北京釀酒酵母宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留檢測(cè)

湖州申科生物依托先進(jìn)的整合技術(shù)平臺(tái)，在 HCP 檢測(cè)領(lǐng)域構(gòu)筑優(yōu)勢(shì)。公司自主研發(fā)出突破性技術(shù)，包括基于 IMBS 的抗體覆蓋率檢測(cè)方法與基于核酸文庫(kù)的低豐度 HCP 富集技術(shù)，有效提升 HCP 檢測(cè)靈敏度與抗體覆蓋能力，相關(guān)成果已在《中國(guó)新藥雜志》《藥物分析雜志》等期刊發(fā)表，且被納入國(guó)家科技重大專項(xiàng)。同時(shí)，借助前沿的精密分析平臺(tái)，湖州申科打造了覆蓋完整 HCP 分析鏈條的 LC-MS 解決方案，涵蓋抗原一致性評(píng)價(jià)、IMBS 前處理、低豐度蛋白富集、生信分析及專屬數(shù)據(jù)庫(kù)構(gòu)建等關(guān)鍵環(huán)節(jié)，構(gòu)建起從樣品管理到風(fēng)險(xiǎn)分析的閉環(huán)體系。該平臺(tái)嚴(yán)格遵循法規(guī)要求，所有檢測(cè)技術(shù)均通過符合 ICH 及藥典標(biāo)準(zhǔn)的方法學(xué)驗(yàn)證，確保檢測(cè)數(shù)據(jù)可靠，且滿足生物制品申報(bào)（如 IND/BLA）的法規(guī)要求。憑借這一技術(shù)整合能力，公司已為國(guó)內(nèi)外上百家生物醫(yī)藥企業(yè)提供從工藝開發(fā)到質(zhì)控放行的一站式 HCP 檢測(cè)服務(wù)，助力單抗、疫苗等產(chǎn)品提升安全性與合規(guī)性。

湖州申科生物參照 USP 通則 <1132.1> 的相關(guān)內(nèi)容，憑借公司在生物制品質(zhì)量控制領(lǐng)域十余年的深耕經(jīng)驗(yàn)，對(duì) LC-MS 檢測(cè) HCPs 的方法開展評(píng)價(jià)與優(yōu)化。同時(shí)通過為 LC-MS 檢測(cè) HCPs 的整體流程構(gòu)建完整質(zhì)控體系，建立起一套抗干擾能力強(qiáng)、穩(wěn)定性佳、準(zhǔn)確度高且結(jié)果真實(shí)可靠的 LC-MS 檢測(cè) HCPs 標(biāo)準(zhǔn)方法。該檢測(cè)技術(shù)平臺(tái)包含樣品制備、質(zhì)譜檢測(cè)、數(shù)據(jù)生信分析及質(zhì)譜結(jié)果方法驗(yàn)證四個(gè)部分，目前利用該 LC-MS 平臺(tái)已完成對(duì) 293T、不同工藝大腸桿菌（E.coli）、CHO、Vero、MDCK、Sf9 等不同工程細(xì)胞 HCPs 抗體覆蓋率的檢測(cè)分析。

定制化試劑盒之所以成為宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留檢測(cè)的優(yōu)先選擇，關(guān)鍵原因之一是其構(gòu)建的檢測(cè)體系更契合商業(yè)化生產(chǎn)中HCP工藝雜質(zhì)的控制需求。在HCP校準(zhǔn)品與HCP抗體這兩大關(guān)鍵試劑組分達(dá)標(biāo)后，定制化方法的建立與優(yōu)化會(huì)依托真實(shí)的純化中間品及原液樣品開展——通過優(yōu)化檢測(cè)條件提升對(duì)低濃度HCP的檢測(cè)靈敏度，從而滿足工藝驗(yàn)證與過程控制的需求。臨床三期階段需對(duì)生產(chǎn)工藝開展系統(tǒng)驗(yàn)證，以保障其穩(wěn)定性與可重復(fù)性，而定制化HCPELISA檢測(cè)方法能更準(zhǔn)確地監(jiān)測(cè)工藝中HCP的去除效果，為工藝驗(yàn)證提供堅(jiān)實(shí)支撐。過程控制環(huán)節(jié)，借助工藝特異型HCP ELISA檢測(cè)方法，可實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)生產(chǎn)過程中的HCP水平，擁有更強(qiáng)的生產(chǎn)異常預(yù)警能力，能及時(shí)排查生產(chǎn)風(fēng)險(xiǎn)，保障產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定。

宿主細(xì)胞蛋白（HCP）多與細(xì)胞關(guān)鍵功能相關(guān)，例如細(xì)胞增殖、基因轉(zhuǎn)錄、蛋白合成修飾、細(xì)胞存活及凋亡等，在生產(chǎn)工藝中會(huì)因細(xì)胞分泌、死亡或裂解而釋放。生產(chǎn)過程里，有三大因素主要影響 HCP 的組成與豐度：①宿主細(xì)胞基因組調(diào)控及培養(yǎng)工藝：特定工藝下，潛在 HCP 數(shù)量可能極多，且并非所有基因都會(huì)表達(dá)，部分基因的表達(dá)具有時(shí)間和條件特異性；像大腸桿菌約含 4300 個(gè)基因，不同工藝產(chǎn)物會(huì)經(jīng)歷獨(dú)特的翻譯后修飾，這增加了 HCP 的總數(shù)與生化復(fù)雜性。研究顯示，大腸桿菌表達(dá)的蛋白間存在數(shù)量差異，這種差異可能是對(duì)環(huán)境條件的適應(yīng)性反應(yīng)，但 85-90% 具有潛在免疫原性的 HCP 在不同發(fā)酵過程中均會(huì)出現(xiàn)。②產(chǎn)物表達(dá)方式：宿主細(xì)胞與外源基因、載體及輔助成分構(gòu)成的體系，可實(shí)現(xiàn)穩(wěn)定、瞬時(shí)及誘導(dǎo)表達(dá)；以大腸桿菌為例，常見表達(dá)形式包括胞內(nèi)表達(dá)、分泌表達(dá)、可溶性表達(dá)、不溶性包涵體形式，還有融合與非融合表達(dá)。③純化步驟及產(chǎn)品自身特性的影響：純化過程中能去除 99% 以上的 HCP，但仍有少量殘留 HCP 留在產(chǎn)品中，這些殘留 HCP 可能與產(chǎn)品結(jié)合，隨產(chǎn)品一同被純化。

湖州申科生物專注于提供契合嚴(yán)苛法規(guī)要求的宿主細(xì)胞蛋白（HCP）ELISA 檢測(cè)試劑盒，主要目標(biāo)是滿足抗體藥、疫苗等生物制品在 IND/BLA 申報(bào)階段的監(jiān)管標(biāo)準(zhǔn)。為實(shí)現(xiàn)這一目標(biāo)，公司搭建了全流程依規(guī)開發(fā)的質(zhì)量管控體系 —— 整個(gè)開發(fā)過程嚴(yán)格遵循 ISO 13485 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，同時(shí)能充分滿足用戶審計(jì)需求，從體系層面保障產(chǎn)品合規(guī)性。其開發(fā)流程包含三大關(guān)鍵階段，前兩大基礎(chǔ)階段聚焦關(guān)鍵物料的品質(zhì)把控：一是 HCP 殘留定量檢測(cè)參考品開發(fā)，重點(diǎn)是構(gòu)建可靠的 HCP 抗原參考品，需完成抗原表征、量值溯源與賦值、均一性驗(yàn)證及穩(wěn)定性考察等工作，為檢測(cè)準(zhǔn)確性與樣品代表性奠定基礎(chǔ)；二是高質(zhì)量大批量抗體制備，通過優(yōu)化的 HCP 抗原動(dòng)物免疫策略，搭配嚴(yán)謹(jǐn)?shù)目贵w質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)（含標(biāo)準(zhǔn)制定、覆蓋率驗(yàn)證）與穩(wěn)定的制備工藝，生產(chǎn)出高特異性、廣覆蓋度的檢測(cè)抗體，確保后續(xù)檢測(cè)的特異性與靈敏度。

磷脂酶 B 樣蛋白 2（Phospholipase B-Like 2，PLBL2/PLBD2），憑借強(qiáng)共純化能力、高免疫原性及潛在酶活性，被認(rèn)定為 CHO 宿主細(xì)胞蛋白（HCP）中的關(guān)鍵高風(fēng)險(xiǎn)因子之一。當(dāng)前行業(yè)建議，需針對(duì)性開發(fā)特定檢測(cè)方法，對(duì)這類已知或特定蛋白進(jìn)行監(jiān)控，以更有效把控其潛在風(fēng)險(xiǎn)。SHENTEK^® CHO PLBL-2 殘留檢測(cè)試劑盒（酶聯(lián)免疫吸附法）由湖州申科生物自主研發(fā)，擁有完全自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)，是一款 CHO PLBL-2 蛋白通用檢測(cè)試劑盒。該試劑盒適用于對(duì) CHO 表達(dá)系統(tǒng)生產(chǎn)的生物制品中，CHO HCP 高風(fēng)險(xiǎn)蛋白 PLBL-2 進(jìn)行定量檢測(cè)，且操作步驟少、檢測(cè)快速，兼具強(qiáng)檢測(cè)專一性與穩(wěn)定可靠的性能。