浙江宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測免疫策略

來源： 發(fā)布時間：2025-10-01

HCP 是宿主細胞（多為哺乳動物細胞或微生物）所產(chǎn)生的蛋白質(zhì)，這類蛋白質(zhì)存在潛在風險，可能對藥物的安全性與有效性產(chǎn)生影響。因此，宿主細胞蛋白（HCP ）殘留量成為生物藥物的關鍵質(zhì)量屬性，需在藥物開發(fā)與生產(chǎn)階段，對 HCP 的存在進行嚴格監(jiān)控、管理并做好記錄。隨著生產(chǎn)流程推進，生物制品純度逐步提升，但 HCP 的總量與種類也在不斷減少，這無疑增加了 HCP 分析與監(jiān)測工作的難度。在此背景下，開發(fā)高效的 HCP 富集材料及技術便顯得尤為重要。低豐度宿主殘留蛋白富集試劑盒，專為富集生物制品（如單抗、融合蛋白等）中的 HCP 并去除高豐度蛋白而設計，其通過磁珠法構建多樣化且復雜的親和配體庫，以實現(xiàn)對目標蛋白的高效識別與結合。該試劑盒的設計不僅覆蓋傳統(tǒng)單一蛋白，還可適配融合蛋白、單克隆抗體等多種生物樣本類型，體現(xiàn)出較強的適用性與靈活性。湖州申科系列HCP檢測產(chǎn)品均進行了校準品的表征分析，抗體覆蓋率分析。浙江宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測免疫策略

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目前通過Vero細胞培養(yǎng)的病毒有狂犬病病毒、脊髓灰質(zhì)炎病毒等，種類繁多，工藝也各有千秋。湖州申科生物Vero細胞裂解型HCP殘留檢測試劑盒（一步酶聯(lián)免疫吸附法）針對工藝過程中Vero細胞裂解后產(chǎn)生的大量不同種類的HCPs，可定量檢測使用Vero細胞系生產(chǎn)并通過細胞裂解工藝收獲的生物制品中宿主細胞蛋白的殘留檢測，抗體與校準品可覆蓋近3000種蛋白。試劑盒操作簡便，提高實驗人員的時間利用率。試劑盒抗體覆蓋率為65.1%-85.1%（IMBS-2D）和76.9%(IMBS-MS，Unique Peptide≥2）。試劑盒嚴格遵循ISO13485質(zhì)量體系進行生產(chǎn)，并按照法規(guī)要求進行了性能驗證，各項性能滿足Vero宿主細胞蛋白檢測需求。
浙江宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測免疫策略工藝特異型試劑盒針對特定生產(chǎn)流程，準確監(jiān)控HCP殘留，適配工藝變動。

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定制化試劑盒之所以成為宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測的優(yōu)先選擇，關鍵原因之一是其構建的檢測體系更契合商業(yè)化生產(chǎn)中HCP工藝雜質(zhì)的控制需求。在HCP校準品與HCP抗體這兩大關鍵試劑組分達標后，定制化方法的建立與優(yōu)化會依托真實的純化中間品及原液樣品開展——通過優(yōu)化檢測條件提升對低濃度HCP的檢測靈敏度，從而滿足工藝驗證與過程控制的需求。臨床三期階段需對生產(chǎn)工藝開展系統(tǒng)驗證，以保障其穩(wěn)定性與可重復性，而定制化HCPELISA檢測方法能更準確地監(jiān)測工藝中HCP的去除效果，為工藝驗證提供堅實支撐。過程控制環(huán)節(jié)，借助工藝特異型HCP ELISA檢測方法，可實時監(jiān)測生產(chǎn)過程中的HCP水平，擁有更強的生產(chǎn)異常預警能力，能及時排查生產(chǎn)風險，保障產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定。

湖州申科運用免疫磁珠分離技術（IMBS），搭配 2D 電泳或 LC-MS 技術評估抗體覆蓋率。IMBS 的主要流程涵蓋：多克隆抗體與磁珠的偶聯(lián)反應、磁珠未結合位點的封閉處理、HCP 樣本與結合抗體的磁珠共同孵育反應。該過程中，HCP 抗體會結合可識別的 HCP，未被識別的 HCP 則通過后續(xù)洗滌步驟去除，隨后借助低 pH 等洗脫條件，收集抗體捕獲的 HCP。此方法具備 AAE（抗體親和提取，Antibody Affinity Extraction）免疫層析柱分離的全部優(yōu)勢，同時免疫磁珠可在懸浮狀態(tài)下與 HCP 樣品充分混勻并結合，HCP 結合效果更優(yōu)；且依托磁珠吸附，能減少 HCP 與填料的非特異性吸附，進一步提升實驗準確性。
基于HCP的復雜性，檢測中常遇到中間品，尤其是原液樣品無法達到稀釋線性，可能與樣品基質(zhì)的干擾有關。

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LC-MS技術作為生物制品宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測的新趨勢，應用時需重點考慮以下五方面：①穩(wěn)定性：需對HCPs的LC-MS檢測流程開展驗證，全流程需實施嚴格QC管控，以保障檢測結果的一致性與穩(wěn)定性。②可重復性：不同類型生物制品中HCPs的提取效率存在差異，且不同人員操作會產(chǎn)生偏差，因此需在上機前通過多種方法評估HCPs提取效率，規(guī)避人為因素導致的結果重復性不佳問題。③準確度：在方法開發(fā)與驗證階段，需設置內(nèi)標并確定定量算法，通過內(nèi)標響應回算得出HCPs含量，以此保證定量結果的準確性。④抗干擾能力：高豐度蛋白與特殊基質(zhì)會干擾質(zhì)譜檢測，需借助前處理手段去除高豐度蛋白或特殊基質(zhì)，從而降低其對HCPs肽段質(zhì)譜檢測的影響。⑤真實性：樣品中除HCPs外的其他物質(zhì)在質(zhì)譜分析中也會產(chǎn)生質(zhì)譜信號，需去除復雜背景噪音以避免假陽性與假陰性情況，同時建立規(guī)范的生信分析流程。在分析流程搭建過程中，同樣需制定嚴格的QC標準，并通過后續(xù)多種方法驗證，明確該標準的真實性。
湖州申科全自動 HCP ELISA 系統(tǒng)實現(xiàn)從加樣到檢測自動化，提升效率。PG13宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測試劑盒開發(fā)要求

湖州申科構建 HCP ELISA 檢測全流程平臺，確保試劑盒性能可靠。浙江宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測免疫策略

美國藥典 USP 通則 <1132.1>《質(zhì)譜法測定生物藥中殘留宿主細胞蛋白》（Residual Host Cell Protein Measurement in Biopharmaceuticals by Mass Spectrometry），主要內(nèi)容是介紹 LC-MS 技術在宿主細胞殘留蛋白檢測中的應用。該通則圍繞樣品制備、質(zhì)譜測試條件建立、數(shù)據(jù)分析、質(zhì)譜方法驗證等維度，詳細說明質(zhì)譜技術應用于 HCPs 檢測的優(yōu)勢及需注意的事項。作為先進的分析技術平臺，質(zhì)譜技術在 HCPs 分析中的應用，無論是單獨使用，還是與 ELISA 及其他分析方法聯(lián)合使用，都能幫助生產(chǎn)企業(yè)在產(chǎn)品全生命周期中更清晰地理解并建立 HCPs 檢測方法，進而保障產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定。
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