廣東免疫細胞產(chǎn)品支原體檢測NAT法

來源： 發(fā)布時間：2025-12-02

對照菌株的合理配置是支原體培養(yǎng)法檢測準確性的重要保障，湖州申科嚴格遵循 USP 標準制定菌株使用規(guī)范。每次檢測需至少包含兩株已知支原體菌株：一株為葡萄糖發(fā)酵型（如肺炎支原體或其等效種株），另一株為精氨酸水解型（如口腔支原體），通過兩類菌株的平行對照，覆蓋常見支原體檢測場景。特殊場景下需額外補充菌株：檢測昆蟲細胞系時，需納入螺原體（如 S.citri ATCC 29747、S.melliferum ATCC 29416 或等效菌種菌株），這類菌株營養(yǎng)需求更苛刻，且需匹配昆蟲細胞系對應的較低孵化溫度，確保特殊樣品檢測的針對性與有效性，避免因菌株配置不全導致漏檢風險。
支原體標準菌株對支原體檢測試劑盒的選擇、使用及驗證至關(guān)重要。廣東免疫細胞產(chǎn)品支原體檢測NAT法

廣東免疫細胞產(chǎn)品支原體檢測NAT法,支原體檢測

湖州申科外源因子全自動核酸檢測分析系統(tǒng)打造了 “樣本進、結(jié)果出” 的高效檢測流程，徹底簡化支原體檢測操作。檢測只需一步式加樣，最大支持 1mL 樣本直接上樣，無需復雜前處理，加樣后系統(tǒng)自動完成核酸提取與檢測，全程 3 小時內(nèi)即可獲取結(jié)果，其中樣本準備時間不足 5 分鐘，檢測流程只需 2.5 小時。相比傳統(tǒng)方法水浴消化、磁珠分離、洗脫等繁瑣步驟，該系統(tǒng)操作極大簡化，且配備 UI 觸屏控制系統(tǒng)，內(nèi)置標準化程序，支持掃碼啟動檢測，無需專業(yè) qPCR 操作培訓，普通人員經(jīng)簡單指導即可上手。系統(tǒng)采用 4 通道單獨運行設計，可同步開展不同樣本檢測，儀器還支持疊加延展通道，進一步提升檢測產(chǎn)能，適配生物藥多批次檢測需求。
湖南復雜基質(zhì)支原體檢測技術(shù)服務湖州申科支原體驗證菌株溯源至 ATCC/CVCC，標定 10CFU/100CFU，滿足驗證需求。

廣東免疫細胞產(chǎn)品支原體檢測NAT法,支原體檢測

湖州申科支原體檢測解決方案優(yōu)勢突出，一是產(chǎn)品驗證專業(yè)：嚴格確認菌株 GC 比，可溯源至 ATCC/CVCC，專屬性驗證涵蓋多種梭菌、乳桿菌、鏈球菌，完全符合 EP 要求，而部分競品未明確菌株驗證標準或缺乏近緣菌交叉污染測試；二是菌株資源豐富：提供可溯源、可商用的驗證菌株，嚴格控制 GC 比，聯(lián)合合規(guī)機構(gòu)共同標定；三是一站式解決方案：涵蓋 “產(chǎn)品 + 菌株 + 技術(shù)服務” 全鏈條，擁有上市藥物方法變更驗證服務案例，可提供全申報周期支持；四是申報案例豐富：積累了 BLA、IND 階段的多個成功案例，支持客戶完成國產(chǎn)替代與方法變更，競品申報案例相對有限，且部分企業(yè)規(guī)模較小，難以接受供應商審計，服務穩(wěn)定性不足。

目前支原體檢測主要有培養(yǎng)法、指示細胞培養(yǎng)法和核酸擴增技術(shù)（NAT）法三類，三者在性能與適用場景上差異明顯。培養(yǎng)法作為檢測金標準，靈敏度極高，但檢測周期長達 28 天，手動操作需數(shù)天，依賴較高水平的操作技能，且因使用活菌株作為陽性質(zhì)控，污染風險高，需在特殊實驗室開展，檢測前還需進行培養(yǎng)基靈敏度驗證。指示細胞培養(yǎng)法為藥典認可的傳統(tǒng)方法，成本較低，但檢測周期仍需 14-20 天，靈敏度偏低，同樣存在活菌株污染風險，無法滿足快速放行需求。NAT 法（核酸擴增法）檢測周期只需 3-7 小時，手動操作時間為數(shù)小時，采用滅活菌株降低污染風險，樣本需求量少、靈敏度高，但無法區(qū)分死菌與活菌，且需要開展充分驗證，對操作人員的專業(yè)技能有一定要求，已逐步成為生物制藥企業(yè)產(chǎn)品放行檢測的youxia方案。
支原體檢測試劑盒批間穩(wěn)定性至關(guān)重要，需通過多批次驗證確保質(zhì)量均一。

廣東免疫細胞產(chǎn)品支原體檢測NAT法,支原體檢測

質(zhì)控結(jié)果是支原體 NAT 檢測可靠性的前提，需嚴格遵循判定標準，且需結(jié)合實驗室實際條件驗證適配的標準閾值。質(zhì)控樣品的判定規(guī)則明確：NTC（無模板對照）的 FAM 信號需 2 復孔 Ct≥40 或無明顯擴增曲線，VIC 信號需 2 復孔 Ct<35 且呈有效 “S” 型擴增；NCS（陰性對照）判定標準與 NTC 一致；PC（陽性質(zhì)控）的 FAM 信號需 2 復孔 Ct<35 且呈有效 “S” 型擴增，PCS（陽性對照底物）判定標準與 PC 一致。只有質(zhì)控結(jié)果全部滿足要求，才能進一步分析樣本結(jié)果，若質(zhì)控不達標，需排查設備、試劑、操作等環(huán)節(jié)的問題并重新檢測。
培養(yǎng)基、血清等原輔料入庫前需做支原體檢測，排除外源污染風險。廣東免疫細胞產(chǎn)品支原體檢測NAT法

支原體污染會改變細胞生理特性，導致生長緩慢、基因表達異常，需嚴格防控。廣東免疫細胞產(chǎn)品支原體檢測NAT法

陰性翹尾是支原體 NAT 檢測中常見的異?，F(xiàn)象，表現(xiàn)為 NCS 或 NTC 出現(xiàn)擴增信號，Ct 值多在 35~40 之間，需科學評估并處理。首先考慮污染因素，可能是陰性對照被陽性樣本、試劑或環(huán)境氣溶膠污染，建議立即復測，復測時使用帶濾芯低吸附 TIP 頭，嚴格執(zhí)行陰陽性分區(qū)操作，注重細節(jié)防控。其次需排除背景信號等非典型性擴增的干擾，避免誤判為污染。若前期驗證中頻繁出現(xiàn) NTC 或 NCS 擴增，且已徹底排除污染可能性，可結(jié)合已有實驗數(shù)據(jù)重新設置 Cut off 值，確保閾值線能有效區(qū)分真實陽性與背景信號，滿足實驗室檢測需求。
廣東免疫細胞產(chǎn)品支原體檢測NAT法