上海合規(guī)性內(nèi)毒素檢測(cè)技術(shù)升級(jí)

內(nèi)毒素檢測(cè)中，樣品中的蛋白質(zhì)或酶的修飾作用易破壞鱟試劑的反應(yīng)體系，導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果失真。鱟試劑檢測(cè)內(nèi)毒素的本質(zhì)是一系列絲氨酸蛋白酶的酶促放大過程，若樣品中存在氧化劑、抗氧化劑、蛋白水解劑或?qū)Ｒ皇Щ顒?，?huì)直接滅活反應(yīng)所需的酶；而乙醇、苯酚等物質(zhì)則會(huì)導(dǎo)致蛋白質(zhì)變性，同樣抑制反應(yīng)進(jìn)程。例如，某些生物制品中含有的蛋白水解酶，可能提前降解鱟試劑中的蛋白酶，使內(nèi)毒素?zé)o法被正常檢測(cè)。為消除這類干擾，需優(yōu)先限制樣品中抑制物的含量：可采用內(nèi)毒素檢查用水稀釋樣品，降低抑制物濃度；對(duì)耐熱的抑制物（如部分蛋白水解酶），可通過加熱滅活處理（如 56℃孵育 30 分鐘）破壞其活性；若樣品基質(zhì)復(fù)雜，還可使用超濾技術(shù)分離內(nèi)毒素與干擾蛋白質(zhì)，避免修飾作用對(duì)酶促反應(yīng)的影響，保障內(nèi)毒素檢測(cè)結(jié)果的可靠性。

SHENTEK®凝膠法鱟試劑憑借多維度優(yōu)勢(shì)，為細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)提供高效解決方案： 法規(guī)契合度上，嚴(yán)格遵循中國(guó)藥典（ChP）、美國(guó)藥典（USP）、歐洲藥典（EP）及日本藥典（JP）的統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)，確保檢測(cè)結(jié)果滿足全球藥品監(jiān)管要求，為藥品研發(fā)、生產(chǎn)及出口提供合規(guī)支撐； 抗干擾性能上，配套申科特異性抗增液，可針對(duì)性抑制特殊樣品（如中藥注射劑、生物制品）的非特異性反應(yīng)，突破復(fù)雜基質(zhì)對(duì)檢測(cè)準(zhǔn)確性的干擾，保障數(shù)據(jù)可靠； 性能適配性上，提供 0.03、0.06、0.125、0.25、0.5 EU/mL 多檔靈敏度選項(xiàng)，覆蓋從高靈敏到常規(guī)檢測(cè)的多樣化需求；操作易用性上，兼容恒溫儀、水浴鍋、恒溫箱等基礎(chǔ)設(shè)備，無需復(fù)雜儀器與軟件，降低實(shí)驗(yàn)室硬件門檻，適配不同規(guī)模企業(yè)； 穩(wěn)定性保障上，試劑采用凍干粉劑型，2~8℃ 儲(chǔ)存條件下有效期長(zhǎng)達(dá) 2 年，減少倉儲(chǔ)與使用中的活性損耗，提升批次間一致性； 適用領(lǐng)域上，覆蓋生物制品、血液制品、化學(xué)藥品等全品類樣本，從工藝監(jiān)控到成品放行，全流程支撐藥品安全質(zhì)控。該試劑通過法規(guī)、性能、操作、穩(wěn)定與適用的協(xié)同優(yōu)化，構(gòu)建起高效、靈活的內(nèi)毒素檢測(cè)體系，助力行業(yè)提升質(zhì)量管控水平。

檢測(cè)細(xì)菌內(nèi)毒素的堂試劑方法，是一個(gè)生物反應(yīng)過程，受到很多因素的干擾。在一個(gè)供試品的檢測(cè)方法固定下來之前，為了得到準(zhǔn)確的結(jié)果，必須要了解供試品與鱟試劑之間的相互關(guān)系。供試品中的成分往往非常復(fù)雜，而且會(huì)干擾試驗(yàn)檢測(cè)系統(tǒng)的功能。很多干擾的機(jī)理，并不是非常清楚。但是業(yè)界比較能夠接受的理論是，如果供試品中某些因子影響了鱟試劑中蛋白的表達(dá)功能，則被認(rèn)為是干擾作用（Inhibition/Enhancement，V/E）。干擾作用產(chǎn)生的因素較多，一般包括試劑因素（鱟試劑、內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品）供試品因素（pH值、溫度、離子強(qiáng)度、濃度、水溶性、黏度、可發(fā)生鱟試劑反應(yīng)的非內(nèi)毒素雜質(zhì)）和實(shí)驗(yàn)因素（試驗(yàn)器皿、細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水、鱟試劑抗干擾能力）等。

在進(jìn)行內(nèi)毒素檢測(cè)時(shí)，干擾試驗(yàn)又叫增強(qiáng)或抑制試驗(yàn)，主要目的是確證檢測(cè)內(nèi)毒素的方法是否受樣品干擾。在建立細(xì)菌內(nèi)毒素檢查方法中，驗(yàn)證試驗(yàn)前，要去除樣品可能含有的內(nèi)毒素，以確保建立方法的準(zhǔn)確可靠。藥典規(guī)定：①當(dāng)進(jìn)行新藥的內(nèi)毒素檢查試驗(yàn)前，或無內(nèi)毒素檢查項(xiàng)品種建立內(nèi)毒素檢查法時(shí)，需進(jìn)行干擾試驗(yàn)；②當(dāng)鱟試劑、供試品的配方、生產(chǎn)工藝改變，或試驗(yàn)環(huán)境下發(fā)生了任何有可能影響試驗(yàn)結(jié)果的變化時(shí)，需重新進(jìn)行干擾試驗(yàn)。生產(chǎn)廠家常發(fā)生的一些微小變更，會(huì)影響到評(píng)估結(jié)果，進(jìn)而影響到供試品對(duì)鱟試劑的干擾試驗(yàn)。因此，生產(chǎn)廠家應(yīng)制定一個(gè)重復(fù)進(jìn)行干擾試驗(yàn)的周期，并進(jìn)行跟蹤和記錄。

湖州申科重組級(jí)聯(lián)試劑（rCR）在關(guān)鍵性能指標(biāo)上表現(xiàn)優(yōu)異，滿足內(nèi)毒素檢測(cè)的嚴(yán)苛要求。靈敏度方面，其檢測(cè)范圍覆蓋 0.005-5EU/mL，可準(zhǔn)確捕捉微量?jī)?nèi)毒素殘留，適配基因治療、血液制品等低限值需求場(chǎng)景。標(biāo)準(zhǔn)曲線線性良好，R2≥0.990，確保定量結(jié)果的準(zhǔn)確性。反應(yīng)效率上，rCR 只需 60 分鐘即可完成檢測(cè)，較部分競(jìng)品的 90-120 分鐘大幅縮短，提升檢測(cè)周轉(zhuǎn)效率?？垢蓴_性實(shí)驗(yàn)顯示，對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)輔料、300g/L 葡萄糖、FBS 血清、單抗等 8 類復(fù)雜樣品，rCR 在較低稀釋倍數(shù)下加標(biāo)回收率可達(dá) 70%-175.4%，優(yōu)于重組 C 因子法。批間一致性方面，多批次試劑檢測(cè)同一樣品的 CV 值≤15%，穩(wěn)定性遠(yuǎn)超行業(yè)平均水平，為長(zhǎng)期質(zhì)控提供可靠保障。

內(nèi)毒素檢測(cè)鱟試劑的反應(yīng)受pH的干擾。在進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，要調(diào)節(jié)被測(cè)溶液的pH值，使鱟試劑與供試品溶液的混合溶液pH值落在鱟試劑指定的使用pH范圍內(nèi)（一般鱟試劑作用pH值在6.0~8.0范圍內(nèi))。用于調(diào)節(jié)pH值的試液或溶液（酸或堿)，可采用BET用水配制，并將溶液在無熱原容器中儲(chǔ)存；必須對(duì)試液或溶液進(jìn)行驗(yàn)證，以證明不含可檢出的內(nèi)毒素并且無干擾因素。調(diào)節(jié)pH試劑（酸或堿）的添加量，不應(yīng)該超過供試品的1092。如果超過10%，則在進(jìn)行計(jì)算時(shí)，將DH試劑的添加量的系數(shù)計(jì)算進(jìn)去。