上海通用型宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測免疫策略

來源： 發(fā)布時間：2025-11-03

湖州申科生物依據(jù)不同宿主的實際生產(chǎn)工藝，借助高質(zhì)量免疫原與HCP多抗的標準化制備流程，制備出高效價、高覆蓋率的抗體，進而開發(fā)出SHENTEK®HCP檢測試劑盒：適配大腸桿菌表達菌（BL21）生產(chǎn)工藝及克隆菌堿裂法提取質(zhì)粒工藝，以及適配CHO、MDCK、HEK293、Sf9、VERO、畢赤酵母等不同宿主，可用于中間品、原液及終產(chǎn)品的HCP定量監(jiān)測。為保障ELISA法對HCP定量檢測的準確性，需對HCP抗體覆蓋率開展驗證。湖州申科的抗體覆蓋率平臺，采用2D Clean-up試劑盒去除蛋白樣品中的干擾物（如洗滌劑、鹽、脂質(zhì)、酚類、核酸等離子污染物），同時設置2D質(zhì)控標準品實施嚴格質(zhì)控，并以陰性抗體作為對照開展平行試驗，以此提升結果準確度。
不同技術平臺獲得的抗體覆蓋率水平不一樣，一般覆蓋率水平從高到低依次IMBS-MS>IMBS-2D>2D-Western Blot。上海通用型宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測免疫策略

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宿主細胞蛋白（HCP）多與細胞關鍵功能相關，像細胞增殖、基因轉(zhuǎn)錄、蛋白合成修飾、細胞存活及凋亡等，工藝過程中會通過細胞分泌，或因細胞死亡、裂解而釋放。生產(chǎn)環(huán)節(jié)中，主要有三方面因素影響HCP的組成與豐度：①宿主細胞基因組調(diào)控及培養(yǎng)工藝：特定工藝下潛在HCP數(shù)量可能極多，且并非所有基因都會表達，部分基因的表達存在時間與條件差異；例如大腸桿菌約含4300個基因，不同工藝產(chǎn)物會經(jīng)歷獨特的翻譯后修飾，增加HCP的總數(shù)與生化復雜性。研究表明，大腸桿菌表達的蛋白存在數(shù)量差異，這可能是對環(huán)境條件的適應性反應，但85-90%有潛在免疫原性的HCP在不同發(fā)酵過程中均會出現(xiàn)。②產(chǎn)物表達方式：宿主細胞與外源基因、載體及輔助成分構成的體系，可實現(xiàn)穩(wěn)定、瞬時及誘導表達；以大腸桿菌為例，常見的表達形式包括胞內(nèi)表達、分泌表達、可溶性表達、不溶性包涵體形式，以及融合與非融合表達。③純化步驟及產(chǎn)品自身特性：純化過程中能去除99%以上的HCP，但仍有殘留HCP保留在產(chǎn)品中，這些殘留HCP可能與產(chǎn)品結合，隨產(chǎn)品一同完成純化。
CHO-K1宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測方法學驗證HCP 定制化開發(fā)需構建成熟平臺、技術實力、合規(guī)體系、穩(wěn)定供應、專業(yè)團隊及成功案例的全維度支撐體系。

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湖州申科生物參照 USP 通則 <1132.1> 的相關內(nèi)容，憑借公司在生物制品質(zhì)量控制領域十余年的深耕經(jīng)驗，對 LC-MS 檢測 HCPs 的方法開展評價與優(yōu)化。同時通過為 LC-MS 檢測 HCPs 的整體流程構建完整質(zhì)控體系，建立起一套抗干擾能力強、穩(wěn)定性佳、準確度高且結果真實可靠的 LC-MS 檢測 HCPs 標準方法。該檢測技術平臺包含樣品制備、質(zhì)譜檢測、數(shù)據(jù)生信分析及質(zhì)譜結果方法驗證四個部分，目前利用該 LC-MS 平臺已完成對 293T、不同工藝大腸桿菌（E.coli）、CHO、Vero、MDCK、Sf9 等不同工程細胞 HCPs 抗體覆蓋率的檢測分析。

樣品質(zhì)量是影響宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測結果的因素之一。HCP 檢測覆蓋生物制品生產(chǎn)全流程，包含收獲、純化、制備等多個環(huán)節(jié)，不同樣品基質(zhì)會導致 HCP 檢測結果存在明顯差異。以含佐劑的疫苗為例，佐劑會產(chǎn)生干擾，導致成品中難以檢測 HCP，因此通常在吸附工藝前的原液階段開展檢測。此外，樣品的收集、處理及保存方式也對檢測結果有重要影響。處理方式不當可能造成蛋白降解或變性，進而影響檢測結果。比如將歷史批樣品用作內(nèi)部質(zhì)控品時，需結合其穩(wěn)定性數(shù)據(jù)，合理設定保存條件與保存期限，以此保障檢測方法的準確性和穩(wěn)定性。
樣品與抗體的匹配程度對宿主細胞蛋白殘留檢測的結果影響很大。

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湖州申科生物CHO-K1HCP殘留檢測試劑盒（一步酶聯(lián)免疫吸附法），采用固相酶聯(lián)免疫吸附法原理，可對CHO-K1細胞生產(chǎn)的生物制品中宿主殘留蛋白進行定量檢測。檢測時，向預包被抗CHO-K1HCPs綿羊多抗的酶標板中，加入校準品或待測樣品、HRP標記的抗CHO-K1HCPs綿羊多抗共同孵育。洗滌后加入TMB底物顯色，隨后用終止液終止酶促反應；再用酶標儀在450nm波長下測定吸光度，該吸光度與校準品或待測樣品中HCPs濃度呈正相關，依據(jù)校準品擬合的劑量-反應曲線，即可算出待測樣品中HCPs的濃度。該試劑盒對待測樣品無需特殊處理，通過合適稀釋比例的適用性驗證，即可直接使用。且試劑盒操作步驟少、檢測快速，同時具備專一性強、性能穩(wěn)定可靠的特點。
湖州申科自主開發(fā)的抗體覆蓋率驗證IMBS平臺經(jīng)完善驗證，結果可靠，符合法規(guī)要求，可用于申報。CHO-K1宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測抗體覆蓋率驗證

SHENTEK? AutoElisa-4K HCP 檢測自動化系統(tǒng)可減少人為誤差，滿足 21 CFR Part 11 數(shù)據(jù)管理要求。上海通用型宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測免疫策略

在宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測方面，工藝特異型檢測試劑盒（upstream-process）專門針對特定生產(chǎn)工藝設計，其關鍵特征是依托產(chǎn)物的實際宿主細胞開展開發(fā)及驗證，通過模擬真實生產(chǎn)流程制備廣譜 HCP 抗原，且要求抗血清具備高覆蓋率以適配工藝變動，從而保障對特定生產(chǎn)流程中 HCP 殘留的高度準確監(jiān)控。平臺型檢測試劑盒（platform）則由生產(chǎn)商圍繞特定表達宿主細胞及相近工藝自主開發(fā)，優(yōu)勢體現(xiàn)在能借助相同參考標準品與試劑，統(tǒng)一監(jiān)測基于該宿主細胞生產(chǎn)的不同產(chǎn)品，適用于上游工藝足夠相似的產(chǎn)品線。通用型檢測試劑盒（commercial）屬于市售廣譜檢測方案，適合相似宿主細胞的常規(guī) HCP 檢測；但由于其制備過程未必能完全模擬目標產(chǎn)物的實際生產(chǎn)場景，因此需嚴格評估多克隆抗體對特定產(chǎn)品 HCP 的覆蓋率，以此確保檢測結果的可靠性。這三類試劑盒覆蓋了從深度定制到通用篩查的各類 HCP 檢測需求。
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