MRC-5宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留檢測(cè)試劑盒

湖州申科生物專注于研發(fā)貼合實(shí)際生產(chǎn)工藝的商業(yè)化宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留檢測(cè)試劑盒，依托不同工藝下 HCP 的差異化分析，針對(duì)性推出各細(xì)分工藝領(lǐng)域的 HCP 檢測(cè)試劑盒。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示：針對(duì) CHO-S 與 CHO-K1 兩種宿主細(xì)胞，兩類細(xì)胞共享 2458 種相同 HCP（占比 79.7%），但各自存在 392 種和 236 種特異性 HCP，充分體現(xiàn)工藝差異帶來的殘留蛋白特異性。進(jìn)一步對(duì)比 B3 表達(dá)菌與 K2 克隆菌，盡管二者共享 1489 種相同蛋白（分別占比 88% 和 85%），但仍各自檢出 208 種和 258 種獨(dú)有蛋白，差異率為 12%-15%。這些結(jié)果直接證實(shí)，不同工藝路線與克隆株選擇會(huì)影響 HCP 殘留譜的構(gòu)成。據(jù)此，湖州申科提出 “工藝定制化檢測(cè)” 策略：通過準(zhǔn)確識(shí)別共性與特異性 HCP，針對(duì)性研發(fā)細(xì)分試劑盒產(chǎn)品。

湖州申科生物憑借自主可控的供應(yīng)鏈與經(jīng)嚴(yán)格驗(yàn)證的技術(shù)性能，確保 HCP 檢測(cè)試劑盒的長(zhǎng)期穩(wěn)定供應(yīng)及出色分析能力。一方面，公司實(shí)現(xiàn)關(guān)鍵物料自研自產(chǎn)：校準(zhǔn)品通過凍干工藝大規(guī)模生產(chǎn)，能穩(wěn)定儲(chǔ)存 10 年以上；抗體經(jīng)大動(dòng)物免疫制備，產(chǎn)量可支撐≥10,000 盒試劑盒生產(chǎn)，確保同批次抗體連續(xù)供應(yīng)超 10 年；試劑盒經(jīng)多批次驗(yàn)證，批內(nèi)與批間一致性表現(xiàn)良好。另一方面，所有產(chǎn)品均參照 ICH Q2（R2）及 ICH M10 法規(guī)要求完成驗(yàn)證：以大腸桿菌（E.coli）HCP 產(chǎn)品為例，其線性范圍（1-243 ng/mL）的 R2>0.999，各濃度點(diǎn)回收率偏差≤5%；準(zhǔn)確度處于 81.2%-111.6% 區(qū)間，中間精密度 CV 值為 5.7%-12.4%；定量限（LLOQ）低至 1.5 ng/mL，且對(duì) CHO、HEK293 等多種宿主細(xì)胞的交叉反應(yīng)均低于檢測(cè)限。同時(shí)，借助二維電泳（檢出 826 個(gè)蛋白點(diǎn)）與質(zhì)譜法（鑒定 2204 個(gè)蛋白點(diǎn)）對(duì)校準(zhǔn)品進(jìn)行雙重表征，并運(yùn)用 IMBS-2D（覆蓋率 > 70%）與 IMBS-MS（覆蓋率 84.7%）正交技術(shù)驗(yàn)證抗體覆蓋率，從源頭保障檢測(cè)結(jié)果的全面性與可靠性。

宿主細(xì)胞蛋白（HCP）多與細(xì)胞關(guān)鍵功能相關(guān)，像細(xì)胞增殖、基因轉(zhuǎn)錄、蛋白合成修飾、細(xì)胞存活及凋亡等，工藝過程中會(huì)通過細(xì)胞分泌，或因細(xì)胞死亡、裂解而釋放。生產(chǎn)環(huán)節(jié)中，主要有三方面因素影響HCP的組成與豐度：①宿主細(xì)胞基因組調(diào)控及培養(yǎng)工藝：特定工藝下潛在HCP數(shù)量可能極多，且并非所有基因都會(huì)表達(dá)，部分基因的表達(dá)存在時(shí)間與條件差異；例如大腸桿菌約含4300個(gè)基因，不同工藝產(chǎn)物會(huì)經(jīng)歷獨(dú)特的翻譯后修飾，增加HCP的總數(shù)與生化復(fù)雜性。研究表明，大腸桿菌表達(dá)的蛋白存在數(shù)量差異，這可能是對(duì)環(huán)境條件的適應(yīng)性反應(yīng)，但85-90%有潛在免疫原性的HCP在不同發(fā)酵過程中均會(huì)出現(xiàn)。②產(chǎn)物表達(dá)方式：宿主細(xì)胞與外源基因、載體及輔助成分構(gòu)成的體系，可實(shí)現(xiàn)穩(wěn)定、瞬時(shí)及誘導(dǎo)表達(dá)；以大腸桿菌為例，常見的表達(dá)形式包括胞內(nèi)表達(dá)、分泌表達(dá)、可溶性表達(dá)、不溶性包涵體形式，以及融合與非融合表達(dá)。③純化步驟及產(chǎn)品自身特性：純化過程中能去除99%以上的HCP，但仍有殘留HCP保留在產(chǎn)品中，這些殘留HCP可能與產(chǎn)品結(jié)合，隨產(chǎn)品一同完成純化。

為何定制化試劑盒會(huì)成為宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留檢測(cè)的優(yōu)先選擇？關(guān)鍵原因與檢測(cè)準(zhǔn)確性、藥物安全性緊密關(guān)聯(lián)。HCP ELISA 檢測(cè)屬于多分析物檢測(cè)技術(shù)，其檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性，高度依賴校準(zhǔn)品品質(zhì)、抗體質(zhì)量及檢測(cè)方法的構(gòu)建。定制化 HCP ELISA 檢測(cè)試劑盒的主要優(yōu)勢(shì)，在于其依托更具代表性的 HCP 抗原對(duì)動(dòng)物進(jìn)行免疫，由此制備的 HCP 抗體針對(duì)性更突出。這類針對(duì)性抗體可大幅降低 HCP 漏檢風(fēng)險(xiǎn)，特別是針對(duì)生產(chǎn)工藝中特有的高風(fēng)險(xiǎn) HCP 因子，能呈現(xiàn)更優(yōu)的檢出成效，為藥物的安全性、有效性及質(zhì)量可控性提供堅(jiān)實(shí)保障。

湖州申科生物搭建起專業(yè)化宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留檢測(cè)平臺(tái)，采用 ELISA 技術(shù)對(duì)宿主細(xì)胞蛋白總量展開分析，嚴(yán)格控制 CV 偏差與回收率指標(biāo)，確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的真實(shí)性，其研發(fā)的試劑盒及抗體具備高靈敏度、強(qiáng)特異性等優(yōu)勢(shì)。該平臺(tái)在技術(shù)服務(wù)層面提供兩類關(guān)鍵支撐：一是針對(duì) CHO、大腸桿菌（E.coli）、酵母等多種宿主的 HCP 殘留檢測(cè)服務(wù)，可直接輸出蛋白殘留量與樣品回收率數(shù)據(jù)；二是配套的樣品適用性驗(yàn)證體系，借助基質(zhì)定量下限驗(yàn)證、樣品稀釋度驗(yàn)證、準(zhǔn)確性驗(yàn)證及精密度驗(yàn)證（包含重復(fù)性與中間精密度）等多維度檢測(cè)方案，搭配完整的試劑盒性能報(bào)告，保障檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性與可溯源性，為生物制品工藝雜質(zhì)控制提供可靠支持

為何定制化試劑盒是宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留檢測(cè)的優(yōu)先選擇？特定工藝來源的抗原與校準(zhǔn)品更具代表性，是重要原因之一。不同生物制品的上游生產(chǎn)工藝存在差異，比如培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件、收獲時(shí)機(jī)等不同，都會(huì)使產(chǎn)生的 HCP 在蛋白種類、豐度及翻譯修飾上出現(xiàn)區(qū)別，進(jìn)而導(dǎo)致進(jìn)入下游純化工藝的 HCP 類型相應(yīng)改變 —— 尤其是與藥物主成分共同純化的 HCP，會(huì)以優(yōu)勢(shì)蛋白的形式存在于藥物原液或制劑中。HCP 定制化 ELISA 檢測(cè)試劑盒通常選用實(shí)際生產(chǎn)工藝中上游發(fā)酵后的樣品制備抗原與校準(zhǔn)品，這樣制得的校準(zhǔn)品能較充分地體現(xiàn)實(shí)際工藝中的 HCP，有效降低因抗原或校準(zhǔn)品種類不足引發(fā)的漏檢風(fēng)險(xiǎn)，同時(shí)減少定量不準(zhǔn)確的問題。