江蘇單抗藥物用宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留檢測(cè)橋接驗(yàn)證

中國(guó)倉鼠卵巢細(xì)胞（Chinese Hamster Ovary，CHO）是生物制品生產(chǎn)中常用的動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)，廣泛應(yīng)用于抗體、重組蛋白、疫苗等產(chǎn)品的制備。采用 CHO 細(xì)胞作為宿主進(jìn)行生產(chǎn)時(shí)，難免會(huì)引入宿主細(xì)胞蛋白（HCP）雜質(zhì)；即便 HCP 殘留量較低，仍可能存在免疫原性，還會(huì)帶來降低產(chǎn)品蛋白穩(wěn)定性等風(fēng)險(xiǎn)。因此，需對(duì)生物制品中的 HCP 殘留進(jìn)行定量分析，從而保障純化工藝的一致性與終產(chǎn)品的安全性。SHENTEK^®CHO 宿主細(xì)胞蛋白（HCP ）殘留檢測(cè)試劑盒實(shí)現(xiàn)了關(guān)鍵試劑的全國(guó)產(chǎn)化，其通過 CHO 細(xì)胞（K1&S）補(bǔ)料分批培養(yǎng)工藝制備 HCPs，再以此免疫綿羊獲取抗體，適用于檢測(cè) CHO 細(xì)胞系表達(dá)的生物制品（如單抗、重組蛋白、疫苗等）中的 HCP 殘留。該試劑盒具有操作步驟少、檢測(cè)速度快、專一性強(qiáng)、性能穩(wěn)定可靠的特點(diǎn)。

宿主細(xì)胞蛋白（HCP）多與細(xì)胞關(guān)鍵功能相關(guān)，例如細(xì)胞增殖、基因轉(zhuǎn)錄、蛋白合成修飾、細(xì)胞存活及凋亡等，在生產(chǎn)工藝中會(huì)因細(xì)胞分泌、死亡或裂解而釋放。生產(chǎn)過程里，有三大因素主要影響 HCP 的組成與豐度：①宿主細(xì)胞基因組調(diào)控及培養(yǎng)工藝：特定工藝下，潛在 HCP 數(shù)量可能極多，且并非所有基因都會(huì)表達(dá)，部分基因的表達(dá)具有時(shí)間和條件特異性；像大腸桿菌約含 4300 個(gè)基因，不同工藝產(chǎn)物會(huì)經(jīng)歷獨(dú)特的翻譯后修飾，這增加了 HCP 的總數(shù)與生化復(fù)雜性。研究顯示，大腸桿菌表達(dá)的蛋白間存在數(shù)量差異，這種差異可能是對(duì)環(huán)境條件的適應(yīng)性反應(yīng)，但 85-90% 具有潛在免疫原性的 HCP 在不同發(fā)酵過程中均會(huì)出現(xiàn)。②產(chǎn)物表達(dá)方式：宿主細(xì)胞與外源基因、載體及輔助成分構(gòu)成的體系，可實(shí)現(xiàn)穩(wěn)定、瞬時(shí)及誘導(dǎo)表達(dá)；以大腸桿菌為例，常見表達(dá)形式包括胞內(nèi)表達(dá)、分泌表達(dá)、可溶性表達(dá)、不溶性包涵體形式，還有融合與非融合表達(dá)。③純化步驟及產(chǎn)品自身特性的影響：純化過程中能去除 99% 以上的 HCP，但仍有少量殘留 HCP 留在產(chǎn)品中，這些殘留 HCP 可能與產(chǎn)品結(jié)合，隨產(chǎn)品一同被純化。

憑借高分辨質(zhì)譜技術(shù)，湖州申科生物推出宿主細(xì)胞蛋白定制化檢測(cè)服務(wù)組合，可滿足生物制品殘留蛋白的分析需求。該平臺(tái)服務(wù)內(nèi)容包括：1、HCP蛋白檢測(cè)定制化服務(wù)：借助ELISA、雙向電泳（2D）與LC-MS/MS技術(shù)，為常規(guī)生物制品檢測(cè)、高危及工藝相關(guān)蛋白數(shù)據(jù)庫搭建、特殊生物制品分析提供支持；2、抗體覆蓋率服務(wù)：運(yùn)用自主研發(fā)的IMBS技術(shù)結(jié)合質(zhì)譜，準(zhǔn)確評(píng)估ELISA試劑盒對(duì)工程細(xì)胞HCP的捕獲能力，同時(shí)完成校準(zhǔn)品表征；3、靶向HCP檢測(cè)：專注于高風(fēng)險(xiǎn)殘留蛋白的檢測(cè)方法開發(fā)；4、蛋白種屬鑒定服務(wù)：利用LC-MS技術(shù)追溯樣品中的物種特異性肽段。該服務(wù)體系以多技術(shù)聯(lián)用和深度定制化策略為支撐，可滿足從基礎(chǔ)篩查到工藝關(guān)鍵雜質(zhì)監(jiān)控的全維度需求。

宿主細(xì)胞殘留蛋白（HCP）檢測(cè)是生物制品質(zhì)量控制的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，當(dāng)前主流技術(shù)為基于抗體的免疫學(xué)方法（如 ELISA）。但實(shí)際檢測(cè)中，不同試劑盒的結(jié)果常存在明顯偏差，關(guān)鍵問題源于其兩大關(guān)鍵組分 ——HCP 校準(zhǔn)品與檢測(cè)抗體 —— 在制備及表征上的高度可變性。作為定量基準(zhǔn)的校準(zhǔn)品，自身復(fù)雜性極高。不同供應(yīng)商制備時(shí)，所用細(xì)胞來源、培養(yǎng)及表達(dá)條件存在明顯差異，且宿主蛋白的提取純化工藝（如目標(biāo)產(chǎn)物去除策略）也各不相同，這些差異直接導(dǎo)致校準(zhǔn)品的組成、對(duì)實(shí)際樣品的代表性及儲(chǔ)存穩(wěn)定性千差萬別。檢測(cè)抗體（尤其是多克隆抗體）需通過免疫動(dòng)物獲得，其特異性與 HCP 覆蓋度受多重因素影響：免疫原的選擇、動(dòng)物個(gè)體免疫應(yīng)答差異、免疫方案設(shè)計(jì)，以及后續(xù)抗體篩選與純化流程，都會(huì)讓不同批次或來源的抗體，在對(duì)不同 HCP 的親和力、對(duì)低豐度蛋白的檢測(cè)靈敏度等識(shí)別譜特性上，形成本質(zhì)區(qū)別。

為何定制化試劑盒是宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留檢測(cè)的優(yōu)先選擇？特定工藝來源的抗原與校準(zhǔn)品更具代表性，是重要原因之一。不同生物制品的上游生產(chǎn)工藝存在差異，比如培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件、收獲時(shí)機(jī)等不同，都會(huì)使產(chǎn)生的 HCP 在蛋白種類、豐度及翻譯修飾上出現(xiàn)區(qū)別，進(jìn)而導(dǎo)致進(jìn)入下游純化工藝的 HCP 類型相應(yīng)改變 —— 尤其是與藥物主成分共同純化的 HCP，會(huì)以優(yōu)勢(shì)蛋白的形式存在于藥物原液或制劑中。HCP 定制化 ELISA 檢測(cè)試劑盒通常選用實(shí)際生產(chǎn)工藝中上游發(fā)酵后的樣品制備抗原與校準(zhǔn)品，這樣制得的校準(zhǔn)品能較充分地體現(xiàn)實(shí)際工藝中的 HCP，有效降低因抗原或校準(zhǔn)品種類不足引發(fā)的漏檢風(fēng)險(xiǎn)，同時(shí)減少定量不準(zhǔn)確的問題。