Sf9宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留檢測高風(fēng)險(xiǎn)蛋白

湖州申科生物憑借自主可控的供應(yīng)鏈與經(jīng)嚴(yán)格驗(yàn)證的技術(shù)性能，確保 HCP 檢測試劑盒的長期穩(wěn)定供應(yīng)及出色分析能力。一方面，公司實(shí)現(xiàn)關(guān)鍵物料自研自產(chǎn)：校準(zhǔn)品通過凍干工藝大規(guī)模生產(chǎn)，能穩(wěn)定儲(chǔ)存 10 年以上；抗體經(jīng)大動(dòng)物免疫制備，產(chǎn)量可支撐≥10,000 盒試劑盒生產(chǎn)，確保同批次抗體連續(xù)供應(yīng)超 10 年；試劑盒經(jīng)多批次驗(yàn)證，批內(nèi)與批間一致性表現(xiàn)良好。另一方面，所有產(chǎn)品均參照 ICH Q2（R2）及 ICH M10 法規(guī)要求完成驗(yàn)證：以大腸桿菌（E.coli）HCP 產(chǎn)品為例，其線性范圍（1-243 ng/mL）的 R2>0.999，各濃度點(diǎn)回收率偏差≤5%；準(zhǔn)確度處于 81.2%-111.6% 區(qū)間，中間精密度 CV 值為 5.7%-12.4%；定量限（LLOQ）低至 1.5 ng/mL，且對(duì) CHO、HEK293 等多種宿主細(xì)胞的交叉反應(yīng)均低于檢測限。同時(shí)，借助二維電泳（檢出 826 個(gè)蛋白點(diǎn)）與質(zhì)譜法（鑒定 2204 個(gè)蛋白點(diǎn)）對(duì)校準(zhǔn)品進(jìn)行雙重表征，并運(yùn)用 IMBS-2D（覆蓋率 > 70%）與 IMBS-MS（覆蓋率 84.7%）正交技術(shù)驗(yàn)證抗體覆蓋率，從源頭保障檢測結(jié)果的全面性與可靠性。

湖州申科生物在宿主細(xì)胞蛋白（HCP）ELISA 檢測技術(shù)領(lǐng)域具備扎實(shí)的技術(shù)積累，已搭建起高質(zhì)量、全流程的自主開發(fā)平臺(tái)，覆蓋 HCP 檢測試劑盒研發(fā)的關(guān)鍵環(huán)節(jié)：①抗原表征與制備：依托合規(guī)平臺(tái)具備 HCP Reference/Antigen 制備能力，借助 2D 凝膠電泳等先進(jìn)技術(shù)保障抗原庫的代表性；②動(dòng)物免疫與抗體制備：憑借自有免疫動(dòng)物平臺(tái)，把控免疫原設(shè)計(jì)及動(dòng)物免疫過程，產(chǎn)出高特異性、廣覆蓋度的抗體；③體系開發(fā)與驗(yàn)證：依靠成熟技術(shù)經(jīng)驗(yàn)開發(fā)高靈敏度、高穩(wěn)定性的檢測體系，并嚴(yán)格遵循 GMP 標(biāo)準(zhǔn)完成方法學(xué)驗(yàn)證。該平臺(tái)通過全流程自主可控的技術(shù)整合，從源頭保障試劑盒性能的一致性與可靠性，大幅降低不同批次試劑盒的檢測變異性。其研發(fā)的 HCP ELISA 試劑盒已服務(wù)國內(nèi)外 200 余家生物醫(yī)藥企業(yè)，為單抗、疫苗等生物制品的工藝開發(fā)、質(zhì)量控制及 IND/BLA 等法規(guī)申報(bào)，提供符合監(jiān)管標(biāo)準(zhǔn)的定制化檢測方案。

定制化試劑盒之所以成為宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留檢測的優(yōu)先選擇，原因之一在于其構(gòu)建的定制化檢測體系，更契合商業(yè)化生產(chǎn)中HCP工藝雜質(zhì)的控制需求。在HCP校準(zhǔn)品與HCP抗體這兩大關(guān)鍵試劑組分符合要求的基礎(chǔ)上，定制化方法的建立與優(yōu)化依托真實(shí)的純化中間品及原液樣品開展，通過優(yōu)化檢測條件提升對(duì)低濃度HCPs的檢測靈敏度，從而滿足工藝驗(yàn)證與過程控制的需求。進(jìn)入臨床三期階段，生產(chǎn)工藝需開展系統(tǒng)驗(yàn)證，以保障工藝的穩(wěn)定性與可重復(fù)性。此時(shí)，定制化HCPELISA檢測方法可更準(zhǔn)確地監(jiān)測生產(chǎn)工藝中HCP的去除成效，為工藝驗(yàn)證提供堅(jiān)實(shí)支撐。在過程控制環(huán)節(jié)，借助工藝特異型HCPELISA檢測方法，可實(shí)時(shí)監(jiān)測生產(chǎn)過程中的HCP水平，擁有更強(qiáng)的生產(chǎn)異常預(yù)警能力，能及時(shí)排查生產(chǎn)風(fēng)險(xiǎn)，保障產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定。編輯分享將定制化試劑盒用于HCP殘留檢測的優(yōu)勢分點(diǎn)列出推薦一些關(guān)于定制化試劑盒在HCP殘留檢測中應(yīng)用的研究報(bào)告除了文中提到的方法，還有哪些可以提高HCP檢測靈敏度的技術(shù)？

美國藥典（USP）1132 章節(jié)中，推薦的 HCP 抗體純化方式有兩種，分別是 Protein A/Protein G 親和柱層析法與 HCP 抗原親和柱層析法。這兩種方法各有特點(diǎn)與不足，且均滿足監(jiān)管層面的要求。在實(shí)際應(yīng)用場景中，針對(duì)不同產(chǎn)品，兩種方法可能造成檢測結(jié)果的差異。兩種方法所獲抗體的關(guān)鍵差異，在于 HCP 抗體有效含量的占比不同。其中，HCP 抗原親和柱層析法的有效含量占比明顯更高，但該方法存在部分 HCP 抗體流失的情況，這會(huì)使得針對(duì)特定樣本的檢測結(jié)果低于前者，因此企業(yè)在實(shí)際建立檢測方法時(shí)，需開展充分評(píng)估。此外，HCP 抗原親和柱層析法對(duì)純化工藝的要求更為嚴(yán)格，若要確?？贵w的批間一致性，需重點(diǎn)考察 HCP 抗原柱的制備工藝、柱子的使用壽命以及再次制備時(shí)的一致性等關(guān)鍵問題。

宿主細(xì)胞蛋白（HCP）多與細(xì)胞關(guān)鍵功能相關(guān)，像細(xì)胞增殖、基因轉(zhuǎn)錄、蛋白合成修飾、細(xì)胞存活及凋亡等，工藝過程中會(huì)通過細(xì)胞分泌，或因細(xì)胞死亡、裂解而釋放。生產(chǎn)環(huán)節(jié)中，主要有三方面因素影響HCP的組成與豐度：①宿主細(xì)胞基因組調(diào)控及培養(yǎng)工藝：特定工藝下潛在HCP數(shù)量可能極多，且并非所有基因都會(huì)表達(dá)，部分基因的表達(dá)存在時(shí)間與條件差異；例如大腸桿菌約含4300個(gè)基因，不同工藝產(chǎn)物會(huì)經(jīng)歷獨(dú)特的翻譯后修飾，增加HCP的總數(shù)與生化復(fù)雜性。研究表明，大腸桿菌表達(dá)的蛋白存在數(shù)量差異，這可能是對(duì)環(huán)境條件的適應(yīng)性反應(yīng)，但85-90%有潛在免疫原性的HCP在不同發(fā)酵過程中均會(huì)出現(xiàn)。②產(chǎn)物表達(dá)方式：宿主細(xì)胞與外源基因、載體及輔助成分構(gòu)成的體系，可實(shí)現(xiàn)穩(wěn)定、瞬時(shí)及誘導(dǎo)表達(dá)；以大腸桿菌為例，常見的表達(dá)形式包括胞內(nèi)表達(dá)、分泌表達(dá)、可溶性表達(dá)、不溶性包涵體形式，以及融合與非融合表達(dá)。③純化步驟及產(chǎn)品自身特性：純化過程中能去除99%以上的HCP，但仍有殘留HCP保留在產(chǎn)品中，這些殘留HCP可能與產(chǎn)品結(jié)合，隨產(chǎn)品一同完成純化。

SHENTEK^®AbunProteoX 是以磁珠為基礎(chǔ)構(gòu)建的親和配體，適用于多種生物制品樣本。其操作流程經(jīng)精心設(shè)計(jì)，簡化高效，方便用戶操作。與傳統(tǒng)非變性酶解方法相比，AbunProteoX 能有效提升 HCP 的檢出效果，有效降低質(zhì)譜分析的檢測下限，使低豐度蛋白得以有效檢出，保障了檢測的高靈敏度。即便存在高豐度目標(biāo)蛋白時(shí)，經(jīng) AbunProteoX 處理后，仍能有效分析宿主細(xì)胞蛋白（HCPs），為生物制品中宿主細(xì)胞蛋白殘留控制提供了簡便、易用且高效的樣品處理工具。