北京E.coli表達(dá)菌宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留檢測(cè)

為何定制化試劑盒會(huì)成為宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留檢測(cè)的優(yōu)先選擇？關(guān)鍵原因與檢測(cè)準(zhǔn)確性、藥物安全性緊密關(guān)聯(lián)。HCP ELISA 檢測(cè)屬于多分析物檢測(cè)技術(shù)，其檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性，高度依賴校準(zhǔn)品品質(zhì)、抗體質(zhì)量及檢測(cè)方法的構(gòu)建。定制化 HCP ELISA 檢測(cè)試劑盒的主要優(yōu)勢(shì)，在于其依托更具代表性的 HCP 抗原對(duì)動(dòng)物進(jìn)行免疫，由此制備的 HCP 抗體針對(duì)性更突出。這類針對(duì)性抗體可大幅降低 HCP 漏檢風(fēng)險(xiǎn)，特別是針對(duì)生產(chǎn)工藝中特有的高風(fēng)險(xiǎn) HCP 因子，能呈現(xiàn)更優(yōu)的檢出成效，為藥物的安全性、有效性及質(zhì)量可控性提供堅(jiān)實(shí)保障。

湖州申科生物憑借自主可控的供應(yīng)鏈與經(jīng)嚴(yán)格驗(yàn)證的技術(shù)性能，確保 HCP 檢測(cè)試劑盒的長(zhǎng)期穩(wěn)定供應(yīng)及出色分析能力。一方面，公司實(shí)現(xiàn)關(guān)鍵物料自研自產(chǎn)：校準(zhǔn)品通過(guò)凍干工藝大規(guī)模生產(chǎn)，能穩(wěn)定儲(chǔ)存 10 年以上；抗體經(jīng)大動(dòng)物免疫制備，產(chǎn)量可支撐≥10,000 盒試劑盒生產(chǎn)，確保同批次抗體連續(xù)供應(yīng)超 10 年；試劑盒經(jīng)多批次驗(yàn)證，批內(nèi)與批間一致性表現(xiàn)良好。另一方面，所有產(chǎn)品均參照 ICH Q2（R2）及 ICH M10 法規(guī)要求完成驗(yàn)證：以大腸桿菌（E.coli）HCP 產(chǎn)品為例，其線性范圍（1-243 ng/mL）的 R2>0.999，各濃度點(diǎn)回收率偏差≤5%；準(zhǔn)確度處于 81.2%-111.6% 區(qū)間，中間精密度 CV 值為 5.7%-12.4%；定量限（LLOQ）低至 1.5 ng/mL，且對(duì) CHO、HEK293 等多種宿主細(xì)胞的交叉反應(yīng)均低于檢測(cè)限。同時(shí)，借助二維電泳（檢出 826 個(gè)蛋白點(diǎn)）與質(zhì)譜法（鑒定 2204 個(gè)蛋白點(diǎn)）對(duì)校準(zhǔn)品進(jìn)行雙重表征，并運(yùn)用 IMBS-2D（覆蓋率 > 70%）與 IMBS-MS（覆蓋率 84.7%）正交技術(shù)驗(yàn)證抗體覆蓋率，從源頭保障檢測(cè)結(jié)果的全面性與可靠性。

美國(guó)藥典（USP）1132 章節(jié)中，推薦的 HCP 抗體純化方式有兩種，分別是 Protein A/Protein G 親和柱層析法與 HCP 抗原親和柱層析法。這兩種方法各有特點(diǎn)與不足，且均滿足監(jiān)管層面的要求。在實(shí)際應(yīng)用場(chǎng)景中，針對(duì)不同產(chǎn)品，兩種方法可能造成檢測(cè)結(jié)果的差異。兩種方法所獲抗體的關(guān)鍵差異，在于 HCP 抗體有效含量的占比不同。其中，HCP 抗原親和柱層析法的有效含量占比明顯更高，但該方法存在部分 HCP 抗體流失的情況，這會(huì)使得針對(duì)特定樣本的檢測(cè)結(jié)果低于前者，因此企業(yè)在實(shí)際建立檢測(cè)方法時(shí)，需開(kāi)展充分評(píng)估。此外，HCP 抗原親和柱層析法對(duì)純化工藝的要求更為嚴(yán)格，若要確?？贵w的批間一致性，需重點(diǎn)考察 HCP 抗原柱的制備工藝、柱子的使用壽命以及再次制備時(shí)的一致性等關(guān)鍵問(wèn)題。

在宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留檢測(cè)方面，工藝特異型檢測(cè)試劑盒（upstream-process）專門針對(duì)特定生產(chǎn)工藝設(shè)計(jì)，其關(guān)鍵特征是依托產(chǎn)物的實(shí)際宿主細(xì)胞開(kāi)展開(kāi)發(fā)及驗(yàn)證，通過(guò)模擬真實(shí)生產(chǎn)流程制備廣譜 HCP 抗原，且要求抗血清具備高覆蓋率以適配工藝變動(dòng)，從而保障對(duì)特定生產(chǎn)流程中 HCP 殘留的高度準(zhǔn)確監(jiān)控。平臺(tái)型檢測(cè)試劑盒（platform）則由生產(chǎn)商圍繞特定表達(dá)宿主細(xì)胞及相近工藝自主開(kāi)發(fā)，優(yōu)勢(shì)體現(xiàn)在能借助相同參考標(biāo)準(zhǔn)品與試劑，統(tǒng)一監(jiān)測(cè)基于該宿主細(xì)胞生產(chǎn)的不同產(chǎn)品，適用于上游工藝足夠相似的產(chǎn)品線。通用型檢測(cè)試劑盒（commercial）屬于市售廣譜檢測(cè)方案，適合相似宿主細(xì)胞的常規(guī) HCP 檢測(cè)；但由于其制備過(guò)程未必能完全模擬目標(biāo)產(chǎn)物的實(shí)際生產(chǎn)場(chǎng)景，因此需嚴(yán)格評(píng)估多克隆抗體對(duì)特定產(chǎn)品 HCP 的覆蓋率，以此確保檢測(cè)結(jié)果的可靠性。這三類試劑盒覆蓋了從深度定制到通用篩查的各類 HCP 檢測(cè)需求。

操作規(guī)范是影響宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留檢測(cè)結(jié)果的關(guān)鍵因素之一。一方面，實(shí)驗(yàn)人員的專業(yè)能力與實(shí)操經(jīng)驗(yàn)會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性，熟練人員可準(zhǔn)確完成樣品處理、試劑配制及儀器操作，降低人為誤差。另一方面，科學(xué)的HCP檢測(cè)方法在開(kāi)發(fā)與應(yīng)用階段，需納入操作的合理變動(dòng)區(qū)間（即耐用性）并配套質(zhì)控措施，從流程層面較大程度規(guī)避人為誤差對(duì)結(jié)果的干擾。此外，嚴(yán)格遵照標(biāo)準(zhǔn)操作流程（SOP）是保障檢測(cè)結(jié)果可靠性的關(guān)鍵，操作步驟不規(guī)范易造成結(jié)果重復(fù)性不佳或誤差擴(kuò)大。目前，湖州申科已正式推出全自動(dòng)HCP ELISA檢測(cè)系統(tǒng)，可完成樣品制備、孵育、洗板到數(shù)據(jù)采集的全流程操作，搭配實(shí)驗(yàn)室信息管理系統(tǒng)（LIMS），能實(shí)現(xiàn)“輸入即輸出”，降低流程誤差。

湖州申科生物依據(jù)不同宿主的實(shí)際生產(chǎn)工藝，借助高質(zhì)量免疫原與HCP多抗的標(biāo)準(zhǔn)化制備流程，制備出高效價(jià)、高覆蓋率的抗體，進(jìn)而開(kāi)發(fā)出SHENTEK^®HCP檢測(cè)試劑盒：適配大腸桿菌表達(dá)菌（BL21）生產(chǎn)工藝及克隆菌堿裂法提取質(zhì)粒工藝，以及適配CHO、MDCK、HEK293、Sf9、VERO、畢赤酵母等不同宿主，可用于中間品、原液及終產(chǎn)品的HCP定量監(jiān)測(cè)。為保障ELISA法對(duì)HCP定量檢測(cè)的準(zhǔn)確性，需對(duì)HCP抗體覆蓋率開(kāi)展驗(yàn)證。湖州申科的抗體覆蓋率平臺(tái)，采用2D Clean-up試劑盒去除蛋白樣品中的干擾物（如洗滌劑、鹽、脂質(zhì)、酚類、核酸等離子污染物），同時(shí)設(shè)置2D質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)品實(shí)施嚴(yán)格質(zhì)控，并以陰性抗體作為對(duì)照開(kāi)展平行試驗(yàn)，以此提升結(jié)果準(zhǔn)確度。