上海生物制品內(nèi)毒素檢測(cè)

來(lái)源： 發(fā)布時(shí)間：2025-11-04

湖州申科生物凝膠法鱟試劑是根據(jù)凝集反應(yīng)所形成凝膠的堅(jiān)實(shí)程度來(lái)限量檢測(cè)樣本中細(xì)菌內(nèi)毒素含量。常用于人用和動(dòng)物用注射藥物、生物制品及醫(yī)療器械等領(lǐng)域中定性或半定量地測(cè)定細(xì)菌內(nèi)毒素含量。本品為海洋生物鱟的血液變形細(xì)胞溶胞物的冷凍干燥制品,內(nèi)含能被微量細(xì)菌內(nèi)毒素活化的凝固酶原(Proclotting enzyme)和凝固酶蛋白(Coagulogen)。在適宜的條件下(溫度、pH值及無(wú)干擾物質(zhì)),細(xì)菌內(nèi)毒素能活化鱟試劑中的凝固酶原,使備試劑產(chǎn)生凝集反應(yīng)形成凝膠。本品可以快速、準(zhǔn)確地檢測(cè)樣品中的內(nèi)毒素水平，提高實(shí)驗(yàn)效率,保障實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性。
湖州申科生物提供重組級(jí)聯(lián)方法的技術(shù)轉(zhuǎn)移服務(wù)，含方法驗(yàn)證報(bào)告，助力內(nèi)毒素檢測(cè)方法平穩(wěn)切換。上海生物制品內(nèi)毒素檢測(cè)

上海生物制品內(nèi)毒素檢測(cè),內(nèi)毒素檢測(cè)

如何準(zhǔn)備樣品進(jìn)行內(nèi)毒素檢測(cè)呢？測(cè)試前，需要根據(jù)樣品實(shí)際情況進(jìn)行樣本前處理。大多數(shù)樣品只需要稀釋，使用內(nèi)毒素檢測(cè)試劑盒進(jìn)行測(cè)試即可。如果樣品有蛋白酶干擾并導(dǎo)致假陽(yáng)性結(jié)果，建議對(duì)樣品稀釋并70°C加熱5-15分鐘進(jìn)行熱滅活處理。如需要，可以對(duì)滅活樣品進(jìn)行進(jìn)一步稀釋后檢測(cè)。如果樣品可能含有受β-葡聚糖，建議使用抗增液。β-葡聚糖可能來(lái)自酵母和纖維素材料。如果樣品中因含有內(nèi)毒素結(jié)合物而存在抑制，可以嘗試使用分散劑。
重組蛋白內(nèi)毒素檢測(cè)LER現(xiàn)象開展細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)的操作過(guò)程，需防止樣品受到外源性污染。

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內(nèi)毒素檢測(cè)結(jié)果誤差可能源于多環(huán)節(jié)：試劑方面，鱟試劑（LAL ）或試劑批間差異、過(guò)期試劑活性下降會(huì)導(dǎo)致結(jié)果偏差，需通過(guò)試劑驗(yàn)收（如陽(yáng)性對(duì)照回收率驗(yàn)證）確保質(zhì)量；操作方面，實(shí)驗(yàn)器具未除熱原（如玻璃器皿未干熱滅菌）、加樣體積不準(zhǔn)確會(huì)引入污染或誤差，需嚴(yán)格執(zhí)行 SOP（如器皿 250℃干熱滅菌≥30 分鐘）；環(huán)境方面，實(shí)驗(yàn)室空氣中的微生物孢子、粉塵可能污染樣品，需在潔凈工作臺(tái)操作并設(shè)置陰性對(duì)照。此外，反應(yīng)溫度波動(dòng)（偏離 37℃±1℃）會(huì)影響酶活性，需使用恒溫孵育器精確控溫，確保反應(yīng)條件穩(wěn)定。

重組試劑（rCR、rFC）是解決 LER 的重要工具，優(yōu)化內(nèi)毒素檢測(cè)性能。重組鱟試劑（rCR）通過(guò)基因工程表達(dá) C、B 因子及凝固酶原，剔除 G 因子，完全模擬天然鱟級(jí)聯(lián)反應(yīng)，靈敏度達(dá) 0.005EU/mL，與天然方法橋接容易，能避免 LPS 結(jié)構(gòu)變化導(dǎo)致的假陰性；重組 C 因子（rFC）靈敏度 0.005-5EU/mL，性狀穩(wěn)定、均一性好，雖需熒光酶標(biāo)儀，但對(duì)部分 LER 場(chǎng)景（如無(wú)蛋白質(zhì)干擾）適配性強(qiáng)。二者擺脫了天然鱟試劑的局限，為內(nèi)毒素檢測(cè)提供更抗 LER 的選擇，契合行業(yè)技術(shù)趨勢(shì)。
內(nèi)毒素檢測(cè)復(fù)孔 CV＞15%，需校準(zhǔn)移液槍，規(guī)范加樣，排查耗材污染。

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內(nèi)毒素檢測(cè)中，樣品中的蛋白質(zhì)或酶的修飾作用易破壞鱟試劑的反應(yīng)體系，導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果失真。鱟試劑檢測(cè)內(nèi)毒素的本質(zhì)是一系列絲氨酸蛋白酶的酶促放大過(guò)程，若樣品中存在氧化劑、抗氧化劑、蛋白水解劑或?qū)Ｒ皇Щ顒瑫?huì)直接滅活反應(yīng)所需的酶；而乙醇、苯酚等物質(zhì)則會(huì)導(dǎo)致蛋白質(zhì)變性，同樣抑制反應(yīng)進(jìn)程。例如，某些生物制品中含有的蛋白水解酶，可能提前降解鱟試劑中的蛋白酶，使內(nèi)毒素?zé)o法被正常檢測(cè)。為消除這類干擾，需優(yōu)先限制樣品中抑制物的含量：可采用內(nèi)毒素檢查用水稀釋樣品，降低抑制物濃度；對(duì)耐熱的抑制物（如部分蛋白水解酶），可通過(guò)加熱滅活處理（如 56℃孵育 30 分鐘）破壞其活性；若樣品基質(zhì)復(fù)雜，還可使用超濾技術(shù)分離內(nèi)毒素與干擾蛋白質(zhì)，避免修飾作用對(duì)酶促反應(yīng)的影響，保障內(nèi)毒素檢測(cè)結(jié)果的可靠性。
含蛋白酶的樣本致假陽(yáng)性時(shí)，可稀釋后 70℃加熱 5-15min 滅活，再做內(nèi)毒素檢測(cè)。重組蛋白內(nèi)毒素檢測(cè)LER現(xiàn)象

內(nèi)毒素檢測(cè)需關(guān)注制劑成分，螯合劑和表面活性劑可能誘發(fā)“低內(nèi)毒素回收（LER）”。上海生物制品內(nèi)毒素檢測(cè)

低內(nèi)毒素回收（LER）又稱內(nèi)毒素掩蔽，是指無(wú)菌制劑（尤其蛋白類生物制劑）進(jìn)行內(nèi)毒素檢測(cè)時(shí)，加標(biāo)內(nèi)毒素的回收率＜50% 的現(xiàn)象，且無(wú)法通過(guò)稀釋排除，區(qū)別于傳統(tǒng)檢測(cè)干擾。LER 會(huì)導(dǎo)致內(nèi)毒素污染被低估，已被全球監(jiān)管機(jī)構(gòu)重點(diǎn)關(guān)注：FDA 2013 年要求生物藥 BLA 申報(bào)時(shí)提交 LER 研究報(bào)告；EMA 2023 年明確含表面活性劑（如吐溫）或螯合劑（如 EDTA）的制劑需提供 LER 數(shù)據(jù)；中國(guó)藥典 2025 版 9251 通則也新增 LER 內(nèi)容，與國(guó)際接軌。這些要求促使企業(yè)優(yōu)化內(nèi)毒素檢測(cè)流程，避免因 LER 導(dǎo)致的檢測(cè)偏差，確保藥品安全。
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