浙江畢赤酵母宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留檢測

來源： 發(fā)布時間：2025-11-21

大腸桿菌具有遺傳背景明確、便于培養(yǎng)與調(diào)控、蛋白表達(dá)量高、成本低廉且培養(yǎng)周期短等特點，是性價比高的蛋白表達(dá)系統(tǒng)。其中，K-12系列與B系列菌株是工業(yè)級生物工程中常用的大腸桿菌菌株。K-12菌株及其衍生的DH5α、Top10、JM109等菌株，可用于大規(guī)模生產(chǎn)質(zhì)粒DNA，進(jìn)而制備細(xì)胞基因治療產(chǎn)品與病毒載體類疫苗；而源自B系列的菌株（如BL21），更適合高效轉(zhuǎn)染表達(dá)載體及常規(guī)蛋白的表達(dá)，例如病毒蛋白、重組蛋白疫苗、細(xì)胞因子、酶類等產(chǎn)品。湖州申科生物依據(jù)這兩種菌株的特性，分別研發(fā)了大腸桿菌表達(dá)菌HCP殘留檢測試劑盒與大腸桿菌克隆菌堿裂HCP殘留檢測試劑盒。
湖州申科生物目前已承接常見宿主類型的HCP定制化開發(fā)，如期交付率達(dá)到100%。浙江畢赤酵母宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留檢測

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各國法規(guī)要求對生物藥品開展分析與純化處理，以將宿主細(xì)胞蛋白（HCP）降至可接受水平；即便終產(chǎn)品中痕量 HCP 進(jìn)入患者體內(nèi)，目前仍不明確特定殘留蛋白質(zhì)雜質(zhì)是否會對藥物的穩(wěn)定性或免疫原性產(chǎn)生影響。在 HCP 限量標(biāo)準(zhǔn)方面，美國藥典推薦終產(chǎn)品 HCP 水平為 1-100 ng/mg；中國藥典各論則明確，大腸桿菌（E.coli）菌體 HCP 需不高于蛋白質(zhì)總量的 0.10%（即 1000 ng/mg），CHO 細(xì)胞 HCP 需不高于蛋白質(zhì)總量的 0.05%（即 500 ng/mg），假單胞菌 HCP 需不高于蛋白質(zhì)總量的 0.02%（即 200 ng/mg）。
浙江重組蛋白用宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留檢測試劑盒為適配快速替換需求，湖州申科可應(yīng)客戶要求，按生產(chǎn)工藝定制宿主細(xì)胞蛋白（HCP）商業(yè)化檢測試劑盒。

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畢赤酵母（Pichia pastoris）作為第二代酵母表達(dá)系統(tǒng)的代表性菌株，已被美國 FDA 認(rèn)定為 GRAS（一般認(rèn)為安全）級微生物，具備表達(dá)水平高、產(chǎn)物活性優(yōu)、培養(yǎng)成本低、易于擴(kuò)大至工業(yè)化生產(chǎn)等優(yōu)勢。在生物制藥領(lǐng)域，酶制劑、胰島素、表皮生長因子、膠原蛋白等多款生物制劑，已借助畢赤酵母系統(tǒng)實現(xiàn)商業(yè)化生產(chǎn)。和其他產(chǎn)品雜質(zhì)類似，畢赤酵母宿主殘留蛋白（HCP）可能對生物制品的安全性與有效性造成不利影響，故而在生產(chǎn)監(jiān)測、產(chǎn)品放行等環(huán)節(jié)中，需對其開展定量研究并實施嚴(yán)格控制。SHENTEK® 畢赤酵母 HCP 殘留檢測試劑盒（一步酶聯(lián)免疫吸附法），是湖州申科生物自主研發(fā)的畢赤酵母 HCP 通用檢測試劑盒，不僅擁有完全自主知識產(chǎn)權(quán)，還實現(xiàn)了關(guān)鍵試劑的全國產(chǎn)化。該試劑盒適用于對 GS115、X33 等畢赤酵母菌株生產(chǎn)的生物制品中宿主殘留蛋白進(jìn)行定量檢測，具有操作步驟少、檢測速度快、專一性強(qiáng)、性能穩(wěn)定可靠的特點。

湖州申科運用免疫磁珠分離技術(shù)（IMBS），搭配 2D 電泳或 LC-MS 技術(shù)評估抗體覆蓋率。IMBS 的主要流程涵蓋：多克隆抗體與磁珠的偶聯(lián)反應(yīng)、磁珠未結(jié)合位點的封閉處理、HCP 樣本與結(jié)合抗體的磁珠共同孵育反應(yīng)。該過程中，HCP 抗體會結(jié)合可識別的 HCP，未被識別的 HCP 則通過后續(xù)洗滌步驟去除，隨后借助低 pH 等洗脫條件，收集抗體捕獲的 HCP。此方法具備 AAE（抗體親和提取，Antibody Affinity Extraction）免疫層析柱分離的全部優(yōu)勢，同時免疫磁珠可在懸浮狀態(tài)下與 HCP 樣品充分混勻并結(jié)合，HCP 結(jié)合效果更優(yōu)；且依托磁珠吸附，能減少 HCP 與填料的非特異性吸附，進(jìn)一步提升實驗準(zhǔn)確性。
圍繞 HCP 檢測試劑盒開發(fā)，需統(tǒng)籌法規(guī)適配、物料穩(wěn)定、團(tuán)隊專業(yè)響應(yīng)及案例積累，構(gòu)建體系化保障體系。

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湖州申科生物依據(jù)不同宿主的實際生產(chǎn)工藝，借助高質(zhì)量免疫原與HCP多抗的標(biāo)準(zhǔn)化制備流程，制備出高效價、高覆蓋率的抗體，進(jìn)而開發(fā)出SHENTEK®HCP檢測試劑盒：適配大腸桿菌表達(dá)菌（BL21）生產(chǎn)工藝及克隆菌堿裂法提取質(zhì)粒工藝，以及適配CHO、MDCK、HEK293、Sf9、VERO、畢赤酵母等不同宿主，可用于中間品、原液及終產(chǎn)品的HCP定量監(jiān)測。為保障ELISA法對HCP定量檢測的準(zhǔn)確性，需對HCP抗體覆蓋率開展驗證。湖州申科的抗體覆蓋率平臺，采用2D Clean-up試劑盒去除蛋白樣品中的干擾物（如洗滌劑、鹽、脂質(zhì)、酚類、核酸等離子污染物），同時設(shè)置2D質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)品實施嚴(yán)格質(zhì)控，并以陰性抗體作為對照開展平行試驗，以此提升結(jié)果準(zhǔn)確度。
生物制品臨床申報需提交 HCP 抗體覆蓋率數(shù)據(jù)，否則可能面臨監(jiān)管發(fā)補要求。浙江漢遜酵母宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留檢測

湖州申科HCP試劑盒開發(fā)經(jīng)抗原表征、抗體制備到體系驗證，全流程符合法規(guī)要求。浙江畢赤酵母宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留檢測

由于 HCPs 屬于復(fù)雜的多分析物，為制備覆蓋率盡可能高的抗體（以覆蓋工藝特有的高風(fēng)險 HCPs），需采用可靠的免疫策略。獲得符合性能要求的抗體后，需借助經(jīng)過驗證的 2D 或 LC-MS 方法對抗體覆蓋率進(jìn)行表征，確?？贵w可充分覆蓋各實際工藝下產(chǎn)生的 HCPs。在擁有代表性抗原與優(yōu)良性能抗體的基礎(chǔ)上，開展 ELISA 檢測體系開發(fā)，涵蓋原輔料篩選與制備研究、各組分工藝及反應(yīng)體系研究、穩(wěn)定性研究等重要內(nèi)容。檢測體系開發(fā)完成后，需依據(jù) ICH 及藥典要求開展分析方法驗證評估，確保體系的線性、范圍、檢測限、定量限、準(zhǔn)確度、精密度、專屬性及耐用性均滿足法規(guī)要求。
浙江畢赤酵母宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留檢測