廣東宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留檢測抗體覆蓋率驗證

來源： 發(fā)布時間：2025-12-02

湖州申科生物搭建起專業(yè)化宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留檢測平臺，采用 ELISA 技術(shù)對宿主細(xì)胞蛋白總量展開分析，嚴(yán)格控制 CV 偏差與回收率指標(biāo)，確保實驗結(jié)果的真實性，其研發(fā)的試劑盒及抗體具備高靈敏度、強特異性等優(yōu)勢。該平臺在技術(shù)服務(wù)層面提供兩類關(guān)鍵支撐：一是針對 CHO、大腸桿菌（E.coli）、酵母等多種宿主的 HCP 殘留檢測服務(wù)，可直接輸出蛋白殘留量與樣品回收率數(shù)據(jù)；二是配套的樣品適用性驗證體系，借助基質(zhì)定量下限驗證、樣品稀釋度驗證、準(zhǔn)確性驗證及精密度驗證（包含重復(fù)性與中間精密度）等多維度檢測方案，搭配完整的試劑盒性能報告，保障檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性與可溯源性，為生物制品工藝雜質(zhì)控制提供可靠支持
宿主細(xì)胞蛋白殘留檢測試劑盒的開發(fā)不是一個簡單的過程，是一個對平臺、技術(shù)均有很高要求的整體流程。廣東宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留檢測抗體覆蓋率驗證

廣東宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留檢測抗體覆蓋率驗證,宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留檢測

畢赤酵母（Pichia pastoris）作為第二代酵母表達(dá)系統(tǒng)的代表性菌株，已被美國 FDA 認(rèn)定為 GRAS（一般認(rèn)為安全）級微生物，具備表達(dá)水平高、產(chǎn)物活性優(yōu)、培養(yǎng)成本低、易于擴(kuò)大至工業(yè)化生產(chǎn)等優(yōu)勢。在生物制藥領(lǐng)域，酶制劑、胰島素、表皮生長因子、膠原蛋白等多款生物制劑，已借助畢赤酵母系統(tǒng)實現(xiàn)商業(yè)化生產(chǎn)。和其他產(chǎn)品雜質(zhì)類似，畢赤酵母宿主殘留蛋白（HCP）可能對生物制品的安全性與有效性造成不利影響，故而在生產(chǎn)監(jiān)測、產(chǎn)品放行等環(huán)節(jié)中，需對其開展定量研究并實施嚴(yán)格控制。SHENTEK® 畢赤酵母 HCP 殘留檢測試劑盒（一步酶聯(lián)免疫吸附法），是湖州申科生物自主研發(fā)的畢赤酵母 HCP 通用檢測試劑盒，不僅擁有完全自主知識產(chǎn)權(quán)，還實現(xiàn)了關(guān)鍵試劑的全國產(chǎn)化。該試劑盒適用于對 GS115、X33 等畢赤酵母菌株生產(chǎn)的生物制品中宿主殘留蛋白進(jìn)行定量檢測，具有操作步驟少、檢測速度快、專一性強、性能穩(wěn)定可靠的特點。
浙江宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留檢測試劑盒湖州申科自主研發(fā)IMBS抗體覆蓋率檢測法及低豐度HCP富集技術(shù)，合作完成多項課題并發(fā)表成果。

廣東宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留檢測抗體覆蓋率驗證,宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留檢測

湖州申科生物在宿主細(xì)胞蛋白（HCP）ELISA 檢測技術(shù)領(lǐng)域具備扎實的技術(shù)積累，已搭建起高質(zhì)量、全流程的自主開發(fā)平臺，覆蓋 HCP 檢測試劑盒研發(fā)的關(guān)鍵環(huán)節(jié)：①抗原表征與制備：依托合規(guī)平臺具備 HCP Reference/Antigen 制備能力，借助 2D 凝膠電泳等先進(jìn)技術(shù)保障抗原庫的代表性；②動物免疫與抗體制備：憑借自有免疫動物平臺，把控免疫原設(shè)計及動物免疫過程，產(chǎn)出高特異性、廣覆蓋度的抗體；③體系開發(fā)與驗證：依靠成熟技術(shù)經(jīng)驗開發(fā)高靈敏度、高穩(wěn)定性的檢測體系，并嚴(yán)格遵循 GMP 標(biāo)準(zhǔn)完成方法學(xué)驗證。該平臺通過全流程自主可控的技術(shù)整合，從源頭保障試劑盒性能的一致性與可靠性，大幅降低不同批次試劑盒的檢測變異性。其研發(fā)的 HCP ELISA 試劑盒已服務(wù)國內(nèi)外 200 余家生物醫(yī)藥企業(yè)，為單抗、疫苗等生物制品的工藝開發(fā)、質(zhì)量控制及 IND/BLA 等法規(guī)申報，提供符合監(jiān)管標(biāo)準(zhǔn)的定制化檢測方案。

大腸桿菌具有遺傳背景明確、便于培養(yǎng)與調(diào)控、蛋白表達(dá)量高、成本低廉且培養(yǎng)周期短等特點，是性價比高的蛋白表達(dá)系統(tǒng)。其中，K-12系列與B系列菌株是工業(yè)級生物工程中常用的大腸桿菌菌株。K-12菌株及其衍生的DH5α、Top10、JM109等菌株，可用于大規(guī)模生產(chǎn)質(zhì)粒DNA，進(jìn)而制備細(xì)胞基因治療產(chǎn)品與病毒載體類疫苗；而源自B系列的菌株（如BL21），更適合高效轉(zhuǎn)染表達(dá)載體及常規(guī)蛋白的表達(dá)，例如病毒蛋白、重組蛋白疫苗、細(xì)胞因子、酶類等產(chǎn)品。湖州申科生物依據(jù)這兩種菌株的特性，分別研發(fā)了大腸桿菌表達(dá)菌HCP殘留檢測試劑盒與大腸桿菌克隆菌堿裂HCP殘留檢測試劑盒。
臨床 III 期及商業(yè)化生產(chǎn)階段，法規(guī)推薦用定制化 HCP ELISA 試劑盒保障檢測針對性。

廣東宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留檢測抗體覆蓋率驗證,宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留檢測

由于 HCPs 屬于復(fù)雜的多分析物，為制備覆蓋率盡可能高的抗體（以覆蓋工藝特有的高風(fēng)險 HCPs），需采用可靠的免疫策略。獲得符合性能要求的抗體后，需借助經(jīng)過驗證的 2D 或 LC-MS 方法對抗體覆蓋率進(jìn)行表征，確?？贵w可充分覆蓋各實際工藝下產(chǎn)生的 HCPs。在擁有代表性抗原與優(yōu)良性能抗體的基礎(chǔ)上，開展 ELISA 檢測體系開發(fā)，涵蓋原輔料篩選與制備研究、各組分工藝及反應(yīng)體系研究、穩(wěn)定性研究等重要內(nèi)容。檢測體系開發(fā)完成后，需依據(jù) ICH 及藥典要求開展分析方法驗證評估，確保體系的線性、范圍、檢測限、定量限、準(zhǔn)確度、精密度、專屬性及耐用性均滿足法規(guī)要求。
湖州申科擁有自主搭建的多克隆抗體庫（CHO\E.coli\293T細(xì)胞等），提供對應(yīng)覆蓋率驗證服務(wù)。廣東宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留檢測抗體覆蓋率驗證

為適配快速替換需求，湖州申科可應(yīng)客戶要求，按生產(chǎn)工藝定制宿主細(xì)胞蛋白（HCP）商業(yè)化檢測試劑盒。廣東宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留檢測抗體覆蓋率驗證

方法選擇是影響宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留檢測結(jié)果的因素之一。酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）與液相色譜 - 質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（LC-MS），是當(dāng)前 HCP 檢測領(lǐng)域的兩類常用方法。據(jù)文獻(xiàn)統(tǒng)計，當(dāng)前在總 HCP 定量檢測中，ELISA 仍為主流技術(shù)；而 MS 法可用于特定蛋白（如高風(fēng)險蛋白）的鑒定與定量，已成為重要的互補手段。此外，檢測過程中所用試劑與耗材的質(zhì)量，會直接影響檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。質(zhì)量不達(dá)標(biāo)的試劑，可能引發(fā)檢測結(jié)果出現(xiàn)假陽性或假陰性。舉例來說，若抗體的特異性與親和力不足，可能在 ELISA 檢測中產(chǎn)生交叉反應(yīng)；若抗原代表性不足或抗體覆蓋率偏低，則可能造成漏檢；而稀釋液抗干擾能力較弱時，也會對檢測準(zhǔn)確性產(chǎn)生影響。相關(guān)案例研究顯示，采用定制化方法替代原有商業(yè)化試劑盒后，抗原代表性與抗體覆蓋率明顯提升，HCP 檢測值也呈現(xiàn)整體升高的趨勢。
廣東宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留檢測抗體覆蓋率驗證