江蘇漢遜酵母宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留檢測試劑盒

中國倉鼠卵巢細(xì)胞（Chinese Hamster Ovary，CHO）是生物制品生產(chǎn)中常用的動物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)，廣泛應(yīng)用于抗體、重組蛋白、疫苗等產(chǎn)品的制備。采用 CHO 細(xì)胞作為宿主進(jìn)行生產(chǎn)時，難免會引入宿主細(xì)胞蛋白（HCP）雜質(zhì)；即便 HCP 殘留量較低，仍可能存在免疫原性，還會帶來降低產(chǎn)品蛋白穩(wěn)定性等風(fēng)險。因此，需對生物制品中的 HCP 殘留進(jìn)行定量分析，從而保障純化工藝的一致性與終產(chǎn)品的安全性。SHENTEK^®CHO 宿主細(xì)胞蛋白（HCP ）殘留檢測試劑盒實現(xiàn)了關(guān)鍵試劑的全國產(chǎn)化，其通過 CHO 細(xì)胞（K1&S）補(bǔ)料分批培養(yǎng)工藝制備 HCPs，再以此免疫綿羊獲取抗體，適用于檢測 CHO 細(xì)胞系表達(dá)的生物制品（如單抗、重組蛋白、疫苗等）中的 HCP 殘留。該試劑盒具有操作步驟少、檢測速度快、專一性強(qiáng)、性能穩(wěn)定可靠的特點。

宿主細(xì)胞蛋白殘留檢測中，抗體覆蓋率評估實驗的操作難度較高，需在實驗方法建立階段對關(guān)鍵步驟開展充分驗證，以確保實驗方法具備穩(wěn)健性。湖州申科研發(fā)的磁珠捕獲式 IMBS 技術(shù)（immunomagnetic beads separation，免疫磁珠分離），在開發(fā)過程中已對關(guān)鍵步驟進(jìn)行充分驗證，相關(guān)驗證結(jié)果已通過專業(yè)評審，具體驗證內(nèi)容（部分）如下：① 方法優(yōu)化：圍繞磁珠與抗體的偶聯(lián)比例、洗滌液體積、洗滌次數(shù)、洗脫次數(shù)等關(guān)鍵參數(shù)開展優(yōu)化驗證，確保方法穩(wěn)健性；② 過程質(zhì)控：二維電泳存在實驗步驟繁瑣、時間跨度大、中間環(huán)節(jié)難把控等問題，因此在等電聚焦實驗環(huán)節(jié)引入熒光標(biāo)記多肽，可快速判定等電聚焦效果；同時在 SDS-PAGE 電泳兩側(cè)增設(shè) 40 ng 銀染質(zhì)控樣品，用于控制銀染顯色過程；③ 方法重復(fù)性：針對 2D 分析與 LC-MS 分析開展重復(fù)性驗證，其中 2D 分析方法的重復(fù)性可達(dá) 80% 以上，LC-MS 分析方法的重復(fù)性可達(dá) 90% 以上；④ 上樣量優(yōu)化：針對 2D 分析與 LC-MS 分析實施上樣量驗證，規(guī)避上樣量差異對檢測結(jié)果的影響；⑤ 假陽性排查：排查樣品與陰性抗體間是否存在非特異性結(jié)合，確認(rèn) IMBS 實驗設(shè)定的步驟與參數(shù)是否會導(dǎo)致假陽性結(jié)果。

湖州申科生物搭建起專業(yè)化宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留檢測平臺，采用 ELISA 技術(shù)對宿主細(xì)胞蛋白總量展開分析，嚴(yán)格控制 CV 偏差與回收率指標(biāo)，確保實驗結(jié)果的真實性，其研發(fā)的試劑盒及抗體具備高靈敏度、強(qiáng)特異性等優(yōu)勢。該平臺在技術(shù)服務(wù)層面提供兩類關(guān)鍵支撐：一是針對 CHO、大腸桿菌（E.coli）、酵母等多種宿主的 HCP 殘留檢測服務(wù)，可直接輸出蛋白殘留量與樣品回收率數(shù)據(jù)；二是配套的樣品適用性驗證體系，借助基質(zhì)定量下限驗證、樣品稀釋度驗證、準(zhǔn)確性驗證及精密度驗證（包含重復(fù)性與中間精密度）等多維度檢測方案，搭配完整的試劑盒性能報告，保障檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性與可溯源性，為生物制品工藝雜質(zhì)控制提供可靠支持

湖州申科生物推出的宿主細(xì)胞殘留蛋白檢測全自動 ELISA 分析系統(tǒng)，整合了標(biāo)曲制備、樣本加樣、恒溫孵育、板孔清洗及結(jié)果檢測等全流程功能。系統(tǒng)搭載的高精度前處理模塊與檢測模塊，通準(zhǔn)確控制實驗參數(shù)，有效減少人為操作誤差，確保實驗結(jié)果的穩(wěn)定性與準(zhǔn)確性。其多模塊單獨(dú)運(yùn)行設(shè)計，可實現(xiàn)不同檢測任務(wù)的并行處理，大幅縮短實驗周期，明顯提升整體實驗效率。在保障結(jié)果可靠的基礎(chǔ)上，該系統(tǒng)實現(xiàn)了 ELISA 實驗的自動化操作、標(biāo)準(zhǔn)化流程與快速化輸出，降低了對實驗人員的技能要求，同時通過優(yōu)化資源配置減少檢測成本。此外，系統(tǒng)內(nèi)置完善的數(shù)據(jù)管理功能，可滿足實驗數(shù)據(jù)完整性記錄與全流程審計追蹤需求，嚴(yán)格符合 21 CFR Part 11 法規(guī)要求，并配備三級權(quán)限管理機(jī)制，進(jìn)一步保障實驗數(shù)據(jù)的安全性與規(guī)范性。

全球范圍內(nèi)快速增長的抗體、蛋白類等生物藥，均由對應(yīng)的工程細(xì)胞生產(chǎn)制備。在生物制品生產(chǎn)流程中，宿主細(xì)胞產(chǎn)生的內(nèi)源性蛋白（即宿主細(xì)胞蛋白，Host Cell Proteins, HCPs），會隨不同工藝環(huán)節(jié)部分殘留在終產(chǎn)品中。HCPs 作為外源蛋白，可能在不同程度上誘發(fā)機(jī)體免疫應(yīng)答，進(jìn)而引發(fā)過敏反應(yīng)或其他不良反應(yīng)；此外，部分殘留 HCPs 具備蛋白酶或脂酶活性，可能造成蛋白藥物或輔料降解，從而加大藥物質(zhì)量與療效的不穩(wěn)定性?；谏鲜鲲L(fēng)險，對藥物中 HCPs 開展定性與定量檢測至關(guān)重要。全球主要藥典（如美國藥典、歐洲藥典、中國藥典）均針對 HCPs 檢測制定了具體要求與標(biāo)準(zhǔn)。

大腸埃希氏菌（Escherichiacoli，簡稱E.coli，又稱大腸桿菌）作為模式微生物，在生命科學(xué)研究領(lǐng)域應(yīng)用較多。伴隨基因治療產(chǎn)業(yè)的快速發(fā)展，它還成為質(zhì)粒DNA（pDNA）生產(chǎn)的主要宿主菌。質(zhì)粒樣品常規(guī)提取工藝中，常使用強(qiáng)堿性溶液進(jìn)行細(xì)胞裂解與蛋白質(zhì)變性，這種處理使其中的宿主細(xì)胞蛋白（HCPs）與傳統(tǒng)物理破碎法得到的HCPs差異明顯，進(jìn)而導(dǎo)致采用免疫學(xué)原理的檢測方法時，殘留檢測結(jié)果偏差較大。湖州申科生物的E.coli克隆菌堿裂HCP殘留檢測試劑盒，適用于大腸埃希氏菌（即大腸桿菌）克隆菌株的HCPs檢測，涵蓋DH5α、Top10、JM109等常見菌株。該試劑盒的抗體制備過程中，采用堿裂工藝制備的HCPs免疫動物，得到專屬抗體，可用于經(jīng)堿液裂解工藝處理后的宿主細(xì)胞蛋白（HCPs）定量檢測。