北京生物制品內(nèi)毒素檢測法規(guī)要求

來源： 發(fā)布時間：2025-09-29

低內(nèi)毒素回收（LER）與傳統(tǒng)鱟試劑干擾（抑制 / 增強）在多維度存在差異，準確區(qū)分對優(yōu)化內(nèi)毒素檢測至關(guān)重要。表現(xiàn)上，LER 是內(nèi)毒素回收率＜50%，傳統(tǒng)干擾是反應(yīng)抑制或增強；成因上，LER 由螯合劑 + 表面活性劑協(xié)同或蛋白質(zhì)電荷結(jié)合引發(fā)，傳統(tǒng)干擾因 pH、β- 葡聚糖等導致；排除方式上，LER 時間依賴且無法稀釋解決，傳統(tǒng)干擾濃度依賴且可通過稀釋緩解；確認方法上，LER 需通過保存時間研究（HTS），傳統(tǒng)干擾按藥典干擾實驗評估。明確這些區(qū)別能幫助企業(yè)排查內(nèi)毒素檢測異常，避免誤將 LER 當作普通干擾處理。
開展細菌內(nèi)毒素檢測的操作過程，需防止樣品受到外源性污染。北京生物制品內(nèi)毒素檢測法規(guī)要求

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當實驗室更換內(nèi)毒素檢測方法或更換試劑供應(yīng)商時，需進行方法比對與橋接驗證。比對實驗需選取至少 3批代表性樣品，分別用新舊方法檢測，計算結(jié)果相關(guān)性（如相關(guān)系數(shù) R2≥0.95）和偏差（≤20%）。橋接驗證還需評估新方法的特異性、靈敏度是否與舊方法一致，如確認對高風險樣品（如含 β- 葡聚糖的樣品）的抗干擾能力相當。若方法變更涉及法規(guī)申報產(chǎn)品，需將驗證數(shù)據(jù)納入申報資料，證明變更后方法仍能有效控制內(nèi)毒素風險，符合 FDA、NMPA 等監(jiān)管機構(gòu)對方法變更的合規(guī)性要求。
江蘇疫苗內(nèi)毒素檢測LER現(xiàn)象內(nèi)毒素工作標準品（CSE）稀釋液配制時渦旋很重要，可使內(nèi)毒素充分溶解，保證濃度準確。

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內(nèi)毒素檢測方法驗證需覆蓋多項參數(shù)，確保方法可靠：線性范圍需包含樣品預期濃度（如 0.01-10 EU/mL），相關(guān)系數(shù) R2≥0.98；準確度通過加標回收率評估，應(yīng)在 50%-200% 范圍內(nèi)；精密度包括批內(nèi)和批間精密度，CV 值均應(yīng)≤15%；檢測限（LOD）需低于產(chǎn)品限值的 1/2（如限值 0.5 EU/mL，LOD 應(yīng)≤0.25 EU/mL）；專屬性需證明無干擾物質(zhì)影響（如 β- 葡聚糖、蛋白質(zhì)不引發(fā)假陽性）。驗證通過后，方法需經(jīng)實驗室負責人批準方可使用，且定期需進行一次回顧性驗證，確認方法持續(xù)有效。

2024年7月26日，《美國藥典》微生物委員會正式宣布，將第<86>章“使用重組試劑的細菌內(nèi)毒素測試”納入（USP-NF），該標準定于2025年5月正式生效。這一重要舉措不僅標志著細菌內(nèi)毒素檢測領(lǐng)域從此正式邁入非動物源試劑的嶄新發(fā)展階段，更契合了全球生命科學領(lǐng)域遵循的3R原則（即通過非動物源技術(shù)替代動物實驗、減少實驗動物使用量、優(yōu)化實驗流程以降低動物痛苦）。此前傳統(tǒng)細菌內(nèi)毒素檢測多依賴從鱟血中提取的試劑，而鱟作為海洋瀕?！盎罨保滟Y源保護與檢測需求間的矛盾長期存在；如今重組級聯(lián)試劑（rCR）憑借技術(shù)創(chuàng)新成功替代傳統(tǒng)鱟血，在有效守護藍血鱟的生態(tài)未來、緩解資源依賴困境的同時，也為藥品生產(chǎn)中的內(nèi)毒素質(zhì)量控制和用藥安全保障，提供了更先進、更穩(wěn)定且具備長期可持續(xù)性的解決方案。
內(nèi)毒素檢測凝膠法實驗需西林瓶等耗材，確保無外源內(nèi)毒素污染檢測。

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檢測細菌內(nèi)毒素的堂試劑方法，是一個生物反應(yīng)過程，受到很多因素的干擾。在一個供試品的檢測方法固定下來之前，為了得到準確的結(jié)果，必須要了解供試品與鱟試劑之間的相互關(guān)系。供試品中的成分往往非常復雜，而且會干擾試驗檢測系統(tǒng)的功能。很多干擾的機理，并不是非常清楚。但是業(yè)界比較能夠接受的理論是，如果供試品中某些因子影響了鱟試劑中蛋白的表達功能，則被認為是干擾作用（Inhibition/Enhancement，V/E）。干擾作用產(chǎn)生的因素較多，一般包括試劑因素（鱟試劑、內(nèi)毒素標準品）供試品因素（pH值、溫度、離子強度、濃度、水溶性、黏度、可發(fā)生鱟試劑反應(yīng)的非內(nèi)毒素雜質(zhì)）和實驗因素（試驗器皿、細菌內(nèi)毒素檢查用水、鱟試劑抗干擾能力）等。
內(nèi)毒素檢測方法多樣，影響因素及實驗干擾較多，包括實驗操作步驟、樣品處理等方面。廣東細菌內(nèi)毒素檢測重組級聯(lián)試劑（rCR）

細菌內(nèi)毒素是革蘭氏陰性菌細胞壁脂多糖，細菌死亡裂解釋放，微量級即致人體發(fā)熱、休克等威脅。北京生物制品內(nèi)毒素檢測法規(guī)要求

樣品中的脂質(zhì)體與表面活性劑，會通過不同機制干擾內(nèi)毒素檢測，需結(jié)合基質(zhì)特性選擇處理方式。脂質(zhì)體的干擾體現(xiàn)在兩方面：一是脂質(zhì)雙分子層會包裹內(nèi)毒素，使其無法與鱟試劑接觸，導致假陰性；二是脂質(zhì)體的膠體性質(zhì)會干擾凝膠形成（凝膠法）或光度信號讀?。岫?/ 顯色法）。針對完整脂質(zhì)體制劑，可先用生理鹽水稀釋降低脂質(zhì)體濃度，減少包裹作用；若需徹底釋放內(nèi)毒素，還可使用 DMSO、乙醇或甲醇等溶劑裂解脂質(zhì)體，暴露被包裹的內(nèi)毒素。表面活性劑的干擾則源于其對物質(zhì)結(jié)構(gòu)的改變：既可能破壞內(nèi)毒素的聚集體結(jié)構(gòu)，影響其活性；又可能導致鱟試劑中蛋白質(zhì)變性，抑制反應(yīng)。對此，可通過內(nèi)毒素檢查用水或生理鹽水稀釋樣品，降低表面活性劑濃度，消除其對結(jié)構(gòu)的破壞作用。這些針對性處理能有效解決脂質(zhì)體與表面活性劑的干擾，確保內(nèi)毒素檢測結(jié)果真實可靠。
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