CHO-K1宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留檢測試劑盒

在宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留檢測的分析方法里，ELISA法應(yīng)用較多，也是QC日常放行檢測的主要方式。該方法操作相對(duì)簡便、檢測精度較好，便于設(shè)定控制范圍與制定技術(shù)規(guī)范，適用于產(chǎn)品開發(fā)及過程控制；不過，ELISA檢測依賴抗原與抗體的特異性結(jié)合，因此以生物制品中HCP為免疫原制備的抗體質(zhì)量，對(duì)檢測結(jié)果影響極大。無論是市售ELISA試劑盒，還是實(shí)驗(yàn)室自制的多克隆抗體，若抗體的特異性與適用性不足，都可能導(dǎo)致HCP漏檢，進(jìn)而給生物制品質(zhì)量安全埋下隱患。另外，ELISA檢測HCP時(shí)采用多克隆抗體，無法針對(duì)性反映高風(fēng)險(xiǎn)HCP殘留蛋白的實(shí)際存在狀況。

宿主細(xì)胞蛋白（HCP）多與細(xì)胞關(guān)鍵功能相關(guān)，像細(xì)胞增殖、基因轉(zhuǎn)錄、蛋白合成修飾、細(xì)胞存活及凋亡等，工藝過程中會(huì)通過細(xì)胞分泌，或因細(xì)胞死亡、裂解而釋放。生產(chǎn)環(huán)節(jié)中，主要有三方面因素影響HCP的組成與豐度：①宿主細(xì)胞基因組調(diào)控及培養(yǎng)工藝：特定工藝下潛在HCP數(shù)量可能極多，且并非所有基因都會(huì)表達(dá)，部分基因的表達(dá)存在時(shí)間與條件差異；例如大腸桿菌約含4300個(gè)基因，不同工藝產(chǎn)物會(huì)經(jīng)歷獨(dú)特的翻譯后修飾，增加HCP的總數(shù)與生化復(fù)雜性。研究表明，大腸桿菌表達(dá)的蛋白存在數(shù)量差異，這可能是對(duì)環(huán)境條件的適應(yīng)性反應(yīng)，但85-90%有潛在免疫原性的HCP在不同發(fā)酵過程中均會(huì)出現(xiàn)。②產(chǎn)物表達(dá)方式：宿主細(xì)胞與外源基因、載體及輔助成分構(gòu)成的體系，可實(shí)現(xiàn)穩(wěn)定、瞬時(shí)及誘導(dǎo)表達(dá)；以大腸桿菌為例，常見的表達(dá)形式包括胞內(nèi)表達(dá)、分泌表達(dá)、可溶性表達(dá)、不溶性包涵體形式，以及融合與非融合表達(dá)。③純化步驟及產(chǎn)品自身特性：純化過程中能去除99%以上的HCP，但仍有殘留HCP保留在產(chǎn)品中，這些殘留HCP可能與產(chǎn)品結(jié)合，隨產(chǎn)品一同完成純化。

定制化試劑盒之所以成為宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留檢測的優(yōu)先選擇，關(guān)鍵原因之一是其構(gòu)建的檢測體系更契合商業(yè)化生產(chǎn)中HCP工藝雜質(zhì)的控制需求。在HCP校準(zhǔn)品與HCP抗體這兩大關(guān)鍵試劑組分達(dá)標(biāo)后，定制化方法的建立與優(yōu)化會(huì)依托真實(shí)的純化中間品及原液樣品開展——通過優(yōu)化檢測條件提升對(duì)低濃度HCP的檢測靈敏度，從而滿足工藝驗(yàn)證與過程控制的需求。臨床三期階段需對(duì)生產(chǎn)工藝開展系統(tǒng)驗(yàn)證，以保障其穩(wěn)定性與可重復(fù)性，而定制化HCPELISA檢測方法能更準(zhǔn)確地監(jiān)測工藝中HCP的去除效果，為工藝驗(yàn)證提供堅(jiān)實(shí)支撐。過程控制環(huán)節(jié)，借助工藝特異型HCP ELISA檢測方法，可實(shí)時(shí)監(jiān)測生產(chǎn)過程中的HCP水平，擁有更強(qiáng)的生產(chǎn)異常預(yù)警能力，能及時(shí)排查生產(chǎn)風(fēng)險(xiǎn)，保障產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定。

中國倉鼠卵巢細(xì)胞（Chinese Hamster Ovary，CHO）是生物制品生產(chǎn)中常用的動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)，廣泛應(yīng)用于抗體、重組蛋白、疫苗等產(chǎn)品的制備。采用 CHO 細(xì)胞作為宿主進(jìn)行生產(chǎn)時(shí)，難免會(huì)引入宿主細(xì)胞蛋白（HCP）雜質(zhì)；即便 HCP 殘留量較低，仍可能存在免疫原性，還會(huì)帶來降低產(chǎn)品蛋白穩(wěn)定性等風(fēng)險(xiǎn)。因此，需對(duì)生物制品中的 HCP 殘留進(jìn)行定量分析，從而保障純化工藝的一致性與終產(chǎn)品的安全性。SHENTEK^®CHO 宿主細(xì)胞蛋白（HCP ）殘留檢測試劑盒實(shí)現(xiàn)了關(guān)鍵試劑的全國產(chǎn)化，其通過 CHO 細(xì)胞（K1&S）補(bǔ)料分批培養(yǎng)工藝制備 HCPs，再以此免疫綿羊獲取抗體，適用于檢測 CHO 細(xì)胞系表達(dá)的生物制品（如單抗、重組蛋白、疫苗等）中的 HCP 殘留。該試劑盒具有操作步驟少、檢測速度快、專一性強(qiáng)、性能穩(wěn)定可靠的特點(diǎn)。

定制化試劑盒之所以成為宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留檢測的優(yōu)先選擇，原因之一在于其構(gòu)建的定制化檢測體系，更契合商業(yè)化生產(chǎn)中HCP工藝雜質(zhì)的控制需求。在HCP校準(zhǔn)品與HCP抗體這兩大關(guān)鍵試劑組分符合要求的基礎(chǔ)上，定制化方法的建立與優(yōu)化依托真實(shí)的純化中間品及原液樣品開展，通過優(yōu)化檢測條件提升對(duì)低濃度HCPs的檢測靈敏度，從而滿足工藝驗(yàn)證與過程控制的需求。進(jìn)入臨床三期階段，生產(chǎn)工藝需開展系統(tǒng)驗(yàn)證，以保障工藝的穩(wěn)定性與可重復(fù)性。此時(shí)，定制化HCPELISA檢測方法可更準(zhǔn)確地監(jiān)測生產(chǎn)工藝中HCP的去除成效，為工藝驗(yàn)證提供堅(jiān)實(shí)支撐。在過程控制環(huán)節(jié)，借助工藝特異型HCPELISA檢測方法，可實(shí)時(shí)監(jiān)測生產(chǎn)過程中的HCP水平，擁有更強(qiáng)的生產(chǎn)異常預(yù)警能力，能及時(shí)排查生產(chǎn)風(fēng)險(xiǎn)，保障產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定。編輯分享將定制化試劑盒用于HCP殘留檢測的優(yōu)勢分點(diǎn)列出推薦一些關(guān)于定制化試劑盒在HCP殘留檢測中應(yīng)用的研究報(bào)告除了文中提到的方法，還有哪些可以提高HCP檢測靈敏度的技術(shù)？