四川qPCR法宿主細(xì)胞殘留DNA檢測(cè)方案

來(lái)源： 發(fā)布時(shí)間：2025-12-01

SHENTEK® CHO 殘留 DNA 檢測(cè)試劑盒，可對(duì)各類生物制品及藥品的中間品、半成品與成品中殘留的 CHO 宿主細(xì)胞 DNA 進(jìn)行定量檢測(cè)。該試劑盒基于熒光探針原理實(shí)現(xiàn)對(duì)樣品中 CHO 殘留 DNA 的定量，不僅檢測(cè)高效快速、專一性突出、性能穩(wěn)定可靠，檢測(cè)限還能達(dá)到 fg 級(jí)別。試劑盒配套提供 CHO DNA 定量參考品，且該參考品已通過(guò)嚴(yán)格溯源至國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品，能有效保障檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性與可追溯性。該試劑盒與 SHENTEK® 宿主細(xì)胞殘留 DNA 樣本前處理試劑盒搭配使用，能夠準(zhǔn)確定量樣品中殘留的微量 CHO 細(xì)胞 DNA。
湖州申科生物系列宿主細(xì)胞殘留 DNA 檢測(cè)試劑盒，已在國(guó)內(nèi)外藥品注冊(cè)申報(bào)中成功應(yīng)用。四川qPCR法宿主細(xì)胞殘留DNA檢測(cè)方案

四川qPCR法宿主細(xì)胞殘留DNA檢測(cè)方案,宿主細(xì)胞殘留DNA檢測(cè)

宿主細(xì)胞殘留 DNA 檢測(cè)過(guò)程中存在多種常見(jiàn)問(wèn)題。首先，擴(kuò)增異常主要體現(xiàn)為擴(kuò)增曲線異常、擴(kuò)增效率不達(dá)標(biāo)，且檢測(cè)數(shù)值同樣存在異常；第二，回收異常指 DNA 回收環(huán)節(jié)出現(xiàn)問(wèn)題，具體表現(xiàn)為回收率過(guò)高或過(guò)低；第三，污染問(wèn)題主要表現(xiàn)為無(wú)模板對(duì)照（NTC）、陰性對(duì)照（NCS）出現(xiàn)檢測(cè)數(shù)值，對(duì)檢測(cè)結(jié)果產(chǎn)生干擾；第四，設(shè)備使用異常源于前處理設(shè)備、PCR 設(shè)備的操作不當(dāng)，進(jìn)而導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果異常。這些問(wèn)題覆蓋擴(kuò)增、回收、污染及設(shè)備操作等多個(gè)環(huán)節(jié)，均會(huì)影響檢測(cè)準(zhǔn)確性，需在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中針對(duì)性排查并解決，以保障宿主細(xì)胞殘留 DNA 檢測(cè)結(jié)果的可靠性。
福建生物制品宿主細(xì)胞殘留DNA檢測(cè)常見(jiàn)問(wèn)題國(guó)內(nèi)外監(jiān)管趨嚴(yán)下，宿主細(xì)胞殘留 DNA 這一生物制品關(guān)鍵質(zhì)量屬性，將持續(xù)受關(guān)注與嚴(yán)管。

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SHENTEK® CV-1 殘留 DNA 定量檢測(cè)試劑盒基于實(shí)時(shí)熒光探針 PCR 技術(shù)，可針對(duì)生物制藥工藝流程中的中間品、半成品及成品，實(shí)現(xiàn) CV-1 宿主細(xì)胞 DNA 的準(zhǔn)確、快速定量分析。該試劑盒通過(guò)高特異性的引物-探針體系，能夠在復(fù)雜基質(zhì)中識(shí)別 CV-1 DNA，檢測(cè)下限可達(dá) fg 級(jí)，線性范圍寬，結(jié)果重現(xiàn)性優(yōu)異。試劑盒內(nèi)附帶經(jīng)溯源校準(zhǔn)的 CV-1 DNA 定量參考品，可直接建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，簡(jiǎn)化實(shí)驗(yàn)流程。同時(shí)，本品與 SHENTEK® 宿主細(xì)胞殘留 DNA 樣本前處理試劑盒配套使用，通過(guò)對(duì)裂解、吸附、洗滌及洗脫步驟的系統(tǒng)優(yōu)化，明顯提高了微量 CV-1 DNA 的回收效率，降低基質(zhì)干擾，確保定量結(jié)果的高準(zhǔn)確度與高靈敏度。整體方案操作便捷，為生物制品的安全性評(píng)價(jià)提供可靠支撐。

湖州申科生物 rHCDpurify® 前處理系統(tǒng)，是宿主細(xì)胞殘留 DNA 檢測(cè)樣本前處理的實(shí)用工具，擁有多項(xiàng)優(yōu)勢(shì)。在操作便捷性上，其支持自動(dòng)掃碼功能，輸入過(guò)程準(zhǔn)確且簡(jiǎn)便高效，同時(shí)配備超大屏幕，便于操作人員使用；溫控表現(xiàn)突出，具備準(zhǔn)確控溫能力，有助于提升裂解與洗脫效率，降低因溫控不當(dāng)引發(fā)的系統(tǒng)誤差，為后續(xù)檢測(cè)打下良好基礎(chǔ)。從提取性能來(lái)看，該系統(tǒng)符合系統(tǒng)性能驗(yàn)證及挑戰(zhàn)性實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)，能可靠完成樣本前處理工作，保障檢測(cè)的準(zhǔn)確性與可靠性；試劑配套方面，它與 SHENTEK® 各類前處理試劑盒適配，可有效規(guī)避手動(dòng)操作帶來(lái)的誤差，保障實(shí)驗(yàn)結(jié)果的穩(wěn)定性。此外，該系統(tǒng)擁有多種程序模式，可實(shí)現(xiàn)磁珠法試劑盒與樣本前處理的自動(dòng)化提取操作，不僅提升了工作效率，還減少了人工干預(yù)可能引發(fā)的誤差，為宿主細(xì)胞殘留 DNA 檢測(cè)樣本前處理提供了穩(wěn)定、高效、準(zhǔn)確的解決方案。
宿主細(xì)胞殘留 DNA 或給生物制品帶來(lái)污染風(fēng)險(xiǎn)，進(jìn)而對(duì)產(chǎn)品使用者構(gòu)成潛在安全隱患。

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宿主細(xì)胞殘留DNA檢測(cè)體系（qPCR法）的技術(shù)關(guān)鍵點(diǎn)涉及多個(gè)維度。1、靶標(biāo)序列的查找與確定：需參照宿主物種的基因組序列，篩選出物種特異性強(qiáng)、高度重復(fù)且呈散在分布的序列，將其作為檢測(cè)靶標(biāo)。2、檢測(cè)體系建立與方法驗(yàn)證：在適宜位點(diǎn)設(shè)計(jì)引物與探針，選擇適配的熒光及淬滅基團(tuán)。3、基于qPCR法優(yōu)化體系組分比例，制備用于微量DNA模板檢測(cè)的MIX，同時(shí)對(duì)線性范圍、專屬性等多項(xiàng)指標(biāo)開(kāi)展驗(yàn)證。4、檢測(cè)體系穩(wěn)定性保障：需完成參考品的準(zhǔn)確標(biāo)定，同時(shí)嚴(yán)格控制試劑批間差異，確保檢測(cè)體系的穩(wěn)定性。5、適配的殘留DNA提取體系：需搭配合適的宿主細(xì)胞殘留DNA提取體系，以應(yīng)對(duì)不同樣品基質(zhì)的影響，實(shí)現(xiàn)微量殘留DNA的回收提取與純化。
凍融 5 次的情況下，SHENTEK?系列宿主細(xì)胞殘留 DNA 檢測(cè)試劑盒性能不受影響。疫苗宿主細(xì)胞殘留DNA檢測(cè)法規(guī)要求

檢測(cè)宿主細(xì)胞殘留DNA時(shí)，需結(jié)合前處理、試劑和儀器協(xié)同保障準(zhǔn)確。四川qPCR法宿主細(xì)胞殘留DNA檢測(cè)方案

宿主細(xì)胞殘留DNA的潛在風(fēng)險(xiǎn)中，免疫原性是重要一項(xiàng)。特定濃度下，各類DNA均有可能引發(fā)免疫反應(yīng)，而原核生物的基因組DNA因富含CpG基序與非甲基化序列，免疫原性更強(qiáng)。其中，CpG可作為免疫刺激信號(hào)，直接與免疫細(xì)胞（如B細(xì)胞、巨噬細(xì)胞及樹(shù)突狀細(xì)胞，簡(jiǎn)稱DCs細(xì)胞）表面的模式識(shí)別受體結(jié)合，觸發(fā)細(xì)胞內(nèi)信號(hào)通路，推動(dòng)這些細(xì)胞大量分泌炎癥性細(xì)胞因子（如腫瘤壞死因子-α、白細(xì)胞介素-6等）。若重組蛋白藥物中存在這類殘留DNA，會(huì)持續(xù)觸發(fā)機(jī)體免疫系統(tǒng)，明顯提升藥物在體內(nèi)引發(fā)免疫原性的風(fēng)險(xiǎn)，可能造成藥物療效下降、引發(fā)過(guò)敏反應(yīng)等不良情況，進(jìn)而影響藥物的安全性與有效性。故而在生物制藥生產(chǎn)過(guò)程中，嚴(yán)格把控宿主細(xì)胞殘留DNA的水平極為關(guān)鍵。
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