fēng)濕因子、異嗜性抗體)可能干擾抗原抗體結(jié)合或酶活性,導(dǎo)致假陽性或假陰性。稀釋樣品有時能緩解,但會降低靈敏度。o鉤狀效應(yīng)(HookEffect):在夾心法中,當(dāng)樣品中抗原濃度極高時,可能同時飽和捕獲抗體和檢測抗體,導(dǎo)致形...
ELISA的結(jié)果可以根據(jù)實(shí)驗?zāi)康暮驮噭┖性O(shè)計進(jìn)行不同方式的判讀:·定量分析(Quantitative):這是最常見的應(yīng)用。通過精確的標(biāo)準(zhǔn)曲線,計算出樣品中目標(biāo)物的***濃度(如ng/mL,pg/mL,IU/mL)。要求標(biāo)準(zhǔn)品濃度準(zhǔn)確,曲線擬合良好(R2>0.99),樣品OD值落在曲線范圍內(nèi)(比較好在中間線性好的部分)。適用于需要精確數(shù)值的研究和診斷?!ぐ攵糠治觯⊿emi-quantitative):當(dāng)無法獲得或不需要***濃度值時使用。通常將樣品的OD值與標(biāo)準(zhǔn)品(或一個已知的強(qiáng)陽性對照)的OD值進(jìn)行比較,報告為“相當(dāng)于XXU/mL”或“高/中/低”?;蛘咴O(shè)定一個Cut-off值(臨界值),高...
絕大多數(shù)ELISA試劑盒(尤其是夾心法)依賴于一對特異性識別目標(biāo)抗原不同表位的單克隆抗體(mAb),或者一個單抗與一個多抗的組合。其中一個抗體作為捕獲抗體(Capture Antibody),預(yù)包被在微孔板孔底,負(fù)責(zé)從樣品中“抓住”目標(biāo)抗原。另一個抗體作為檢測抗體(Detection Antibody),通常連接有報告酶(如HRP或ALP),負(fù)責(zé)特異性識別并結(jié)合已被捕獲的抗原,形成“捕獲抗體-抗原-酶標(biāo)檢測抗體”的復(fù)合物。這對抗體的質(zhì)量(親和力、特異性)及其配對的兼容性(不競爭同一表位、結(jié)合效率高)是決定試劑盒靈敏度、特異性和檢測范圍的關(guān)鍵因素。***的試劑盒會經(jīng)過嚴(yán)格的抗體篩選和配對優(yōu)化,以...
ELISA試劑盒可檢測多種樣本類型,包括血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清、組織勻漿、尿液、唾液等。不同樣本需采用特定的預(yù)處理方法以確保檢測準(zhǔn)確性。例如,血清樣本應(yīng)避免溶血,離心后取上清;組織樣本需裂解并離心去除碎片;細(xì)胞培養(yǎng)上清可能含有高濃度蛋白,需適當(dāng)稀釋。某些樣本(如尿液)可能含有干擾物質(zhì),需通過透析或添加抑制劑處理。此外,反復(fù)凍融可能破壞目標(biāo)蛋白,建議分裝保存于-80°C。樣本處理的標(biāo)準(zhǔn)化是保證ELISA結(jié)果可重復(fù)性的關(guān)鍵。加入終止液后應(yīng)在規(guī)定時間內(nèi)完成讀數(shù)。貴州進(jìn)口ELISA試劑盒銷售電話隨著生物檢測技術(shù)的飛速發(fā)展,ELISA試劑盒正經(jīng)歷著從傳統(tǒng)手工操作向高通量、自動化檢測系統(tǒng)的**性轉(zhuǎn)變。在...
ELISA(酶聯(lián)免疫吸附試驗)技術(shù)在食品安全檢測領(lǐng)域發(fā)揮著不可替代的作用,尤其適用于農(nóng)藥殘留、獸藥殘留、非法添加劑及生物***等有害物質(zhì)的快速篩查。針對不同食品基質(zhì)的檢測需求,市場上已開發(fā)出多種高靈敏度和高特異性的 ELISA 試劑盒,如牛奶中的三聚氰胺、肉類中的瘦肉精(如克倫特羅、萊克多巴胺)、水產(chǎn)品中的孔雀石綠、糧食中的黃曲霉***等。這些試劑盒通常采用競爭法或間接法檢測原理,通過抗原-抗體的特異性結(jié)合反應(yīng),實(shí)現(xiàn)對目標(biāo)物的定量或半定量分析。試劑盒批間差需通過嚴(yán)格質(zhì)控來降低。青海羊ELISA試劑盒使用方法隨著移動醫(yī)療技術(shù)的進(jìn)步,智能手機(jī)與微型ELISA裝置的結(jié)合為家庭自測提供了新思路。例如,...
加樣是ELISA實(shí)驗誤差的重要來源之一。操作要點(diǎn):·精細(xì)移液:使用校準(zhǔn)好的移液器和匹配的吸頭。對于小體積(<50μL),建議使用反向移液法減少誤差。定期更換吸頭避免交叉污染?!た孜灰?guī)劃:提前規(guī)劃好標(biāo)準(zhǔn)品孔、樣品孔、空白孔(*加樣品稀釋液+檢測抗體等,不加樣品)、背景孔(*加所有試劑不加抗體/抗原,用于扣除板子背景)、質(zhì)控品孔的位置。建議做復(fù)孔(至少雙孔)以提高精度和可靠性?!け苊鈿馀荩杭訕訒r吸頭尖部應(yīng)接觸液面或孔壁,緩慢釋放液體,避免產(chǎn)生氣泡(氣泡會影響光路和孔間均一性)。若產(chǎn)生氣泡,可在讀數(shù)前用細(xì)針小心戳破或離心去除?!し跤龡l件:嚴(yán)格按照試劑盒說明書要求的溫度(室溫/37°C)、時間和震蕩條...
獲得穩(wěn)定的顯色信號后,需要使用酶標(biāo)儀(MicroplateReader)在特定波長下測量吸光度(OpticalDensity,OD值)。·oOPD終止后:測量492nm。opNPP(ALP系統(tǒng)):測量405nm。·儀器校準(zhǔn)與設(shè)置:確保酶標(biāo)儀經(jīng)過校準(zhǔn)。使用潔凈的微孔板底板?!た瞻仔U鹤x取前,務(wù)必設(shè)置好空白孔(通常只含底物和終止液,不加任何生物組分)。儀器軟件通常會自動用空白孔的平均值對所有孔的OD值進(jìn)行歸零校正(BlankSubtraction)?!?shù)據(jù)導(dǎo)出:將校正后的OD值導(dǎo)出到數(shù)據(jù)處理軟件(如Excel,GraphPadPrism,或試劑盒配套軟件)?!だL制標(biāo)準(zhǔn)曲線:以標(biāo)準(zhǔn)品濃度(X軸,通...
側(cè)流免疫層析試紙條(如妊娠檢測試紙、抗原檢測試紙)是快速ELISA的典型**。其采用硝酸纖維素膜作為固相載體,通過毛細(xì)作用使樣本層析移動,與預(yù)先包被的抗體結(jié)合,形成可見的顯色線。相比傳統(tǒng)ELISA,該技術(shù)省去了多次加樣、洗滌等繁瑣步驟,且無需專業(yè)培訓(xùn)即可操作,非常適合基層醫(yī)療機(jī)構(gòu)、急診篩查、食品安全現(xiàn)場檢測等場景。此外,部分新型試紙條還引入了納米金、熒光微球等標(biāo)記物,進(jìn)一步提高檢測靈敏度,使定量檢測成為可能。國產(chǎn)ELISA試劑盒性價比高,適合預(yù)算有限的用戶。河北試驗室ELISA試劑盒大概費(fèi)用自身免疫病的特征是機(jī)體免疫系統(tǒng)錯誤地攻擊自身組織。檢測血清中的自身抗體是診斷、分型、評估疾病活動度和預(yù)后...
LISA實(shí)驗涉及多個孵育和洗滌步驟,各種緩沖液在其中扮演著重要角色,確保反應(yīng)在比較好條件下進(jìn)行并減少非特異性干擾。主要的緩沖液包括:·包被緩沖液:通常為碳酸鹽緩沖液(pH9.6),利于蛋白質(zhì)吸附到疏水的聚苯乙烯表面(試劑盒中預(yù)包被板已使用過)?!悠?標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液:用于稀釋血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清或組織裂解液等樣本以及標(biāo)準(zhǔn)品。通常含有PBS或Tris緩沖鹽、蛋白質(zhì)(如BSA、酪蛋白)以封閉非特異性位點(diǎn)、表面活性劑(如Tween20)減少吸附、防腐劑等。其成分直接影響檢測的靈敏度和準(zhǔn)確性?!は礈炀彌_液(WashBuffer):通常為含低濃度(0.05-0.1%)非離子型去污劑(如Tween20)...
***是內(nèi)分泌腺或細(xì)胞分泌的、通過血液循環(huán)作用于靶***的化學(xué)信使。準(zhǔn)確測定***水平對于內(nèi)分泌疾病的診斷、***監(jiān)測和生理研究至關(guān)重要。ELISA是臨床和科研中檢測多種***的主流技術(shù)?!z測對象:血清、血漿、尿液(如24h尿皮質(zhì)醇)中的肽類/蛋白類***和部分小分子類固醇***(需競爭法)。o肽類/蛋白類***:胰島素、C肽、胰***素、生長***(GH)、促腎上腺皮質(zhì)***(ACTH)、促甲狀腺***(TSH)、黃體生成素(LH)、卵泡刺***(FSH)、泌乳素(PRL)、甲狀旁腺***(PTH)、降鈣素等。通常使用夾心法。o類固醇***:皮質(zhì)醇、睪酮、雌二醇(E2)、孕酮(P)、脫氫表...
LISA實(shí)驗涉及多個孵育和洗滌步驟,各種緩沖液在其中扮演著重要角色,確保反應(yīng)在比較好條件下進(jìn)行并減少非特異性干擾。主要的緩沖液包括:·包被緩沖液:通常為碳酸鹽緩沖液(pH9.6),利于蛋白質(zhì)吸附到疏水的聚苯乙烯表面(試劑盒中預(yù)包被板已使用過)?!悠?標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液:用于稀釋血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清或組織裂解液等樣本以及標(biāo)準(zhǔn)品。通常含有PBS或Tris緩沖鹽、蛋白質(zhì)(如BSA、酪蛋白)以封閉非特異性位點(diǎn)、表面活性劑(如Tween20)減少吸附、防腐劑等。其成分直接影響檢測的靈敏度和準(zhǔn)確性?!は礈炀彌_液(WashBuffer):通常為含低濃度(0.05-0.1%)非離子型去污劑(如Tween20)...
絕大多數(shù)ELISA試劑盒(尤其是夾心法)依賴于一對特異性識別目標(biāo)抗原不同表位的單克隆抗體(mAb),或者一個單抗與一個多抗的組合。其中一個抗體作為捕獲抗體(Capture Antibody),預(yù)包被在微孔板孔底,負(fù)責(zé)從樣品中“抓住”目標(biāo)抗原。另一個抗體作為檢測抗體(Detection Antibody),通常連接有報告酶(如HRP或ALP),負(fù)責(zé)特異性識別并結(jié)合已被捕獲的抗原,形成“捕獲抗體-抗原-酶標(biāo)檢測抗體”的復(fù)合物。這對抗體的質(zhì)量(親和力、特異性)及其配對的兼容性(不競爭同一表位、結(jié)合效率高)是決定試劑盒靈敏度、特異性和檢測范圍的關(guān)鍵因素。***的試劑盒會經(jīng)過嚴(yán)格的抗體篩選和配對優(yōu)化,以...
細(xì)胞因子(Cytokines)和趨化因子(Chemokines)是免疫細(xì)胞和多種組織細(xì)胞分泌的小分子蛋白(多肽),在免疫應(yīng)答、炎癥反應(yīng)、造血、細(xì)胞生長分化等生理病理過程中扮演關(guān)鍵信使角色。研究其表達(dá)譜和動態(tài)變化對于理解免疫機(jī)制、疾病發(fā)***展至關(guān)重要。ELISA是檢測特定細(xì)胞因子/趨化因子蛋白濃度的金標(biāo)準(zhǔn)方法。·檢測對象:血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清、組織裂解液等樣本中的可溶性細(xì)胞因子/趨化因子(如IL-1β,IL-2,IL-4,IL-6,IL-10,TNF-α,IFN-γ,MCP-1,IL-8)。·技術(shù)選擇:夾心法ELISA**為常用,因其對復(fù)雜樣本中低豐度細(xì)胞因子的檢測具有高靈敏度和特異性。需...
ELISA(酶聯(lián)免疫吸附試驗)技術(shù)在食品安全檢測領(lǐng)域發(fā)揮著不可替代的作用,尤其適用于農(nóng)藥殘留、獸藥殘留、非法添加劑及生物***等有害物質(zhì)的快速篩查。針對不同食品基質(zhì)的檢測需求,市場上已開發(fā)出多種高靈敏度和高特異性的 ELISA 試劑盒,如牛奶中的三聚氰胺、肉類中的瘦肉精(如克倫特羅、萊克多巴胺)、水產(chǎn)品中的孔雀石綠、糧食中的黃曲霉***等。這些試劑盒通常采用競爭法或間接法檢測原理,通過抗原-抗體的特異性結(jié)合反應(yīng),實(shí)現(xiàn)對目標(biāo)物的定量或半定量分析。細(xì)胞培養(yǎng)上清液需離心去除碎片后再檢測。西藏牛ELISA試劑盒售價隨著移動醫(yī)療技術(shù)的進(jìn)步,智能手機(jī)與微型ELISA裝置的結(jié)合為家庭自測提供了新思路。例如,...
ELISA試劑盒可檢測多種樣本類型,包括血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清、組織勻漿、尿液、唾液等。不同樣本需采用特定的預(yù)處理方法以確保檢測準(zhǔn)確性。例如,血清樣本應(yīng)避免溶血,離心后取上清;組織樣本需裂解并離心去除碎片;細(xì)胞培養(yǎng)上清可能含有高濃度蛋白,需適當(dāng)稀釋。某些樣本(如尿液)可能含有干擾物質(zhì),需通過透析或添加抑制劑處理。此外,反復(fù)凍融可能破壞目標(biāo)蛋白,建議分裝保存于-80°C。樣本處理的標(biāo)準(zhǔn)化是保證ELISA結(jié)果可重復(fù)性的關(guān)鍵。部分ELISA試劑盒可檢測磷酸化蛋白修飾水平。吉林羊ELISA試劑盒ELISA之所以能廣泛應(yīng)用于科研和臨床,很大程度上得益于其試劑盒化。一個完整的ELISA試劑盒將實(shí)驗所需的...
ELISA是臨床傳染病診斷領(lǐng)域的支柱技術(shù)之一,發(fā)揮著不可替代的作用:·病原體抗原檢測:直接檢測患者樣本(血液、糞便、呼吸道分泌物等)中的病原體特異性抗原,用于早期診斷。例如:o乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)、**抗原(HBcAg)。o人類免疫缺陷病毒p24抗原(HIVAg)。o輪狀病毒、腺病毒抗原(糞便)。o呼吸道合胞病毒(RSV)、流感病毒抗原(鼻咽拭子)。o隱球菌莢膜多糖抗原(血清、腦脊液)?!ぬ禺愋钥贵w檢測:檢測患者血清/血漿中針對病原體產(chǎn)生的特異性抗體(IgM,IgG,IgA),用于確定***狀態(tài)(急性期、恢復(fù)期、既往***)、免疫狀態(tài)評估和流行病學(xué)調(diào)查。例如:oHIV抗體篩查(A...
ELISA試劑盒可檢測多種樣本類型,包括血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清、組織勻漿、尿液、唾液等。不同樣本需采用特定的預(yù)處理方法以確保檢測準(zhǔn)確性。例如,血清樣本應(yīng)避免溶血,離心后取上清;組織樣本需裂解并離心去除碎片;細(xì)胞培養(yǎng)上清可能含有高濃度蛋白,需適當(dāng)稀釋。某些樣本(如尿液)可能含有干擾物質(zhì),需通過透析或添加抑制劑處理。此外,反復(fù)凍融可能破壞目標(biāo)蛋白,建議分裝保存于-80°C。樣本處理的標(biāo)準(zhǔn)化是保證ELISA結(jié)果可重復(fù)性的關(guān)鍵。過期試劑盒可能導(dǎo)致假陽性或假陰性結(jié)果。中國澳門推薦ELISA試劑盒電話多少試劑平衡與樣本處理:試劑盒需從2-8℃冰箱取出后,于室溫平衡至少20分鐘,確保所有試劑溫度均勻。樣本...
**標(biāo)志物(TumorMarkers)是指由腫瘤細(xì)胞本身產(chǎn)生或由機(jī)體對**反應(yīng)而產(chǎn)生的、可存在于血液、體液或組織中的生物分子。ELISA是檢測循環(huán)**標(biāo)志物(血清/血漿)**常用的技術(shù)之一,用于:·輔助診斷:某些標(biāo)志物升高提示特定**存在的可能性(需結(jié)合影像學(xué)、病理學(xué)確診)。例如:o甲胎蛋白(AFP):原發(fā)性肝細(xì)胞*、生殖細(xì)胞**。o*胚抗原(CEA):結(jié)直腸*、胃*、胰腺*、肺*、乳腺*等(廣譜但特異性不高)。o前列腺特異性抗原(PSA):前列腺*篩查(爭議較大)及***后監(jiān)測。o糖類抗原CA125:卵巢*。o糖類抗原CA15-3:乳腺*。o糖類抗原CA19-9:胰腺*、膽管*。凍干粉試劑需...
血清和血漿是 ELISA 檢測中**常用的樣本類型,但它們的質(zhì)量易受溶血、脂血和纖維蛋白原的影響。溶血樣本中的血紅蛋白會競爭性結(jié)合辣根過氧化物酶(HRP)或堿性磷酸酶(AP)等顯色底物,導(dǎo)致吸光度異常升高,影響檢測準(zhǔn)確性。脂血樣本則可能因乳糜微粒的散射作用干擾光信號讀取。因此,采集時應(yīng)避免劇烈震蕩或高速離心,推薦使用低吸附**管,并在 2-8℃ 下 3000×g 離心 10 分鐘以去除雜質(zhì)。對于血漿樣本,抗凝劑的選擇也至關(guān)重要:EDTA 和枸櫞酸鈉適用于大多數(shù) ELISA 試劑盒,而肝素可能干擾某些抗原-抗體結(jié)合反應(yīng),需提前驗證試劑盒的兼容性。部分高靈敏度試劑盒采用化學(xué)發(fā)光檢測法。河南豬ELI...
ELISA的結(jié)果可以根據(jù)實(shí)驗?zāi)康暮驮噭┖性O(shè)計進(jìn)行不同方式的判讀:·定量分析(Quantitative):這是最常見的應(yīng)用。通過精確的標(biāo)準(zhǔn)曲線,計算出樣品中目標(biāo)物的***濃度(如ng/mL,pg/mL,IU/mL)。要求標(biāo)準(zhǔn)品濃度準(zhǔn)確,曲線擬合良好(R2>0.99),樣品OD值落在曲線范圍內(nèi)(比較好在中間線性好的部分)。適用于需要精確數(shù)值的研究和診斷?!ぐ攵糠治觯⊿emi-quantitative):當(dāng)無法獲得或不需要***濃度值時使用。通常將樣品的OD值與標(biāo)準(zhǔn)品(或一個已知的強(qiáng)陽性對照)的OD值進(jìn)行比較,報告為“相當(dāng)于XXU/mL”或“高/中/低”?;蛘咴O(shè)定一個Cut-off值(臨界值),高...
絕大多數(shù)ELISA試劑盒(尤其是夾心法)依賴于一對特異性識別目標(biāo)抗原不同表位的單克隆抗體(mAb),或者一個單抗與一個多抗的組合。其中一個抗體作為捕獲抗體(Capture Antibody),預(yù)包被在微孔板孔底,負(fù)責(zé)從樣品中“抓住”目標(biāo)抗原。另一個抗體作為檢測抗體(Detection Antibody),通常連接有報告酶(如HRP或ALP),負(fù)責(zé)特異性識別并結(jié)合已被捕獲的抗原,形成“捕獲抗體-抗原-酶標(biāo)檢測抗體”的復(fù)合物。這對抗體的質(zhì)量(親和力、特異性)及其配對的兼容性(不競爭同一表位、結(jié)合效率高)是決定試劑盒靈敏度、特異性和檢測范圍的關(guān)鍵因素。***的試劑盒會經(jīng)過嚴(yán)格的抗體篩選和配對優(yōu)化,以...
ELISA也存在一些固有的局限性:1.*能檢測已知目標(biāo)物:依賴于特異性的抗體對,只能檢測預(yù)先設(shè)定好的目標(biāo)分子,無法進(jìn)行無假設(shè)的發(fā)現(xiàn)研究(如蛋白質(zhì)組學(xué))。2.抗體依賴性:檢測性能(靈敏度、特異性、動態(tài)范圍)高度依賴所用抗體的質(zhì)量??贵w的交叉反應(yīng)性、批次差異會直接影響結(jié)果。3.可能存在的干擾:o基質(zhì)效應(yīng)(MatrixEffect):樣品中復(fù)雜的成分(如高脂、高蛋白、溶血、某些藥物、類風(fēng)濕因子、異嗜性抗體)可能干擾抗原抗體結(jié)合或酶活性,導(dǎo)致假陽性或假陰性。稀釋樣品有時能緩解,但會降低靈敏度。o鉤狀效應(yīng)(HookEffect):在夾心法中,當(dāng)樣品中抗原濃度極高時,可能同時飽和捕獲抗體和檢測抗體,導(dǎo)致形...