PG13宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留檢測(cè)試劑盒

來(lái)源： 發(fā)布時(shí)間：2025-12-03

美國(guó)藥典 USP 通則 <1132.1>《質(zhì)譜法測(cè)定生物藥中殘留宿主細(xì)胞蛋白》（Residual Host Cell Protein Measurement in Biopharmaceuticals by Mass Spectrometry），主要內(nèi)容是介紹 LC-MS 技術(shù)在宿主細(xì)胞殘留蛋白檢測(cè)中的應(yīng)用。該通則圍繞樣品制備、質(zhì)譜測(cè)試條件建立、數(shù)據(jù)分析、質(zhì)譜方法驗(yàn)證等維度，詳細(xì)說(shuō)明質(zhì)譜技術(shù)應(yīng)用于 HCPs 檢測(cè)的優(yōu)勢(shì)及需注意的事項(xiàng)。作為先進(jìn)的分析技術(shù)平臺(tái)，質(zhì)譜技術(shù)在 HCPs 分析中的應(yīng)用，無(wú)論是單獨(dú)使用，還是與 ELISA 及其他分析方法聯(lián)合使用，都能幫助生產(chǎn)企業(yè)在產(chǎn)品全生命周期中更清晰地理解并建立 HCPs 檢測(cè)方法，進(jìn)而保障產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定。
總蛋白檢測(cè)差異是 HCP 免疫檢測(cè)結(jié)果不同的原因之一。PG13宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留檢測(cè)試劑盒

PG13宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留檢測(cè)試劑盒,宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留檢測(cè)

宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留監(jiān)測(cè)是生物藥物生產(chǎn)中的關(guān)鍵質(zhì)量屬性（Critical Quality Attribute, CQA），需在藥物開(kāi)發(fā)與生產(chǎn)階段對(duì) HCP 的存在實(shí)施嚴(yán)格監(jiān)控、管理及記錄。隨著生產(chǎn)流程推進(jìn)，生物制品目標(biāo)蛋白純度逐步提升，HCP 含量則相應(yīng)持續(xù)下降，這導(dǎo)致對(duì)單抗、融合蛋白等富含目標(biāo)蛋白的下游工藝樣品進(jìn)行 HCP 分析監(jiān)測(cè)時(shí)，難度明顯增加。在此背景下，高效的 HCP 富集材料與技術(shù)顯得尤為重要。SHENTEK®AbunProteoX 是基于磁珠構(gòu)建的親和配體，能高效識(shí)別并結(jié)合目標(biāo)蛋白；借助磁性納米顆粒的獨(dú)特特性，它可快速高效捕獲 HCP，大幅提升檢測(cè)靈敏度。此外，該親和配體的普遍適用性，讓 AbunProteoX 處理多種生物樣本時(shí)表現(xiàn)優(yōu)異，可確保樣品中存在高濃度目標(biāo)蛋白時(shí)，對(duì)低濃度 HCP 的質(zhì)譜、電泳等檢測(cè)分析具備準(zhǔn)確性與可靠性。
北京畢赤酵母宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留檢測(cè)宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留檢測(cè)對(duì)保障生物制品安全性和有效性至關(guān)重要。

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LC-MS/MS 作為成熟穩(wěn)定的蛋白質(zhì)組學(xué)分析技術(shù)，依托超高分辨率與準(zhǔn)確度，在生物分析領(lǐng)域中占據(jù)關(guān)鍵地位。該技術(shù)不僅可對(duì)低含量宿主細(xì)胞殘留蛋白（HCP）開(kāi)展定性檢測(cè)，還能通過(guò)構(gòu)建專屬蛋白質(zhì)譜庫(kù)準(zhǔn)確鑒定 HCP 的具體種類，為深度解析殘留蛋白組成提供重要支撐。不過(guò)該技術(shù)應(yīng)用中面臨的主要挑戰(zhàn)，是如何優(yōu)化 LC-MS 方法以契合 GMP 規(guī)范對(duì)產(chǎn)品放行檢測(cè)的嚴(yán)苛要求。在質(zhì)譜檢測(cè)環(huán)節(jié)，引入表征明確的內(nèi)標(biāo)與外標(biāo)蛋白，可準(zhǔn)確分析 HCPs 的整體組成，并有效識(shí)別其中具有潛在風(fēng)險(xiǎn)的高風(fēng)險(xiǎn)蛋白。這一技術(shù)手段不僅為開(kāi)發(fā)產(chǎn)品專屬 HCP ELISA 檢測(cè)方法提供有力數(shù)據(jù)支撐，還可助力工藝優(yōu)化升級(jí)，加快推進(jìn)生物制品從研發(fā)到獲批上市的全流程進(jìn)度。

法規(guī)推薦的抗體覆蓋率評(píng)估方法主要分為兩類：一類是傳統(tǒng) 2D-WB 法，另一類是基于抗體親和的免疫捕獲類方法。傳統(tǒng) 2D-WB 法存在諸多不足，如需對(duì)蛋白進(jìn)行變性處理、樣品需前處理（會(huì)破壞蛋白天然表位）、轉(zhuǎn)膜效率較低、易出現(xiàn)非特異性反應(yīng)等，因此難以準(zhǔn)確反映真實(shí)的覆蓋率水平。湖州申科自主研發(fā)了免疫磁珠捕獲分離技術(shù)（immunomagnetic beads separation，IMBS），該技術(shù)借助免疫磁珠的半液態(tài)特性，能在懸浮狀態(tài)下與 HCP 樣本充分混勻并結(jié)合；整個(gè)過(guò)程中蛋白無(wú)需變性，且結(jié)合方式與 ELISA 檢測(cè)條件相近，從而可獲得更貼近真實(shí)情況的覆蓋率結(jié)果。
實(shí)驗(yàn)過(guò)程質(zhì)控的持續(xù)改進(jìn)與評(píng)估，需結(jié)合方法間差異納入抗體覆蓋率分析框架。

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畢赤酵母（Pichia pastoris）作為第二代酵母表達(dá)系統(tǒng)的代表性菌株，已被美國(guó) FDA 認(rèn)定為 GRAS（一般認(rèn)為安全）級(jí)微生物，具備表達(dá)水平高、產(chǎn)物活性優(yōu)、培養(yǎng)成本低、易于擴(kuò)大至工業(yè)化生產(chǎn)等優(yōu)勢(shì)。在生物制藥領(lǐng)域，酶制劑、胰島素、表皮生長(zhǎng)因子、膠原蛋白等多款生物制劑，已借助畢赤酵母系統(tǒng)實(shí)現(xiàn)商業(yè)化生產(chǎn)。和其他產(chǎn)品雜質(zhì)類似，畢赤酵母宿主殘留蛋白（HCP）可能對(duì)生物制品的安全性與有效性造成不利影響，故而在生產(chǎn)監(jiān)測(cè)、產(chǎn)品放行等環(huán)節(jié)中，需對(duì)其開(kāi)展定量研究并實(shí)施嚴(yán)格控制。SHENTEK® 畢赤酵母 HCP 殘留檢測(cè)試劑盒（一步酶聯(lián)免疫吸附法），是湖州申科生物自主研發(fā)的畢赤酵母 HCP 通用檢測(cè)試劑盒，不僅擁有完全自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)，還實(shí)現(xiàn)了關(guān)鍵試劑的全國(guó)產(chǎn)化。該試劑盒適用于對(duì) GS115、X33 等畢赤酵母菌株生產(chǎn)的生物制品中宿主殘留蛋白進(jìn)行定量檢測(cè)，具有操作步驟少、檢測(cè)速度快、專一性強(qiáng)、性能穩(wěn)定可靠的特點(diǎn)。
通用型試劑盒為市售廣譜方案，使用前需嚴(yán)格評(píng)估抗體對(duì)特定 HCP 的覆蓋率。成都工藝特異型宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留檢測(cè)免疫策略

宿主細(xì)胞蛋白殘留檢測(cè)試劑盒的開(kāi)發(fā)不是一個(gè)簡(jiǎn)單的過(guò)程，是一個(gè)對(duì)平臺(tái)、技術(shù)均有很高要求的整體流程。PG13宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留檢測(cè)試劑盒

湖州申科運(yùn)用免疫磁珠分離技術(shù)（IMBS），搭配 2D 電泳或 LC-MS 技術(shù)評(píng)估抗體覆蓋率。IMBS 的主要流程涵蓋：多克隆抗體與磁珠的偶聯(lián)反應(yīng)、磁珠未結(jié)合位點(diǎn)的封閉處理、HCP 樣本與結(jié)合抗體的磁珠共同孵育反應(yīng)。該過(guò)程中，HCP 抗體會(huì)結(jié)合可識(shí)別的 HCP，未被識(shí)別的 HCP 則通過(guò)后續(xù)洗滌步驟去除，隨后借助低 pH 等洗脫條件，收集抗體捕獲的 HCP。此方法具備 AAE（抗體親和提取，Antibody Affinity Extraction）免疫層析柱分離的全部?jī)?yōu)勢(shì)，同時(shí)免疫磁珠可在懸浮狀態(tài)下與 HCP 樣品充分混勻并結(jié)合，HCP 結(jié)合效果更優(yōu)；且依托磁珠吸附，能減少 HCP 與填料的非特異性吸附，進(jìn)一步提升實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確性。
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