含消除炎癥成分的樣品可能抑制 IL-6 產(chǎn)生，需通過科學(xué)評估排除干擾，確保 MAT 法熱原檢測結(jié)果準確。根據(jù)藥典要求，若樣品能抑制單核細胞促炎癥因子釋放，需通過以下步驟驗證適用性：首先，選擇樣品 A、2A、4A 倍稀釋（均不超過上限有效稀釋倍數(shù) MVD），避免高濃度消除炎癥成分過度抑制；其次，進行供試品加標回收率實驗，若回收率在 50%-200% 的合格范圍，說明消除炎癥成分未影響熱原檢測；再對比 “供試品配制的標曲” 與 “稀釋液配制的標曲”，若兩者 IL-6 檢測值相差在 ±20% 以內(nèi)，表明樣品基質(zhì)對檢測無系統(tǒng)性干擾。例如，某消除炎癥單抗樣品經(jīng) 2 倍稀釋后，加標回收率達 120%，...

隨著發(fā)熱反應(yīng)分子機制研究的不斷深化，單核細胞活化試驗（MAT）作為一種體外熱原檢測技術(shù)，愈發(fā)受到醫(yī)藥與醫(yī)療器械行業(yè)的關(guān)注并逐步推廣應(yīng)用。該方法的原理是：讓人體全血與待檢樣品中的熱原充分接觸后，通過檢測體系中產(chǎn)生的 IL-1β、IL-6（因穩(wěn)定性強、重復(fù)性優(yōu)，常作為關(guān)鍵檢測指標）、TNF 等促炎細胞因子含量，實現(xiàn)對熱原污染程度的評估，整個過程能高度模擬人體先天免疫系統(tǒng)對熱原的應(yīng)答反應(yīng)。相較于傳統(tǒng)熱原檢測手段，MAT 的優(yōu)勢更為突出：不僅可檢出各類熱原污染物，包括尚未明確性質(zhì)的未知熱原，以及革蘭氏陽性菌（脂磷壁酸）、真菌、病毒等產(chǎn)生的非內(nèi)毒素熱原，填補了傳統(tǒng)內(nèi)毒素檢測（如鱟試劑法）的覆蓋空白。...

中國藥典與歐洲藥典對 MAT 熱原檢測的細胞類型及復(fù)孔數(shù)有明確要求，且存在細節(jié)差異。細胞類型上，兩者均認可人全血、PBMC（外周血單個核細胞，至少 4 個供體，歐洲藥典建議 8 個供體），中國藥典明確將單核細胞系納入，歐洲藥典則要求單核細胞系需做支原體污染檢測、細胞鑒別等；檢測方法均為 “熱原刺激細胞 + ELISA 檢測 IL-6/IL-1β/TNF-α”。復(fù)孔數(shù)方面，兩者均規(guī)定平行孔≥4、濃度點≥4，中國藥典額外要求標曲 r≥0.90，主要目的是通過多重復(fù)孔抵消 PBMC 的不穩(wěn)定性，確保熱原檢測結(jié)果準確可靠。 熱原檢測MAT零動物消耗，降低檢測成本，提升檢測效率和倫理水平。河南生物制...

MAT法熱原檢測特定標準品與傳統(tǒng)細菌內(nèi)毒素國家標準品存在本質(zhì)差異，需明確區(qū)分以保障檢測準確性。MAT 特定標準品為大腸桿菌（E.coli 0113:H10:K）菌株制備，經(jīng)全國 5 家藥品檢驗所（含中檢院）用凝膠法、動態(tài)濁度法及動態(tài)顯色法協(xié)作標定，溯源至國際標準品，可同時檢測內(nèi)毒素與非內(nèi)毒素熱原；而傳統(tǒng)細菌內(nèi)毒素國家標準品（如 9000EU 規(guī)格）源自大腸桿菌（E.coli O111:B4），只適用于內(nèi)毒素檢測，無法識別非內(nèi)毒素熱原。關(guān)鍵驗證數(shù)據(jù)顯示，用 MAT法檢測 9000EU 內(nèi)毒素標準品時，加標回收率不在 50%-200% 的合格范圍，因此不能替代 MAT 特定標準品。值得注意的是...

傳統(tǒng)熱原檢測方法的局限性十分明顯：鱟試驗法只能特異性識別細菌內(nèi)毒素，對非內(nèi)毒素熱原完全無響應(yīng)；家兔熱原試驗雖能篩查全類型熱原，但靈敏度低（檢測限≥5EU/kg），無法檢出微量非內(nèi)毒素熱原，且無法區(qū)分熱原類型，難以追溯污染源頭；單核細胞活化反應(yīng)測定（MAT）的出現(xiàn)有效解決了上述難題，其關(guān)鍵優(yōu)勢在于：基于人源單核細胞的免疫應(yīng)答機制，可同時識別所有具備生物活性的熱原（包括內(nèi)毒素與非內(nèi)毒素），且檢測靈敏度高（對病毒熱原檢測限低至pg級）；檢測周期短（24-48小時），可滿足產(chǎn)品快速放行需求；能通過細胞因子濃度定量評估熱原活性，避免“無活性熱原”的誤判。 單核細胞系傳代可控，20代以內(nèi)TLR表達與炎...

PyroSHENTEK?熱原檢測試劑盒（MAT法）已完成 25 個品種樣品的檢測驗證，覆蓋單抗類、疫苗類、基因工程類、血液制品類、生化藥品類與注射液，結(jié)果顯示其適配性范圍廣但需關(guān)注部分樣品的干擾。疫苗類（如麻腮風聯(lián)合減毒活疫苗、人用狂犬病疫苗）、基因工程類（重組人促紅素、干擾素 α-2b）、血液制品類（人血白蛋白、凝血因子 Ⅷ）與注射液（生理鹽水、琥珀酰明膠）的加標回收率均在 50%-200% 范圍內(nèi)，無明顯干擾，檢測結(jié)果可靠。單抗類（如貝伐珠單抗、阿達木單抗）、中藥注射液等樣品雖存在不同程度的抑制作用，需通過提高稀釋倍數(shù)（如稀釋至 MVD 上限）、超聲處理或添加中和劑消除抑制，優(yōu)化后回收...

傳統(tǒng)熱原檢測方法的局限性十分明顯：鱟試驗法只能特異性識別細菌內(nèi)毒素，對非內(nèi)毒素熱原完全無響應(yīng)；家兔熱原試驗雖能篩查全類型熱原，但靈敏度低（檢測限≥5EU/kg），無法檢出微量非內(nèi)毒素熱原，且無法區(qū)分熱原類型，難以追溯污染源頭；單核細胞活化反應(yīng)測定（MAT）的出現(xiàn)有效解決了上述難題，其關(guān)鍵優(yōu)勢在于：基于人源單核細胞的免疫應(yīng)答機制，可同時識別所有具備生物活性的熱原（包括內(nèi)毒素與非內(nèi)毒素），且檢測靈敏度高（對病毒熱原檢測限低至pg級）；檢測周期短（24-48小時），可滿足產(chǎn)品快速放行需求；能通過細胞因子濃度定量評估熱原活性，避免“無活性熱原”的誤判。 選擇熱原檢測單核細胞活化反應(yīng)測定法，即是選擇...

MAT法（單核細胞活化反應(yīng)測定）熱原檢測基于人體免疫反應(yīng)機制設(shè)計，原理是：內(nèi)毒素（革蘭氏陰性菌來源）與非內(nèi)毒素熱原（革蘭氏陽性菌、霉菌、病毒等來源）進入人體后，會活化單核細胞或單核細胞系，使其釋放 IL-6、IL-1、IL-1β、TNF-α 等促炎細胞因子。檢測時將供試品與單核細胞 / 單核細胞系共孵育，再通過 ELISA 定量檢測釋放的 IL-6 含量，結(jié)合內(nèi)毒素標準品繪制的標曲，即可判斷供試品中熱原含量是否符合規(guī)定，實現(xiàn)內(nèi)毒素與非內(nèi)毒素熱原的全覆蓋檢測。 PyroSHENTEK 熱原檢測（MAT）試劑盒的單核細胞系無需供體，避免PBMC血源供應(yīng)受限及標志物檢測環(huán)節(jié)。非動物源熱原檢測流程...

PBMC（外周血單個核細胞）的供體差異會直接導(dǎo)致熱原檢測結(jié)果的波動，主要體現(xiàn)在 IL-6 釋放水平的不一致。不同供體的 PBMC，其單核細胞比例、TLR 受體表達量、免疫活性狀態(tài)存在差異：有的供體 PBMC 受熱原刺激后， IL-6 釋放量高；有的則極低，甚至無明顯響應(yīng)。實驗數(shù)據(jù)顯示， PBMC 的標曲各濃度點相對偏差有高達 171.43%的，正是這種差異的體現(xiàn)，導(dǎo)致熱原檢測結(jié)果難以標準化，無法準確判斷供試品熱原是否超標，從而增加了藥品的質(zhì)量控制風險。 PyroSHENTEK熱原檢測試劑盒采用“單核細胞+ELISA”標準化體系，檢測結(jié)果穩(wěn)定、重復(fù)性好，數(shù)據(jù)準確。吉林熱原檢測法規(guī)要求 MA...

PBMC（外周血單個核細胞）的供體差異會直接導(dǎo)致熱原檢測結(jié)果的波動，主要體現(xiàn)在 IL-6 釋放水平的不一致。不同供體的 PBMC，其單核細胞比例、TLR 受體表達量、免疫活性狀態(tài)存在差異：有的供體 PBMC 受熱原刺激后， IL-6 釋放量高；有的則極低，甚至無明顯響應(yīng)。實驗數(shù)據(jù)顯示， PBMC 的標曲各濃度點相對偏差有高達 171.43%的，正是這種差異的體現(xiàn)，導(dǎo)致熱原檢測結(jié)果難以標準化，無法準確判斷供試品熱原是否超標，從而增加了藥品的質(zhì)量控制風險。 生物制品的高蛋白、螯合劑基質(zhì)易對鱟試驗產(chǎn)生抑制，rCR與MAT聯(lián)合策略可消除干擾并控制熱原。黑龍江熱原檢測常見問題分析 熱原檢測MAT法...

MAT 法熱原檢測中，細胞傳代的代次控制是保障檢測穩(wěn)定性的關(guān)鍵，需結(jié)合細胞特性與文獻數(shù)據(jù)制定標準。參考行業(yè)文獻，單核細胞系（如 HL-60、THP1）的使用代次通常不超過 20 代，代次過高會導(dǎo)致細胞生物學(xué)特性改變：一是 TLR 受體表達下降，如 TLR4 表達量在 20 代后下降 40%，導(dǎo)致內(nèi)毒素檢測靈敏度降低；二是細胞倍增時間延長，從 24 小時延長至 36 小時，影響共培養(yǎng)時長的準確性；三是炎癥因子分泌減少，IL-6 分泌量在 20 代后下降 35%，導(dǎo)致熱原濃度低估。申科對配套的 HL-60 細胞系進行代次穩(wěn)定性驗證，結(jié)果顯示：1-15 代細胞的熱原響應(yīng)性一致（加標回收率 85%...

單核細胞系憑借標準化、可控性等優(yōu)勢，有效解決PBMC（外周血單個核細胞）在熱原檢測中的局限。其一，單核細胞系源自永生化細胞株（如 Mono-Mac-6），經(jīng)篩選后細胞特性高度均一，消除供體差異，讓熱原檢測結(jié)果穩(wěn)定性大幅提升。其二，其培養(yǎng)過程可控，培養(yǎng)基配方與環(huán)境（溫度、CO?濃度）可準確調(diào)控，能維持細胞好的活性，避免 PBMC 因分選、凍存導(dǎo)致的活性衰減。其三，對培養(yǎng)環(huán)境波動耐受性更強，可保障細胞遺傳穩(wěn)定且無污染物風險，降低熱原檢測的操作復(fù)雜度與誤差率。 在藥品安全語境中，熱原特指細菌性熱原—微生物代謝產(chǎn)物、細菌尸體及內(nèi)毒素的統(tǒng)稱。江蘇醫(yī)療器械熱原檢測流程 生物制品（如單克隆抗體、重組蛋...

MAT法熱原檢測中，獲得標準 S 型標曲需通過顯色時機控制與圖形調(diào)整實現(xiàn)，確保標曲擬合準確。在顯色時機控制上，加入 TMB 底物后，孔內(nèi)顏色會逐漸變藍，且隨反應(yīng)時間加深，當標準品濃度梯度呈現(xiàn)明顯藍色差異（如高濃度孔深藍色、低濃度孔淺藍色）時，即可加入終止液；若儀器含 600nm 波長，可在終止前檢測高濃度標準品的 OD600nm 值，當達到 1.0 左右時終止，此時顯色反應(yīng)處于線性期，終止后顏色由藍變黃，信號強度約增強 3 倍，易形成 S 型曲線。在圖形調(diào)整上，若標曲擬合后未呈現(xiàn)明顯 S 型，可通過調(diào)整坐標軸范圍優(yōu)化—如將縱軸（OD 值）范圍設(shè)為 0-2.5，橫軸（熱原濃度）設(shè)為對數(shù)坐標，...

隨著發(fā)熱反應(yīng)分子機制研究的不斷深化，單核細胞活化試驗（MAT）作為一種體外熱原檢測技術(shù)，愈發(fā)受到醫(yī)藥與醫(yī)療器械行業(yè)的關(guān)注并逐步推廣應(yīng)用。該方法的原理是：讓人體全血與待檢樣品中的熱原充分接觸后，通過檢測體系中產(chǎn)生的 IL-1β、IL-6（因穩(wěn)定性強、重復(fù)性優(yōu)，常作為關(guān)鍵檢測指標）、TNF 等促炎細胞因子含量，實現(xiàn)對熱原污染程度的評估，整個過程能高度模擬人體先天免疫系統(tǒng)對熱原的應(yīng)答反應(yīng)。相較于傳統(tǒng)熱原檢測手段，MAT 的優(yōu)勢更為突出：不僅可檢出各類熱原污染物，包括尚未明確性質(zhì)的未知熱原，以及革蘭氏陽性菌（脂磷壁酸）、真菌、病毒等產(chǎn)生的非內(nèi)毒素熱原，填補了傳統(tǒng)內(nèi)毒素檢測（如鱟試劑法）的覆蓋空白。...

熱原是能引發(fā)恒溫動物體溫異常升高的物質(zhì)總稱，主要成分為細菌內(nèi)毒素（革蘭氏陰性菌脂多糖 LPS），同時涵蓋病毒、真菌毒素、支原體等非內(nèi)毒素熱原，其檢測是保障藥品與醫(yī)療器械安全性的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。當前熱原檢測已形成 “特異性檢測 + 廣譜篩查” 互補的完整體系：以鱟試驗法（含天然 LAL 與重組 rCR/rFC 試劑）作為細菌內(nèi)毒素的特異性檢測手段，憑借 fg 級靈敏度成為制藥行業(yè)常規(guī)質(zhì)控方法，可通過凝膠法實現(xiàn)定性、動態(tài)濁度 / 顯色法完成定量；以家兔熱原試驗作為傳統(tǒng)廣譜篩查方法，雖操作繁瑣（需預(yù)試篩選基礎(chǔ)體溫穩(wěn)定家兔，正式試驗觀察 3 小時體溫變化），但仍是放射性質(zhì)的藥物、血液制品等高風險產(chǎn)品排除...

在 MAT 法熱原檢測中，PBMC（外周血單核細胞）與單核細胞系各有優(yōu)劣，單核細胞系更適合標準化檢測。PBMC 的優(yōu)勢在于免疫細胞成分豐富（含單核細胞、淋巴細胞等），對熱原反應(yīng)敏感，靈敏度相對較高；但局限同樣明顯 ——PBMC 需從不同供體獲取，供體免疫狀態(tài)差異會導(dǎo)致檢測結(jié)果不穩(wěn)定，且無法長期保存，難以建立標準化方法學(xué)。單核細胞系（如 HL-60、MM6、THP1）則克服了 PBMC 的局限：細胞來源穩(wěn)定（可批量培養(yǎng)），TLR 受體表達覆蓋主要亞型（如 HL-60 表達 TLR1-TLR9），對熱原反應(yīng)重復(fù)性好，更適合商業(yè)化試劑盒與法規(guī)檢測。不同單核細胞系性能也有差異：MM6/IL-6 法...

PyroSHENTEK?熱原檢測試劑盒（貨號 1502100，規(guī)格 96 測試 / 盒）優(yōu)勢在于搭載 MAT 特定單核細胞系，細胞表面表達多種 Toll 樣受體（TLR），可響應(yīng)不同類型熱原。該細胞系來源清晰、可溯源，均一性強且無供體依賴，有效規(guī)避了傳統(tǒng) PBMC 因供體差異導(dǎo)致的結(jié)果波動，同時安全風險低，無需擔憂外源因子污染。試劑盒采用 “標準化單核細胞 + ELISA 檢測” 一體化體系，通過嚴格的細胞質(zhì)量控制（如凍存復(fù)融后活率達標），確保每次檢測的細胞狀態(tài)一致；搭配預(yù)包被 IL-6 抗體的酶標板與配套試劑，進一步減少體系誤差。從標曲數(shù)據(jù)來看，其擬合采用 4-Parameter Log...

家兔熱原試驗作為熱原檢測領(lǐng)域的 “法定傳統(tǒng)方法”，被中國藥典（ChP）、美國藥典（USP）、歐洲藥典（EP）均列為法定檢測項目，其主要優(yōu)勢在于可通過家兔體溫應(yīng)答篩查所有類型熱原，尤其適用于無法排除非內(nèi)毒素熱原污染的高風險產(chǎn)品，如血液制品、放射性質(zhì)藥物及部分生物制劑。然而，家兔熱原試驗存在明顯局限：動物個體差異大，需額外投入時間與成本篩選合格家兔；檢測周期長（至少 6 小時），無法滿足生物制品快速放行需求；靈敏度較低（對 LPS 檢測限≥5EU/kg），與全球倡導(dǎo)的“動物福利3R原則”背道而馳。 MAT 法檢測革蘭氏陽性菌注射劑，需排查非內(nèi)毒素熱原（如 LTA），避免只測內(nèi)毒素漏檢。北京化學(xué)...

熱原是能引發(fā)恒溫動物體溫異常升高的物質(zhì)總稱，主要成分為細菌內(nèi)毒素（革蘭氏陰性菌脂多糖 LPS），同時涵蓋病毒、真菌毒素、支原體等非內(nèi)毒素熱原，其檢測是保障藥品與醫(yī)療器械安全性的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。當前熱原檢測已形成 “特異性檢測 + 廣譜篩查” 互補的完整體系：以鱟試驗法（含天然 LAL 與重組 rCR/rFC 試劑）作為細菌內(nèi)毒素的特異性檢測手段，憑借 fg 級靈敏度成為制藥行業(yè)常規(guī)質(zhì)控方法，可通過凝膠法實現(xiàn)定性、動態(tài)濁度 / 顯色法完成定量；以家兔熱原試驗作為傳統(tǒng)廣譜篩查方法，雖操作繁瑣（需預(yù)試篩選基礎(chǔ)體溫穩(wěn)定家兔，正式試驗觀察 3 小時體溫變化），但仍是放射性質(zhì)的藥物、血液制品等高風險產(chǎn)品排除...

歐盟在熱原檢測方法選擇上，以動物保護和檢測準確性為導(dǎo)向，形成明確的法規(guī)傾向。首先，歐盟禁止家兔法（PRT 法）這類動物實驗，要求采用替代方法，單核細胞活化試驗（MAT 法）因符合 3R 原則（替代、減少、優(yōu)化），被納入歐洲藥典（EP2.6.30），成為熱原檢測的主流替代方法。其次，對于鱟試劑法，歐盟雖未禁止（因其屬于鱟血提取而非動物實驗），但出于鱟資源保護考量，推薦使用重組 C 因子法（EP2.6.32），該方法無需依賴鱟血，通過基因工程技術(shù)制備試劑，避免資源衰減與生態(tài)爭議。此外，美國藥典（USP）和日本藥典（JP）也同步推薦重組試劑（含重組級聯(lián)試劑 rCR），形成國際法規(guī)協(xié)同趨勢。需注意...

PBMC（外周血單個核細胞）的供體差異會直接導(dǎo)致熱原檢測結(jié)果的波動，主要體現(xiàn)在 IL-6 釋放水平的不一致。不同供體的 PBMC，其單核細胞比例、TLR 受體表達量、免疫活性狀態(tài)存在差異：有的供體 PBMC 受熱原刺激后， IL-6 釋放量高；有的則極低，甚至無明顯響應(yīng)。實驗數(shù)據(jù)顯示， PBMC 的標曲各濃度點相對偏差有高達 171.43%的，正是這種差異的體現(xiàn)，導(dǎo)致熱原檢測結(jié)果難以標準化，無法準確判斷供試品熱原是否超標，從而增加了藥品的質(zhì)量控制風險。 MAT 熱原檢測中細胞活性影響巨大，活率需達一定標準保證檢測效果。浙江抗體藥物熱原檢測 MAT 試劑盒配套的即用型細胞存在明確的傳代限制...

PBMC（外周血單個核細胞）的復(fù)雜制備流程嚴重制約熱原檢測效率。首先，血源獲取受獻血者數(shù)量、時間及采集血液政策限制，無法按需即時獲取；其次，需嚴格執(zhí)行 EP2.6.30 規(guī)定的標志物檢測，增加前期準備時間；再進行采集血液、分離單核細胞、凍存等環(huán)節(jié)需全程無菌操作，步驟繁瑣且易引入污染風險。相比之下，單核細胞系可工業(yè)化培養(yǎng)，制備流程簡單可控，能快速提供合格細胞，避免因 PBMC 制備延誤熱原檢測進度，更適配批量樣品的高效質(zhì)控。單核細胞系傳代可控，20代以內(nèi)TLR表達與炎癥因子分泌保持穩(wěn)定，確保熱原響應(yīng)一致性。江蘇非動物源熱原檢測常見問題分析 MAT 試劑盒配套的即用型細胞存在明確的傳代限制，且商...

MAT法熱原檢測中，ELISA 加終止液后的讀數(shù)時間需嚴格控制，以保障 IL-6 檢測信號穩(wěn)定。湖州申科生物MAT試劑盒說明書明確要求，終止液添加后需在 10 分鐘內(nèi)完成讀數(shù)，且需避光操作 —— 原因在于，終止液（如硫酸）會終止 TMB 顯色反應(yīng)，但生成的黃色產(chǎn)物在光照下易降解，超過 10 分鐘后 OD 值會下降，導(dǎo)致 IL-6 檢測值偏低。讀數(shù)前需進行 30 秒震蕩混勻，確保孔內(nèi)液體濃度均勻，避免因局部濃度差異導(dǎo)致復(fù)孔 OD 值波動。酶標儀波長需設(shè)置為 450nm，若儀器含 600nm 參考波長，可同時檢測 600nm 波長以扣除背景干擾（如細胞碎片導(dǎo)致的光散射），提升檢測準確性。需注意...

MAT 法熱原檢測背景值偏高會干擾結(jié)果判讀，需從試劑、操作兩方面解決。試劑相關(guān)問題中，非特異性活化（如試劑含微量熱原）會導(dǎo)致細胞異常分泌 IL-6，需選用低內(nèi)毒素的試劑與耗材；檢測試劑添加過多（如抗體濃度過高）會增加非特異性結(jié)合，需按說明書稀釋試劑或降低推薦濃度。操作環(huán)節(jié)問題更多見：孔洗滌不充分會殘留未結(jié)合抗體與酶，需按方案完成規(guī)定洗滌次數(shù)（如 3-5 次），確保洗滌液充分浸潤孔底；洗滌緩沖液污染（如滋生微生物）會引入外源信號，需現(xiàn)配現(xiàn)用緩沖液；加終止液后讀板延遲（超 10 分鐘），會因黃色產(chǎn)物降解導(dǎo)致背景虛高，需加終止液后立即讀板；底物孵育時見光會引發(fā)非特異性顯色，需在避光環(huán)境下進行 T...

傳統(tǒng)細菌內(nèi)毒素檢查法（BET）只能檢測革蘭氏陰性菌的 LPS，無法識別革蘭氏陽性菌 LTA、真菌酵母多糖、病毒鞭毛蛋白等非內(nèi)毒素熱原，存在漏檢風險；同時，部分樣品（如脂質(zhì)體、表面活性劑制劑）會因內(nèi)毒素吸附導(dǎo)致低內(nèi)毒素回收（LER），BET法難以準確定量。MAT 法通過單核細胞表面的多種 TLR 受體（TLR1-TLR10），可識別不同類型熱原：TLR4 識別 LPS、TLR2/TLR6 識別 LTA 與酵母多糖、TLR5 識別鞭毛蛋白、TLR3 識別病毒 dsRNA 等，實現(xiàn) “全熱原覆蓋”。湖州申科生物熱原檢測試劑盒（MAT法）的驗證數(shù)據(jù)顯示，其對不同濃度非內(nèi)毒素熱原均有響應(yīng)：如 0.1...

革蘭氏陽性菌注射劑產(chǎn)品只依賴內(nèi)毒素檢測存在安全風險，需結(jié)合熱原檢測特性制定防控方案。內(nèi)毒素是革蘭氏陰性菌細胞壁的脂多糖成分，而革蘭氏陽性菌可產(chǎn)生非內(nèi)毒素熱原（NEPs），如脂磷壁酸，這類物質(zhì)同樣能引發(fā)人體發(fā)熱反應(yīng)，若只檢測內(nèi)毒素，可能遺漏 NEPs 污染，導(dǎo)致臨床用藥風險。對此，風險評估需重點關(guān)注三點：一是建議開展家兔法與內(nèi)毒素檢測的一致性實驗，對比兩種方法的檢測結(jié)果，排查是否存在內(nèi)毒素未檢出但家兔法陽性的情況；二是采用 MAT 法熱原檢測，其通過單核細胞活化機制，可同時識別內(nèi)毒素與 NEPs，若 MAT 法檢測陽性，需進一步追溯 NEPs 來源；三是若無法排除 NEPs 風險，必須按藥典...

MAT法（單核細胞活化反應(yīng)測定）熱原檢測基于人體免疫反應(yīng)機制設(shè)計，原理是：內(nèi)毒素（革蘭氏陰性菌來源）與非內(nèi)毒素熱原（革蘭氏陽性菌、霉菌、病毒等來源）進入人體后，會活化單核細胞或單核細胞系，使其釋放 IL-6、IL-1、IL-1β、TNF-α 等促炎細胞因子。檢測時將供試品與單核細胞 / 單核細胞系共孵育，再通過 ELISA 定量檢測釋放的 IL-6 含量，結(jié)合內(nèi)毒素標準品繪制的標曲，即可判斷供試品中熱原含量是否符合規(guī)定，實現(xiàn)內(nèi)毒素與非內(nèi)毒素熱原的全覆蓋檢測。 歐洲藥典通則 2.6.30 明確 MAT 可替代家兔法熱原檢查，能同時檢測內(nèi)毒素與非內(nèi)毒素熱原。上海非動物源熱原檢測法規(guī)要求 熱原...

單核細胞系培養(yǎng)的高度可控性，為熱原檢測結(jié)果的可靠性提供關(guān)鍵保障。其培養(yǎng)基配方（如營養(yǎng)成分、血清濃度）可定制，確保細胞獲取充足營養(yǎng)；培養(yǎng)環(huán)境（37℃、5% CO?、濕度≥90%）可恒定控制，維持細胞好的活性與 TLR 受體表達水平，避免因環(huán)境波動導(dǎo)致細胞功能異常。這種可控性還能防止細胞遺傳突變與外源污染（如支原體、病毒），確保不同批次單核細胞系的熱原響應(yīng)一致性，讓熱原檢測結(jié)果批間差異小，符合 GMP 對檢測方法穩(wěn)定性的要求。 保持細胞活性穩(wěn)定，是實現(xiàn)準確熱原檢測的基礎(chǔ)條件。熱原檢測單核細胞活化反應(yīng)測定法 MAT法（單核細胞活化反應(yīng)測定）熱原檢測基于人體免疫反應(yīng)機制設(shè)計，原理是：內(nèi)毒素（革蘭...

相較于傳統(tǒng)家兔法，熱原檢測MAT法在動物福利、檢測性能、適用范圍等方面具有明顯優(yōu)勢。從動物福利看，MAT法使用分離培養(yǎng)的單核細胞系（如湖州申科 HL-60 細胞系），無需動物，完全符合 “減少、替代、優(yōu)化” 的 3R 原則，規(guī)避家兔法的倫理爭議與飼養(yǎng)成本。檢測性能上，家兔法只能定性且靈敏度低（檢測限≥5EU/kg），結(jié)果受動物個體差異、環(huán)境溫度影響大；MAT 法可定量檢測，標曲線性范圍 0.0125-1.0EU/mL，檢測限（LOD）達 0.0125EU/mL，批間 CV≤25%，重復(fù)性更優(yōu)。適用范圍方面，家兔法不適用于放射性質(zhì)藥物、基因療法制劑等可能影響動物體溫的產(chǎn)品；MAT法適配疫苗、...

熱原是指微量即可引發(fā)恒溫動物體溫異常升高的物質(zhì)，分為內(nèi)源性（如細胞因子）與外源性兩類，外源性熱原又涵蓋微生物來源（革蘭氏陰性菌脂多糖 LPS、革蘭氏陽性菌脂磷壁酸 LTA、病毒、真菌等）與非微生物來源（灰塵、橡膠降解產(chǎn)物等）。傳統(tǒng)細菌內(nèi)毒素檢查法（BET）只能檢測革蘭氏陰性菌的 LPS，無法覆蓋非內(nèi)毒素熱原，而單核細胞活化試驗（MAT）可彌補這一缺陷。其原理是：熱原通過活化單核細胞表面的 Toll 樣受體（TLR，如 TLR4 識別 LPS、TLR2/TLR6 識別 LTA），啟動先天免疫反應(yīng)，促使細胞釋放 IL-6、TNF-α 等促炎細胞因子；隨后采用 ELISA 法檢測 IL-6 濃度...