上海通用型宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留檢測(cè)抗體覆蓋率驗(yàn)證

湖州申科生物依托先進(jìn)的整合技術(shù)平臺(tái)，在 HCP 檢測(cè)領(lǐng)域構(gòu)筑優(yōu)勢(shì)。公司自主研發(fā)出突破性技術(shù)，包括基于 IMBS 的抗體覆蓋率檢測(cè)方法與基于核酸文庫的低豐度 HCP 富集技術(shù)，有效提升 HCP 檢測(cè)靈敏度與抗體覆蓋能力，相關(guān)成果已在《中國新藥雜志》《藥物分析雜志》等期刊發(fā)表，且被納入國家科技重大專項(xiàng)。同時(shí)，借助前沿的精密分析平臺(tái)，湖州申科打造了覆蓋完整 HCP 分析鏈條的 LC-MS 解決方案，涵蓋抗原一致性評(píng)價(jià)、IMBS 前處理、低豐度蛋白富集、生信分析及專屬數(shù)據(jù)庫構(gòu)建等關(guān)鍵環(huán)節(jié)，構(gòu)建起從樣品管理到風(fēng)險(xiǎn)分析的閉環(huán)體系。該平臺(tái)嚴(yán)格遵循法規(guī)要求，所有檢測(cè)技術(shù)均通過符合 ICH 及藥典標(biāo)準(zhǔn)的方法學(xué)驗(yàn)證，確保檢測(cè)數(shù)據(jù)可靠，且滿足生物制品申報(bào)（如 IND/BLA）的法規(guī)要求。憑借這一技術(shù)整合能力，公司已為國內(nèi)外上百家生物醫(yī)藥企業(yè)提供從工藝開發(fā)到質(zhì)控放行的一站式 HCP 檢測(cè)服務(wù)，助力單抗、疫苗等產(chǎn)品提升安全性與合規(guī)性。

定制化試劑盒之所以成為宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留檢測(cè)的優(yōu)先選擇，原因之一在于其構(gòu)建的定制化檢測(cè)體系，更契合商業(yè)化生產(chǎn)中HCP工藝雜質(zhì)的控制需求。在HCP校準(zhǔn)品與HCP抗體這兩大關(guān)鍵試劑組分符合要求的基礎(chǔ)上，定制化方法的建立與優(yōu)化依托真實(shí)的純化中間品及原液樣品開展，通過優(yōu)化檢測(cè)條件提升對(duì)低濃度HCPs的檢測(cè)靈敏度，從而滿足工藝驗(yàn)證與過程控制的需求。進(jìn)入臨床三期階段，生產(chǎn)工藝需開展系統(tǒng)驗(yàn)證，以保障工藝的穩(wěn)定性與可重復(fù)性。此時(shí)，定制化HCPELISA檢測(cè)方法可更準(zhǔn)確地監(jiān)測(cè)生產(chǎn)工藝中HCP的去除成效，為工藝驗(yàn)證提供堅(jiān)實(shí)支撐。在過程控制環(huán)節(jié)，借助工藝特異型HCPELISA檢測(cè)方法，可實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)生產(chǎn)過程中的HCP水平，擁有更強(qiáng)的生產(chǎn)異常預(yù)警能力，能及時(shí)排查生產(chǎn)風(fēng)險(xiǎn)，保障產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定。編輯分享將定制化試劑盒用于HCP殘留檢測(cè)的優(yōu)勢(shì)分點(diǎn)列出推薦一些關(guān)于定制化試劑盒在HCP殘留檢測(cè)中應(yīng)用的研究報(bào)告除了文中提到的方法，還有哪些可以提高HCP檢測(cè)靈敏度的技術(shù)？

湖州申科生物專注于研發(fā)貼合實(shí)際生產(chǎn)工藝的商業(yè)化宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留檢測(cè)試劑盒，依托不同工藝下 HCP 的差異化分析，針對(duì)性推出各細(xì)分工藝領(lǐng)域的 HCP 檢測(cè)試劑盒。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示：針對(duì) CHO-S 與 CHO-K1 兩種宿主細(xì)胞，兩類細(xì)胞共享 2458 種相同 HCP（占比 79.7%），但各自存在 392 種和 236 種特異性 HCP，充分體現(xiàn)工藝差異帶來的殘留蛋白特異性。進(jìn)一步對(duì)比 B3 表達(dá)菌與 K2 克隆菌，盡管二者共享 1489 種相同蛋白（分別占比 88% 和 85%），但仍各自檢出 208 種和 258 種獨(dú)有蛋白，差異率為 12%-15%。這些結(jié)果直接證實(shí)，不同工藝路線與克隆株選擇會(huì)影響 HCP 殘留譜的構(gòu)成。據(jù)此，湖州申科提出 “工藝定制化檢測(cè)” 策略：通過準(zhǔn)確識(shí)別共性與特異性 HCP，針對(duì)性研發(fā)細(xì)分試劑盒產(chǎn)品。

宿主細(xì)胞蛋白殘留檢測(cè)中，抗體覆蓋率評(píng)估實(shí)驗(yàn)的操作難度較高，需在實(shí)驗(yàn)方法建立階段對(duì)關(guān)鍵步驟開展充分驗(yàn)證，以確保實(shí)驗(yàn)方法具備穩(wěn)健性。湖州申科研發(fā)的磁珠捕獲式 IMBS 技術(shù)（immunomagnetic beads separation，免疫磁珠分離），在開發(fā)過程中已對(duì)關(guān)鍵步驟進(jìn)行充分驗(yàn)證，相關(guān)驗(yàn)證結(jié)果已通過專業(yè)評(píng)審，具體驗(yàn)證內(nèi)容（部分）如下：① 方法優(yōu)化：圍繞磁珠與抗體的偶聯(lián)比例、洗滌液體積、洗滌次數(shù)、洗脫次數(shù)等關(guān)鍵參數(shù)開展優(yōu)化驗(yàn)證，確保方法穩(wěn)健性；② 過程質(zhì)控：二維電泳存在實(shí)驗(yàn)步驟繁瑣、時(shí)間跨度大、中間環(huán)節(jié)難把控等問題，因此在等電聚焦實(shí)驗(yàn)環(huán)節(jié)引入熒光標(biāo)記多肽，可快速判定等電聚焦效果；同時(shí)在 SDS-PAGE 電泳兩側(cè)增設(shè) 40 ng 銀染質(zhì)控樣品，用于控制銀染顯色過程；③ 方法重復(fù)性：針對(duì) 2D 分析與 LC-MS 分析開展重復(fù)性驗(yàn)證，其中 2D 分析方法的重復(fù)性可達(dá) 80% 以上，LC-MS 分析方法的重復(fù)性可達(dá) 90% 以上；④ 上樣量?jī)?yōu)化：針對(duì) 2D 分析與 LC-MS 分析實(shí)施上樣量驗(yàn)證，規(guī)避上樣量差異對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響；⑤ 假陽性排查：排查樣品與陰性抗體間是否存在非特異性結(jié)合，確認(rèn) IMBS 實(shí)驗(yàn)設(shè)定的步驟與參數(shù)是否會(huì)導(dǎo)致假陽性結(jié)果。

湖州申科在宿主細(xì)胞蛋白（HCP）ELISA 檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域具備深厚技術(shù)積累，已成功搭建高質(zhì)量全流程自有開發(fā)平臺(tái)，覆蓋 HCP 檢測(cè)試劑盒研發(fā)的關(guān)鍵環(huán)節(jié)：①抗原表征與制備：依托合規(guī)平臺(tái)的 HCP Reference/Antigen 制備能力，采用 2D 凝膠電泳等先進(jìn)技術(shù)保障抗原庫的代表性；②動(dòng)物免疫與抗體制備：憑借自有免疫動(dòng)物平臺(tái)，把控免疫原設(shè)計(jì)及動(dòng)物免疫流程，獲得高特異性、廣覆蓋度的抗體；③體系開發(fā)與驗(yàn)證：借助成熟技術(shù)經(jīng)驗(yàn)開發(fā)高靈敏度、高穩(wěn)定性檢測(cè)體系，且嚴(yán)格依照 GMP 標(biāo)準(zhǔn)完成方法學(xué)驗(yàn)證。該平臺(tái)通過全流程自主可控的技術(shù)整合，從源頭保障試劑盒性能的一致性與可靠性，降低不同批次試劑盒的檢測(cè)變異性。其研發(fā)的 HCP ELISA 試劑盒已成功為國內(nèi)外 200 余家生物醫(yī)藥企業(yè)提供服務(wù)，為單抗、疫苗等生物制品的工藝開發(fā)、質(zhì)量控制及 IND/BLA 等法規(guī)申報(bào)，提供符合監(jiān)管要求的定制化檢測(cè)解決方案。

宿主細(xì)胞蛋白（HCP）多與細(xì)胞關(guān)鍵功能相關(guān)，例如細(xì)胞增殖、基因轉(zhuǎn)錄、蛋白合成修飾、細(xì)胞存活及凋亡等，在生產(chǎn)工藝中會(huì)因細(xì)胞分泌、死亡或裂解而釋放。生產(chǎn)過程里，有三大因素主要影響 HCP 的組成與豐度：①宿主細(xì)胞基因組調(diào)控及培養(yǎng)工藝：特定工藝下，潛在 HCP 數(shù)量可能極多，且并非所有基因都會(huì)表達(dá)，部分基因的表達(dá)具有時(shí)間和條件特異性；像大腸桿菌約含 4300 個(gè)基因，不同工藝產(chǎn)物會(huì)經(jīng)歷獨(dú)特的翻譯后修飾，這增加了 HCP 的總數(shù)與生化復(fù)雜性。研究顯示，大腸桿菌表達(dá)的蛋白間存在數(shù)量差異，這種差異可能是對(duì)環(huán)境條件的適應(yīng)性反應(yīng)，但 85-90% 具有潛在免疫原性的 HCP 在不同發(fā)酵過程中均會(huì)出現(xiàn)。②產(chǎn)物表達(dá)方式：宿主細(xì)胞與外源基因、載體及輔助成分構(gòu)成的體系，可實(shí)現(xiàn)穩(wěn)定、瞬時(shí)及誘導(dǎo)表達(dá)；以大腸桿菌為例，常見表達(dá)形式包括胞內(nèi)表達(dá)、分泌表達(dá)、可溶性表達(dá)、不溶性包涵體形式，還有融合與非融合表達(dá)。③純化步驟及產(chǎn)品自身特性的影響：純化過程中能去除 99% 以上的 HCP，但仍有少量殘留 HCP 留在產(chǎn)品中，這些殘留 HCP 可能與產(chǎn)品結(jié)合，隨產(chǎn)品一同被純化。