北京生物制品內(nèi)毒素檢測合規(guī)申報(bào)

來源： 發(fā)布時(shí)間：2025-09-29

內(nèi)毒素檢測重組級(jí)聯(lián)試劑（rCR）與天然鱟試劑在原料、性能和可持續(xù)性上存在本質(zhì)區(qū)別。原料方面，天然鱟試劑依賴鱟血采集，受動(dòng)物資源限制，而 rCR 通過基因工程表達(dá) C、B 因子及凝固酶原，無動(dòng)物源性，供應(yīng)穩(wěn)定。特異性上，天然鱟試劑因含 G 因子，易與 β-D 葡聚糖反應(yīng)產(chǎn)生假陽性，而 rCR 剔除 G 因子，只對(duì)內(nèi)毒素特異性響應(yīng)，從機(jī)制上消除干擾。批間一致性方面，天然鱟試劑受鱟個(gè)體差異影響，批間 CV 值較高；rCR 成分明確且生產(chǎn)工藝標(biāo)準(zhǔn)化，批間差異明顯降低，CV 值≤15%。兩者靈敏度相當(dāng)（0.005EU/mL），但 rCR 無需面臨鱟資源政策限制，更符合動(dòng)物福利趨勢和長期質(zhì)控需求，是天然鱟試劑的理想替代。
在醫(yī)藥、生物制品及醫(yī)療器械等諸多領(lǐng)域，細(xì)菌內(nèi)毒素檢測是保障產(chǎn)品質(zhì)量與安全的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。北京生物制品內(nèi)毒素檢測合規(guī)申報(bào)

北京生物制品內(nèi)毒素檢測合規(guī)申報(bào),內(nèi)毒素檢測

內(nèi)毒素檢測常與熱原檢測混淆，二者既有關(guān)聯(lián)又有區(qū)別：熱原是指所有能引起發(fā)熱的物質(zhì)（包括內(nèi)毒素、病毒、真菌等），通過傳統(tǒng)家兔熱原試驗(yàn)檢測；內(nèi)毒素是熱原的主要成分（占 90% 以上），檢測更具特異性。目前，家兔熱原試驗(yàn)因操作復(fù)雜、動(dòng)物成本高，已逐漸被單核細(xì)胞活化反應(yīng)測定法（MAT）替代，但部分產(chǎn)品（如放射性質(zhì)藥物、血液制品）仍需保留家兔試驗(yàn)作為補(bǔ)充。法規(guī)要求內(nèi)毒素檢測結(jié)果需與熱原風(fēng)險(xiǎn)關(guān)聯(lián)，若內(nèi)毒素檢測合格但臨床出現(xiàn)熱原反應(yīng)，需排查是否存在非內(nèi)毒素類熱原，通過聯(lián)合檢測確保產(chǎn)品安全性。
廣東非動(dòng)物源內(nèi)毒素檢測風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估細(xì)菌內(nèi)毒素檢測中，rCR 對(duì)高蛋白（如單抗、FBS）、細(xì)胞培養(yǎng)上清等特殊樣本適配性好。

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低內(nèi)毒素回收（LER）又稱內(nèi)毒素掩蔽，是指無菌制劑（尤其蛋白類生物制劑）進(jìn)行內(nèi)毒素檢測時(shí)，加標(biāo)內(nèi)毒素的回收率＜50% 的現(xiàn)象，且無法通過稀釋排除，區(qū)別于傳統(tǒng)檢測干擾。LER 會(huì)導(dǎo)致內(nèi)毒素污染被低估，已被全球監(jiān)管機(jī)構(gòu)重點(diǎn)關(guān)注：FDA 2013 年要求生物藥 BLA 申報(bào)時(shí)提交 LER 研究報(bào)告；EMA 2023 年明確含表面活性劑（如吐溫）或螯合劑（如 EDTA）的制劑需提供 LER 數(shù)據(jù)；中國藥典 2025 版 9251 通則也新增 LER 內(nèi)容，與國際接軌。這些要求促使企業(yè)優(yōu)化內(nèi)毒素檢測流程，避免因 LER 導(dǎo)致的檢測偏差，確保藥品安全。

如何準(zhǔn)備樣品進(jìn)行內(nèi)毒素檢測呢？測試前，需要根據(jù)樣品實(shí)際情況進(jìn)行樣本前處理。大多數(shù)樣品只需要稀釋，使用內(nèi)毒素檢測試劑盒進(jìn)行測試即可。如果樣品有蛋白酶干擾并導(dǎo)致假陽性結(jié)果，建議對(duì)樣品稀釋并70°C加熱5-15分鐘進(jìn)行熱滅活處理。如需要，可以對(duì)滅活樣品進(jìn)行進(jìn)一步稀釋后檢測。如果樣品可能含有受β-葡聚糖，建議使用抗增液。β-葡聚糖可能來自酵母和纖維素材料。如果樣品中因含有內(nèi)毒素結(jié)合物而存在抑制，可以嘗試使用分散劑。
含蛋白酶的樣本致假陽性時(shí)，可稀釋后 70℃加熱 5-15min 滅活，再做內(nèi)毒素檢測。

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實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)充分證明，內(nèi)毒素檢測重組級(jí)聯(lián)試劑（rCR）與天然鱟試劑的檢測結(jié)果具有高度等效性，可實(shí)現(xiàn)方法無縫切換。對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)輔料、凍干甲型肝炎疫苗、單抗 A/B 等 8 類代表性樣品的平行檢測顯示，rCR 的檢測平均值為 0.001-0.026EU/mL，天然鱟試劑為 0.002-0.034EU/mL，兩者偏差≤0.003EU/mL。加標(biāo)回收率方面，rCR 為 70%-175.4%，天然鱟試劑為 82.2%-156.6%，均處于 50%-200% 的合格范圍。批內(nèi)精密度上，rCR 的 CV 值為 0.524%-14.716%，天然鱟試劑為 0.908%-12.348%，均滿足法規(guī)對(duì)精密度的要求。這種等效性確保了實(shí)驗(yàn)室在切換至重組試劑時(shí)，歷史數(shù)據(jù)和工藝控制標(biāo)準(zhǔn)的連續(xù)性，降低方法轉(zhuǎn)換風(fēng)險(xiǎn)。
內(nèi)毒素檢測的方法多樣性、多影響因素及實(shí)驗(yàn)干擾，會(huì)導(dǎo)致自檢數(shù)據(jù)與廠家數(shù)據(jù)存在差異。上海抗體藥物內(nèi)毒素檢測抗干擾方案

內(nèi)毒素檢測復(fù)孔 CV＞15%，需校準(zhǔn)移液槍，規(guī)范加樣，排查耗材污染。北京生物制品內(nèi)毒素檢測合規(guī)申報(bào)

隨著動(dòng)物保護(hù)理念和法規(guī)要求升級(jí)，重組因子C法（rFC法）作為 LAL 法的替代技術(shù)逐漸普及。重組 C 因子是以基因重組的方式表達(dá)的 LAL 試劑中的 C 因子，C 因子被內(nèi)毒素活化后切割熒光底物產(chǎn)生游離熒光基團(tuán)，通過檢測熒光信號(hào)可以反應(yīng)活化后的蛋白酶活性，并由此可以推算出內(nèi)毒素的含量。與傳統(tǒng) LAL 法相比，rFC 法無需依賴鱟血資源，避免了天然 LAL 試劑批間差異大、易受 β- 葡聚糖干擾等問題，且反應(yīng)特異性更強(qiáng)。目前，《美國藥典》、《歐洲藥典》等法規(guī)已收錄 rFC 法，歐盟更推薦其用于疫苗等高風(fēng)險(xiǎn)產(chǎn)品檢測，在保證檢測準(zhǔn)確性的同時(shí)，符合動(dòng)物福利和可持續(xù)發(fā)展要求。
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