福建熱原檢測操作步驟

來源： 發(fā)布時間：2025-11-27

相較于傳統(tǒng)家兔法，熱原檢測MAT法在動物福利、檢測性能、適用范圍等方面具有明顯優(yōu)勢。從動物福利看，MAT法使用分離培養(yǎng)的單核細胞系（如湖州申科 HL-60 細胞系），無需動物，完全符合 “減少、替代、優(yōu)化” 的 3R 原則，規(guī)避家兔法的倫理爭議與飼養(yǎng)成本。檢測性能上，家兔法只能定性且靈敏度低（檢測限≥5EU/kg），結果受動物個體差異、環(huán)境溫度影響大；MAT 法可定量檢測，標曲線性范圍 0.0125-1.0EU/mL，檢測限（LOD）達 0.0125EU/mL，批間 CV≤25%，重復性更優(yōu)。適用范圍方面，家兔法不適用于放射性質藥物、基因療法制劑等可能影響動物體溫的產(chǎn)品；MAT法適配疫苗、血制品、抗體藥、化藥等幾乎所有類型樣品，且支持高通量檢測，單塊 96 孔板可同時分析多個樣品，檢測時間從家兔法的3-7天縮短至1.5天，大幅提升效率。
當熱原侵入人體循環(huán)系統(tǒng)，單核細胞表面的TLR即刻化身分子雷達，準確捕獲LPS、LTA等外源致熱物。福建熱原檢測操作步驟

福建熱原檢測操作步驟,熱原檢測

家兔熱原試驗作為熱原檢測領域的 “法定傳統(tǒng)方法”，被中國藥典（ChP）、美國藥典（USP）、歐洲藥典（EP）均列為法定檢測項目，其主要優(yōu)勢在于可通過家兔體溫應答篩查所有類型熱原，尤其適用于無法排除非內毒素熱原污染的高風險產(chǎn)品，如血液制品、放射性質藥物及部分生物制劑。然而，家兔熱原試驗存在明顯局限：動物個體差異大，需額外投入時間與成本篩選合格家兔；檢測周期長（至少 6 小時），無法滿足生物制品快速放行需求；靈敏度較低（對 LPS 檢測限≥5EU/kg），與全球倡導的“動物福利3R原則”背道而馳。
山西疫苗熱原檢測湖州申科熱原檢測試劑盒中單核細胞系表面有多種Toll樣受體，可響應革蘭氏陽性菌、病毒等熱原。

福建熱原檢測操作步驟,熱原檢測

湖州申科生物熱原檢測（MAT法） 試劑盒在靈敏度、穩(wěn)定性與適用性上表現(xiàn)突出，關鍵性能參數(shù)符合藥典要求：標曲線性范圍 0.0125-1.0EU/mL，相關系數(shù) R2≥0.98，定量限 0.025EU/mL，檢測限（LOD）0.0125EU/mL，批間精密度 CV≤25%，可準確捕捉微量熱原。其優(yōu)勢在于特定的單核細胞系 —— 與依賴供體血液的 PBMC 細胞不同，申科 MAT 細胞系來源清晰可溯源，無需倫理審批與血站合作，規(guī)避供體差異導致的檢測波動。對比同類型產(chǎn)品（如國外廠家 PBMC 細胞），申科細胞系的標曲各濃度點 CV 更低（ 低至3.6%）、相對偏差更小（ 12.31%），線性 R2 達 1.000，穩(wěn)定性更優(yōu)。此外，細胞凍存液組分經(jīng)優(yōu)化，復蘇后活率高，無需額外調整細胞狀態(tài)即可直接與供試品共孵育，操作便捷；且適配任何具備 450nm 波長的酶標儀，無需專門的設備，降低實驗室投入成本。

PyroSHENTEK®熱原檢測試劑盒依據(jù) ICH Q2 (R2)、《中國藥典》（如通則 9301）及歐洲藥典（EP 2.6.30）要求，完成了線性、范圍、定量限、準確度、精密度、耐用性等全維度性能驗證。線性方面，0.0125-1.0EU/mL范圍內擬合良好，R2≥0.98；準確度通過加標回收實驗驗證，不同樣品基質（如生物制品、化學制藥原料）的回收率均落在 50%-200% 區(qū)間；精密度表現(xiàn)優(yōu)異，批內與批間 CV 均≤15%，且無論是 3 復孔還是 4 復孔檢測均能達標。此外，試劑盒使用中國藥典推薦的 MAT 特定標準品，可直接用于國內外申報，契合全球 “3R 原則” 監(jiān)管導向—尤其適配《歐洲藥典》刪除家兔法、《美國藥典》鼓勵 MAT 替代等新法規(guī)趨勢，為企業(yè)應對不同地區(qū)的熱原檢測合規(guī)要求提供有力支持。
憑借深厚的專業(yè)積累，湖州申科生物為行業(yè)提供可靠的熱原檢測解決方案。

福建熱原檢測操作步驟,熱原檢測

單核細胞活化反應測定（MAT）是近年來熱原檢測領域的突破性技術，其原理基于人體免疫系統(tǒng)對熱原的天然應答機制：人源單核細胞（如 THP-1 細胞系或新鮮人全血單核細胞）在熱原刺激下，會活化胞內炎癥信號通路，釋放 IL-6、TNF-α 等促炎細胞因子，通過 ELISA 檢測細胞因子的濃度，即可間接反映樣品中熱原的總量與活性。與傳統(tǒng)檢測方法相比，MAT 法具備三大不可替代的優(yōu)勢：一是廣譜性，可同時檢測細菌內毒素、病毒、真菌毒素、支原體等所有類型熱原，填補了鱟試驗法只能檢測內毒素的 “非內毒素熱原盲區(qū)”，尤其適用于疫苗、基因治療產(chǎn)品等易受多種熱原污染的高風險產(chǎn)品；二是人源相關性，采用與人體同源的細胞模型，檢測結果更貼近臨床實際熱原反應，避免家兔試驗中動物種屬差異導致的誤判；三是高靈敏度，對細菌內毒素的檢測限可達 0.0125EU/mL，對非內毒素熱原（如酵母多糖、腺病毒）的檢測限低至 ng/pg 級，滿足低限值產(chǎn)品的質控需求。
家兔法熱原試驗雖能篩查所有類別熱原，卻因周期長、成本高、靈敏度低而逐步被體外方法取代。山西疫苗熱原檢測

PBMC（外周血單個核細胞）用于 MAT 檢測時供體差異大，IL-6 釋放波動明顯，標準化難度高于單核細胞系。福建熱原檢測操作步驟

PyroSHENTEK®熱原檢測試劑盒（MAT法）已完成 25 個品種樣品的檢測驗證，覆蓋單抗類、疫苗類、基因工程類、血液制品類、生化藥品類與注射液，結果顯示其適配性范圍廣但需關注部分樣品的干擾。疫苗類（如麻腮風聯(lián)合減毒活疫苗、人用狂犬病疫苗）、基因工程類（重組人促紅素、干擾素 α-2b）、血液制品類（人血白蛋白、凝血因子 Ⅷ）與注射液（生理鹽水、琥珀酰明膠）的加標回收率均在 50%-200% 范圍內，無明顯干擾，檢測結果可靠。單抗類（如貝伐珠單抗、阿達木單抗）、中藥注射液等樣品雖存在不同程度的抑制作用，需通過提高稀釋倍數(shù)（如稀釋至 MVD 上限）、超聲處理或添加中和劑消除抑制，優(yōu)化后回收率均可達標。此外，MAT 法可有效檢測非內毒素熱原，如對貝伐珠單抗注射液中添加的酵母多糖（Zymosan，200μg/mL）、脂磷壁酸（LTA，10μg/mL），回收率分別達 113%、66.8%，證明其可解決傳統(tǒng)鱟試劑漏檢非內毒素熱原的問題，尤其適用于高風險生物制品的熱原防控。
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