醫(yī)療器械熱原檢測體系

來源： 發(fā)布時間：2025-11-26

PyroSHENTEK®熱原檢測試劑盒突破傳統(tǒng)檢測方法局限，不僅能檢測革蘭氏陰性菌來源的內(nèi)毒素，還可準確識別革蘭氏陽性菌（脂磷壁酸 LTA）、病毒、真菌等產(chǎn)生的非內(nèi)毒素熱原（NEP），契合熱原檢測 “全風險覆蓋” 的法規(guī)需求。其定量限低至 0.025EU/mL，實驗數(shù)據(jù)顯示，對 Flagellin、LTA、Resiquimod、Poly-IC 等多種 NEP 均能有效檢出，且加標回收率穩(wěn)定在 50%-200% 合格范圍（如貝伐珠單抗注射液中 LTA 加標回收率 66.8%、Zysoman 加標回收率 113%）。此外，試劑盒聯(lián)合了國內(nèi)相關機構完成室間驗證，與傳統(tǒng)家兔熱原試驗（RPT）橋接結果高度一致 —— 如人用狂犬病疫苗（Vero 細胞）中 LPS 加標回收率 152.1%、人血白蛋白中 LPS 加標回收率 71.6%，檢測數(shù)據(jù)科學性符合國際法規(guī)要求，助力企業(yè)無縫銜接中美歐等地申報標準。
在藥品安全語境中，熱原特指細菌性熱原—微生物代謝產(chǎn)物、細菌尸體及內(nèi)毒素的統(tǒng)稱。醫(yī)療器械熱原檢測體系

醫(yī)療器械熱原檢測體系,熱原檢測

一次合格的 MAT 法熱原檢測，需同時滿足 “合格標曲” 與 “合格樣品檢測值及回收率” 兩大關鍵條件。合格標曲需具備四要素：一是良好線性，采用 4-Parameter Logistic 擬合，R2 需接近 1.0，避免線性不佳導致定量偏差；二是良好信號值，各濃度點 OD 值需呈梯度變化，高濃度點 OD 值需足夠（如上限濃度 OD600 達 1.0 左右），信號過低會影響靈敏度；三是良好 CV，復孔間 CV 需控制在合理范圍（定量限內(nèi)≤25%、定量上下限≤30%），確保重復性；四是良好背景值，陰性對照 OD 值需低于標曲下限濃度點 10%，排除外源污染。合格樣品檢測值則需滿足加標回收率在 50%-200%，例如文檔中某樣品 10 倍稀釋回收率 41.3%（不合格），20 倍 71.3%（接近合格），40 倍 97.7%（合格），需在 MVD 范圍內(nèi)調(diào)整稀釋倍數(shù)，同時樣品熱原濃度需低于規(guī)定限值（CLC），方可判定樣品符合要求。
廣東熱原檢測商業(yè)化試劑盒憑借深厚的專業(yè)積累，湖州申科生物為行業(yè)提供可靠的熱原檢測解決方案。

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PyroSHENTEK®熱原檢測試劑盒（MAT法）已完成 25 個品種樣品的檢測驗證，覆蓋單抗類、疫苗類、基因工程類、血液制品類、生化藥品類與注射液，結果顯示其適配性范圍廣但需關注部分樣品的干擾。疫苗類（如麻腮風聯(lián)合減毒活疫苗、人用狂犬病疫苗）、基因工程類（重組人促紅素、干擾素 α-2b）、血液制品類（人血白蛋白、凝血因子 Ⅷ）與注射液（生理鹽水、琥珀酰明膠）的加標回收率均在 50%-200% 范圍內(nèi)，無明顯干擾，檢測結果可靠。單抗類（如貝伐珠單抗、阿達木單抗）、中藥注射液等樣品雖存在不同程度的抑制作用，需通過提高稀釋倍數(shù)（如稀釋至 MVD 上限）、超聲處理或添加中和劑消除抑制，優(yōu)化后回收率均可達標。此外，MAT 法可有效檢測非內(nèi)毒素熱原，如對貝伐珠單抗注射液中添加的酵母多糖（Zymosan，200μg/mL）、脂磷壁酸（LTA，10μg/mL），回收率分別達 113%、66.8%，證明其可解決傳統(tǒng)鱟試劑漏檢非內(nèi)毒素熱原的問題，尤其適用于高風險生物制品的熱原防控。

MAT 法與傳統(tǒng)家兔法在熱原檢測中，性能差異明顯，MAT 法在準確性、效率與合規(guī)性上更具優(yōu)勢。從結果評判來看，MAT 法以 “加標回收率 50%-200%、供試品濃度 < 規(guī)定限值（CLC）” 為合格標準，靈敏度達 0.0125EU/mL，可準確定量熱原濃度；而家兔法只能定性（觀察體溫升高），靈敏度低（約 0.1-0.5EU/mL），易因家兔個體差異（如免疫狀態(tài)、應激反應）導致假陰性。從檢測效率來看，MAT 法樣品與細胞共培養(yǎng) 24 小時即可出結果，且可批量檢測（96 孔板一次處理多個樣品）；家兔法需連續(xù)觀察 72 小時，每次只能檢測少量樣品，耗時且人力成本高。從合規(guī)性來看，MAT 法不使用動物，符合 3R 原則，已被歐盟接受（EP 刪除家兔法）；家兔法因動物實驗屬性，面臨歐盟等地區(qū)的法規(guī)限制。此外，MAT 法重復性優(yōu)（復孔 CV 可控制在 30% 以內(nèi)），家兔法因個體差異 CV 常超 50%，進一步凸顯 MAT 法在現(xiàn)代熱原檢測中的優(yōu)勢。
湖州申科熱原檢測試劑盒（MAT）的單核細胞系無供體依賴性，解決PBMC因免疫狀態(tài)差異的結果波動。

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家兔熱原試驗作為熱原檢測領域的 “法定傳統(tǒng)方法”，被中國藥典（ChP）、美國藥典（USP）、歐洲藥典（EP）均列為法定檢測項目，其主要優(yōu)勢在于可通過家兔體溫應答篩查所有類型熱原，尤其適用于無法排除非內(nèi)毒素熱原污染的高風險產(chǎn)品，如血液制品、放射性質(zhì)藥物及部分生物制劑。然而，家兔熱原試驗存在明顯局限：動物個體差異大，需額外投入時間與成本篩選合格家兔；檢測周期長（至少 6 小時），無法滿足生物制品快速放行需求；靈敏度較低（對 LPS 檢測限≥5EU/kg），與全球倡導的“動物福利3R原則”背道而馳。
MAT 法干擾試驗需設 3 個樣品濃度梯度（A、2A、4A 倍），均不超過MVD且加標回收合格。上海重組蛋白熱原檢測MAT試劑盒

湖州申科 MAT法熱原檢測試劑盒細胞復融后可直接使用，無需離心復蘇，24 小時內(nèi)出檢測結果。醫(yī)療器械熱原檢測體系

MAT 試劑盒熱原檢測配套細胞的質(zhì)量控制，是保障檢測結果可靠的重要環(huán)節(jié)，需從功能、安全性、穩(wěn)定性三方面建立體系。在功能鑒定上，按歐洲 MAT 法要求，需檢測細胞的 Toll 樣受體（TLR1-TLR9）表達情況—確保細胞能響應不同類型熱原（如 TLR4 響應 LPS、TLR2/6 響應脂磷壁酸）；同時考察細胞倍增時間（確保活性穩(wěn)定）、熱原反應性（對標準內(nèi)毒素和非內(nèi)毒素熱原的信號強度），確保細胞具備熱原識別與炎癥因子分泌能力。在安全性檢測上，需驗證細胞無菌（無細菌、真菌污染）、無支原體、無外源病毒因子（如 HIV、HBV）及分枝桿菌，避免外源污染影響檢測結果。在穩(wěn)定性考察上，需監(jiān)測不同代次細胞的熱原刺激敏感性，一般要求細胞使用代次不超過 20 代，代次過高會導致 TLR 表達下降、炎癥因子分泌減少，影響檢測靈敏度。湖州申科的配套細胞還額外通過 Western blot 驗證 TLR 受體表達量，并用不同非內(nèi)毒素熱原配體刺激驗證響應性，形成全維度質(zhì)量控制，確保細胞適配熱原檢測需求。
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