浙江工藝特異型宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測抗體覆蓋率驗證

來源： 發(fā)布時間：2025-10-15

中國倉鼠卵巢細胞（Chinese Hamster Ovary，CHO）是生物制品生產(chǎn)中常用的動物細胞表達系統(tǒng)，廣泛應用于抗體、重組蛋白、疫苗等產(chǎn)品的制備。采用 CHO 細胞作為宿主進行生產(chǎn)時，難免會引入宿主細胞蛋白（HCP）雜質(zhì)；即便 HCP 殘留量較低，仍可能存在免疫原性，還會帶來降低產(chǎn)品蛋白穩(wěn)定性等風險。因此，需對生物制品中的 HCP 殘留進行定量分析，從而保障純化工藝的一致性與終產(chǎn)品的安全性。SHENTEK®CHO 宿主細胞蛋白（HCP ）殘留檢測試劑盒實現(xiàn)了關(guān)鍵試劑的全國產(chǎn)化，其通過 CHO 細胞（K1&S）補料分批培養(yǎng)工藝制備 HCPs，再以此免疫綿羊獲取抗體，適用于檢測 CHO 細胞系表達的生物制品（如單抗、重組蛋白、疫苗等）中的 HCP 殘留。該試劑盒具有操作步驟少、檢測速度快、專一性強、性能穩(wěn)定可靠的特點。
湖州申科宿主細胞蛋白殘留檢測試劑盒開發(fā)遵循 ISO 13485 體系，滿足法規(guī)申報要求。浙江工藝特異型宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測抗體覆蓋率驗證

浙江工藝特異型宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測抗體覆蓋率驗證,宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測

HCP 是宿主細胞（多為哺乳動物細胞或微生物）所產(chǎn)生的蛋白質(zhì)，這類蛋白質(zhì)存在潛在風險，可能對藥物的安全性與有效性產(chǎn)生影響。因此，宿主細胞蛋白（HCP ）殘留量成為生物藥物的關(guān)鍵質(zhì)量屬性，需在藥物開發(fā)與生產(chǎn)階段，對 HCP 的存在進行嚴格監(jiān)控、管理并做好記錄。隨著生產(chǎn)流程推進，生物制品純度逐步提升，但 HCP 的總量與種類也在不斷減少，這無疑增加了 HCP 分析與監(jiān)測工作的難度。在此背景下，開發(fā)高效的 HCP 富集材料及技術(shù)便顯得尤為重要。低豐度宿主殘留蛋白富集試劑盒，專為富集生物制品（如單抗、融合蛋白等）中的 HCP 并去除高豐度蛋白而設(shè)計，其通過磁珠法構(gòu)建多樣化且復雜的親和配體庫，以實現(xiàn)對目標蛋白的高效識別與結(jié)合。該試劑盒的設(shè)計不僅覆蓋傳統(tǒng)單一蛋白，還可適配融合蛋白、單克隆抗體等多種生物樣本類型，體現(xiàn)出較強的適用性與靈活性。成都ELISA法宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測湖州申科擁有自主搭建的多克隆抗體庫（CHO\E.coli\293T細胞等），提供對應覆蓋率驗證服務。

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宿主細胞蛋白（HCP）多與細胞關(guān)鍵功能相關(guān)，例如細胞增殖、基因轉(zhuǎn)錄、蛋白合成修飾、細胞存活及凋亡等，在生產(chǎn)工藝中會因細胞分泌、死亡或裂解而釋放。生產(chǎn)過程里，有三大因素主要影響 HCP 的組成與豐度：①宿主細胞基因組調(diào)控及培養(yǎng)工藝：特定工藝下，潛在 HCP 數(shù)量可能極多，且并非所有基因都會表達，部分基因的表達具有時間和條件特異性；像大腸桿菌約含 4300 個基因，不同工藝產(chǎn)物會經(jīng)歷獨特的翻譯后修飾，這增加了 HCP 的總數(shù)與生化復雜性。研究顯示，大腸桿菌表達的蛋白間存在數(shù)量差異，這種差異可能是對環(huán)境條件的適應性反應，但 85-90% 具有潛在免疫原性的 HCP 在不同發(fā)酵過程中均會出現(xiàn)。②產(chǎn)物表達方式：宿主細胞與外源基因、載體及輔助成分構(gòu)成的體系，可實現(xiàn)穩(wěn)定、瞬時及誘導表達；以大腸桿菌為例，常見表達形式包括胞內(nèi)表達、分泌表達、可溶性表達、不溶性包涵體形式，還有融合與非融合表達。③純化步驟及產(chǎn)品自身特性的影響：純化過程中能去除 99% 以上的 HCP，但仍有少量殘留 HCP 留在產(chǎn)品中，這些殘留 HCP 可能與產(chǎn)品結(jié)合，隨產(chǎn)品一同被純化。

美國藥典 USP 通則 <1132.1>《質(zhì)譜法測定生物藥中殘留宿主細胞蛋白》（Residual Host Cell Protein Measurement in Biopharmaceuticals by Mass Spectrometry），主要內(nèi)容是介紹 LC-MS 技術(shù)在宿主細胞殘留蛋白檢測中的應用。該通則圍繞樣品制備、質(zhì)譜測試條件建立、數(shù)據(jù)分析、質(zhì)譜方法驗證等維度，詳細說明質(zhì)譜技術(shù)應用于 HCPs 檢測的優(yōu)勢及需注意的事項。作為先進的分析技術(shù)平臺，質(zhì)譜技術(shù)在 HCPs 分析中的應用，無論是單獨使用，還是與 ELISA 及其他分析方法聯(lián)合使用，都能幫助生產(chǎn)企業(yè)在產(chǎn)品全生命周期中更清晰地理解并建立 HCPs 檢測方法，進而保障產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定。
工藝特異型、平臺型、通用型HCP檢測試劑盒各有特點，滿足不同需求。

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由于宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測試劑盒關(guān)鍵組分（校準品、檢測抗體）存在固有且明顯的變異度，不同試劑盒對同一樣本的檢測結(jié)果，不僅可能在數(shù)值上出現(xiàn)較大差距，在特定 HCP（如低豐度或高風險 HCP）的檢出能力上，也可能存在明顯偏差，這對生物制品 HCP 殘留的準確管控構(gòu)成挑戰(zhàn)。因此，為確保檢測結(jié)果能真實反映自身產(chǎn)品的 HCP 殘留狀況，企業(yè)必須結(jié)合自身產(chǎn)品特性（如宿主細胞類型、目標產(chǎn)物屬性）與生產(chǎn)工藝特點，對不同品牌、不同類型的試劑盒開展系統(tǒng)且詳細的平行比對實驗。同時，還需進行針對性的適用性評估，驗證試劑盒對自身產(chǎn)品的檢測準確性、特異性及穩(wěn)定性，再篩選出與自身產(chǎn)品匹配度適合的檢測方案，為生物制品的 HCP 殘留控制提供可靠技術(shù)支撐，保障產(chǎn)品質(zhì)量與用藥安全。
湖州申科搭建高分辨蛋白質(zhì)譜技術(shù)平臺，結(jié)合IMBS技術(shù)，推出了IMBS-MS抗體覆蓋率評估方法。江蘇細胞基因治療產(chǎn)品用宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測

基于HCP的復雜性，檢測中常遇到中間品，尤其是原液樣品無法達到稀釋線性，可能與樣品基質(zhì)的干擾有關(guān)。浙江工藝特異型宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測抗體覆蓋率驗證

畢赤酵母（Pichia pastoris）作為第二代酵母表達系統(tǒng)的代表性菌株，已被美國 FDA 認定為 GRAS（一般認為安全）級微生物，具備表達水平高、產(chǎn)物活性優(yōu)、培養(yǎng)成本低、易于擴大至工業(yè)化生產(chǎn)等優(yōu)勢。在生物制藥領(lǐng)域，酶制劑、胰島素、表皮生長因子、膠原蛋白等多款生物制劑，已借助畢赤酵母系統(tǒng)實現(xiàn)商業(yè)化生產(chǎn)。和其他產(chǎn)品雜質(zhì)類似，畢赤酵母宿主殘留蛋白（HCP）可能對生物制品的安全性與有效性造成不利影響，故而在生產(chǎn)監(jiān)測、產(chǎn)品放行等環(huán)節(jié)中，需對其開展定量研究并實施嚴格控制。SHENTEK® 畢赤酵母 HCP 殘留檢測試劑盒（一步酶聯(lián)免疫吸附法），是湖州申科生物自主研發(fā)的畢赤酵母 HCP 通用檢測試劑盒，不僅擁有完全自主知識產(chǎn)權(quán)，還實現(xiàn)了關(guān)鍵試劑的全國產(chǎn)化。該試劑盒適用于對 GS115、X33 等畢赤酵母菌株生產(chǎn)的生物制品中宿主殘留蛋白進行定量檢測，具有操作步驟少、檢測速度快、專一性強、性能穩(wěn)定可靠的特點。
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