北京原料藥熱原檢測MAT法

PyroSHENTEK^®熱原檢測試劑盒以 “簡化流程、提升效率” 為設(shè)計理念，采用即用型細(xì)胞，凍存細(xì)胞無需離心復(fù)蘇培養(yǎng)，復(fù)融后可直接與供試品混合共孵育，大幅節(jié)省傳統(tǒng)細(xì)胞預(yù)處理（如調(diào)整細(xì)胞狀態(tài)、鋪板培養(yǎng)）的時間成本。實(shí)驗(yàn)流程清晰可控：只需按要求制備待測供試品與內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品，各取對應(yīng)體積加入細(xì)胞懸液（每孔加樣量明確），經(jīng) 37℃、5% CO?孵育 24 小時后，離心收集上清并通過 ELISA 法檢測 IL-6 含量，全程可在 24 小時內(nèi)獲得穩(wěn)定可靠的檢測結(jié)果。這種便捷性尤其適配實(shí)驗(yàn)室高通量檢測需求，減少人員操作步驟的同時，降低了因復(fù)雜操作引入的誤差風(fēng)險，兼顧效率與準(zhǔn)確性。

MAT 法熱原檢測的穩(wěn)定性需從細(xì)胞、試劑、操作、樣品四維度嚴(yán)格把控。細(xì)胞層面，細(xì)胞活性與純度直接決定熱原響應(yīng)能力，活性不足會減少炎癥因子分泌，純度低則引入雜細(xì)胞干擾；細(xì)胞批次間一致性也關(guān)鍵，TLR 受體表達(dá)、倍增時間差異會導(dǎo)致結(jié)果波動。試劑與耗材方面，標(biāo)準(zhǔn)品效價需溯源國際標(biāo)準(zhǔn)，避免降解影響標(biāo)曲；試劑盒中細(xì)胞因子需質(zhì)控，防止外源熱原污染；培養(yǎng)液、緩沖液及無熱原耗材（吸頭、西林瓶）若熱原控制不當(dāng)，易引發(fā)假陽性。操作上，加樣手法要統(tǒng)一（如 8 通道移液器液面一致），孵育需 37℃、5% CO?穩(wěn)定環(huán)境，試劑配制濃度準(zhǔn)確，設(shè)備（酶標(biāo)儀、洗板機(jī)）定期校準(zhǔn)，操作偏差會直接導(dǎo)致異常。樣品層面，自身干擾物質(zhì)（消除炎癥成分、高鹽）、pH 偏離 6-8 或微生物污染，會抑制細(xì)胞活化或引入外源熱原，需針對性預(yù)處理。

MAT法熱原檢測中，獲得標(biāo)準(zhǔn) S 型標(biāo)曲需通過顯色時機(jī)控制與圖形調(diào)整實(shí)現(xiàn)，確保標(biāo)曲擬合準(zhǔn)確。在顯色時機(jī)控制上，加入 TMB 底物后，孔內(nèi)顏色會逐漸變藍(lán)，且隨反應(yīng)時間加深，當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)品濃度梯度呈現(xiàn)明顯藍(lán)色差異（如高濃度孔深藍(lán)色、低濃度孔淺藍(lán)色）時，即可加入終止液；若儀器含 600nm 波長，可在終止前檢測高濃度標(biāo)準(zhǔn)品的 OD600nm 值，當(dāng)達(dá)到 1.0 左右時終止，此時顯色反應(yīng)處于線性期，終止后顏色由藍(lán)變黃，信號強(qiáng)度約增強(qiáng) 3 倍，易形成 S 型曲線。在圖形調(diào)整上，若標(biāo)曲擬合后未呈現(xiàn)明顯 S 型，可通過調(diào)整坐標(biāo)軸范圍優(yōu)化—如將縱軸（OD 值）范圍設(shè)為 0-2.5，橫軸（熱原濃度）設(shè)為對數(shù)坐標(biāo)，突出低濃度區(qū)的拐點(diǎn)與高濃度區(qū)的平臺區(qū)，使曲線更接近 S 型。此外，標(biāo)曲配制需確保濃度點(diǎn)單獨(dú)配制（非連續(xù)稀釋），避免高濃度標(biāo)準(zhǔn)品污染低濃度點(diǎn)，導(dǎo)致低濃度區(qū)信號異常升高，破壞 S 型曲線形態(tài)。通過以上方法，可有效提升 S 型標(biāo)曲的成功率，保障熱原定量的準(zhǔn)確性。

熱原是指微量即可引發(fā)恒溫動物體溫異常升高的物質(zhì)，分為內(nèi)源性（如細(xì)胞因子）與外源性兩類，外源性熱原又涵蓋微生物來源（革蘭氏陰性菌脂多糖 LPS、革蘭氏陽性菌脂磷壁酸 LTA、病毒、真菌等）與非微生物來源（灰塵、橡膠降解產(chǎn)物等）。傳統(tǒng)細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法（BET）只能檢測革蘭氏陰性菌的 LPS，無法覆蓋非內(nèi)毒素?zé)嵩鴨魏思?xì)胞活化試驗(yàn)（MAT）可彌補(bǔ)這一缺陷。其原理是：熱原通過活化單核細(xì)胞表面的 Toll 樣受體（TLR，如 TLR4 識別 LPS、TLR2/TLR6 識別 LTA），啟動先天免疫反應(yīng)，促使細(xì)胞釋放 IL-6、TNF-α 等促炎細(xì)胞因子；隨后采用 ELISA 法檢測 IL-6 濃度，結(jié)合 LPS 標(biāo)準(zhǔn)曲線推算樣品中總熱原含量，實(shí)現(xiàn)對內(nèi)毒素與非內(nèi)毒素?zé)嵩耐綑z測，契合《中國藥典》9301 指導(dǎo)原則中 全場景防控?zé)嵩L(fēng)險”的要求。

湖州申科生物熱原檢測（MAT法） 試劑盒在靈敏度、穩(wěn)定性與適用性上表現(xiàn)突出，關(guān)鍵性能參數(shù)符合藥典要求：標(biāo)曲線性范圍 0.0125-1.0EU/mL，相關(guān)系數(shù) R2≥0.98，定量限 0.025EU/mL，檢測限（LOD）0.0125EU/mL，批間精密度 CV≤25%，可準(zhǔn)確捕捉微量熱原。其優(yōu)勢在于特定的單核細(xì)胞系 —— 與依賴供體血液的 PBMC 細(xì)胞不同，申科 MAT 細(xì)胞系來源清晰可溯源，無需倫理審批與血站合作，規(guī)避供體差異導(dǎo)致的檢測波動。對比同類型產(chǎn)品（如國外廠家 PBMC 細(xì)胞），申科細(xì)胞系的標(biāo)曲各濃度點(diǎn) CV 更低（ 低至3.6%）、相對偏差更小（ 12.31%），線性 R2 達(dá) 1.000，穩(wěn)定性更優(yōu)。此外，細(xì)胞凍存液組分經(jīng)優(yōu)化，復(fù)蘇后活率高，無需額外調(diào)整細(xì)胞狀態(tài)即可直接與供試品共孵育，操作便捷；且適配任何具備 450nm 波長的酶標(biāo)儀，無需專門的設(shè)備，降低實(shí)驗(yàn)室投入成本。