原料藥內毒素檢測技術升級

來源： 發(fā)布時間：2025-10-16

在開展內毒素檢測時，樣品的 pH 值與二價離子（Mg2?、Ca2?）水平是影響鱟試劑酶促反應的關鍵因素，直接關系檢測結果的準確性。鱟試劑檢測內毒素依賴絲氨酸蛋白酶的級聯(lián)放大反應，該反應的合適 pH 值范圍為 6.0-8.0，若樣品過酸或過堿，會快速降低酶活性，甚至導致酶徹底失活，進而出現(xiàn)內毒素檢測假陰性。針對這一問題，可使用 0.1N 或更低濃度的 HCl/NaOH 溶液，將樣品 pH 值準確調節(jié)至適宜區(qū)間，為反應提供穩(wěn)定環(huán)境。同時，二價離子是反應必需的輔助因子：Mg2?是內毒素活化鱟試劑的關鍵，缺乏會直接阻斷反應啟動；Ca2?雖參與酶促反應，但濃度過高會反向抑制反應效率。若樣品中含有肝素鈉、EDTA、檸檬酸鈉等螯合劑，會與二價離子結合導致其濃度不足，此時可通過內毒素檢查用水稀釋樣品降低螯合劑濃度，或添加特定二價離子試劑補充，但需嚴格控制離子濃度，避免過度增強反應引發(fā)誤差，確保內毒素檢測能真實反映樣品中的內毒素殘留量。
內毒素檢測需關注制劑成分，螯合劑和表面活性劑可能誘發(fā)“低內毒素回收（LER）”。原料藥內毒素檢測技術升級

原料藥內毒素檢測技術升級,內毒素檢測

醫(yī)療器械（如輸液器、注射器、植入式設備）若攜帶內毒素，可能通過血液、組織接觸引發(fā)異常反應或炎癥反應。其檢測需遵循 “模擬臨床使用” 原則：采用浸提液（如 0.9% 氯化鈉溶液或注射用水）在 37℃±1℃下浸提器械表面內毒素，再通過 LAL 或 rFC 法檢測浸提液。不同器械的內毒素限值差異明顯：一次性輸液器需≤0.5 EU/device，植入式心臟瓣膜則要求更嚴格（≤0.06 EU/device）。檢測時需注意器械材質對浸提效率的影響，如塑料類器械可能吸附內毒素，需優(yōu)化浸提時間（通?！? 小時）或采用超聲輔助提取，確保殘留內毒素被充分檢出。
廣東醫(yī)療器械內毒素檢測外源性熱原含細菌內毒素、脂磷壁酸、酵母多糖等，單核細胞活化反應檢查法可檢出全部熱原。

原料藥內毒素檢測技術升級,內毒素檢測

內毒素檢測重組級聯(lián)試劑（rCR）與天然鱟試劑在原料、性能和可持續(xù)性上存在本質區(qū)別。原料方面，天然鱟試劑依賴鱟血采集，受動物資源限制，而 rCR 通過基因工程表達 C、B 因子及凝固酶原，無動物源性，供應穩(wěn)定。特異性上，天然鱟試劑因含 G 因子，易與 β-D 葡聚糖反應產生假陽性，而 rCR 剔除 G 因子，只對內毒素特異性響應，從機制上消除干擾。批間一致性方面，天然鱟試劑受鱟個體差異影響，批間 CV 值較高；rCR 成分明確且生產工藝標準化，批間差異明顯降低，CV 值≤15%。兩者靈敏度相當（0.005EU/mL），但 rCR 無需面臨鱟資源政策限制，更符合動物福利趨勢和長期質控需求，是天然鱟試劑的理想替代。

在內毒素檢測的技術體系中，凝膠法與動態(tài)顯色法基于不同原理與特性，形成互補應用格局。凝膠法依托鱟試劑與內毒素的凝集反應，實現(xiàn)定性或半定量檢測，其靈敏度覆蓋 0.03EU/ml、0.06EU/ml 等多梯度，60 分鐘即可完成反應；檢測結果依賴肉眼觀察（180° 倒轉判讀凝膠形成），數(shù)據(jù)需手工記錄，配套 內毒素凝膠法測定儀（恒溫儀） 即可開展，雖自動化程度有限，但操作簡潔，適用于生產環(huán)節(jié)的快速初篩。與之相比，動態(tài)顯色法通過監(jiān)測反應混合物吸光度或透光率的變化（如達預設檢測值的反應時間、信號增速）實現(xiàn) 定量檢測 ，靈敏度拓展至 5-0.005EU/ml ，60-90 分鐘反應時長雖略長，卻可借助酶標儀或全自動內毒素檢測分析儀完成全流程自動化操作—軟件實時采集數(shù)據(jù)，契合藥品生產質量管理規(guī)范（GMP）對數(shù)據(jù)追溯與精度的要求。二者各有側重：凝膠法以 “快速定性” 服務基礎防控，動態(tài)顯色法憑 “準確定量 + 自動化” 支撐嚴苛質控，共同為內毒素檢測提供靈活適配的技術路徑。
內毒素檢測方法多樣，影響因素及實驗干擾較多，包括實驗操作步驟、樣品處理等方面。

原料藥內毒素檢測技術升級,內毒素檢測

當實驗室更換內毒素檢測方法或更換試劑供應商時，需進行方法比對與橋接驗證。比對實驗需選取至少 3批代表性樣品，分別用新舊方法檢測，計算結果相關性（如相關系數(shù) R2≥0.95）和偏差（≤20%）。橋接驗證還需評估新方法的特異性、靈敏度是否與舊方法一致，如確認對高風險樣品（如含 β- 葡聚糖的樣品）的抗干擾能力相當。若方法變更涉及法規(guī)申報產品，需將驗證數(shù)據(jù)納入申報資料，證明變更后方法仍能有效控制內毒素風險，符合 FDA、NMPA 等監(jiān)管機構對方法變更的合規(guī)性要求。
重組級聯(lián)試劑（rCR）推動內毒素檢測向可持續(xù)發(fā)展轉型，兼顧生態(tài)保護與藥品安全質控。上海合規(guī)性內毒素檢測合規(guī)申報

內毒素檢測凝膠法實驗需西林瓶等耗材，確保無外源內毒素污染檢測。原料藥內毒素檢測技術升級

內毒素檢測重組級聯(lián)試劑（rCR）在方法橋接方面具有明顯優(yōu)勢，可大幅度降低實驗室的轉換成本。在設備兼容性上，rCR 無需額外采購新設備，完全適配天然鱟動態(tài)顯色法現(xiàn)用的酶標儀（如 Molecular Devices、Tecan sunrise、Thermo MultiSkan ET 等品牌），支持 405nm 波長動態(tài)讀數(shù)和 37℃恒溫孵育。操作流程上，rCR 的樣品處理、試劑混合、加樣孵育等步驟與天然鱟試劑一致，實驗室無需重新培訓操作人員或修改 SOP。顯色系統(tǒng)方面，rCR 沿用與天然試劑相同的 PNA 顯色底物，通過黃色信號變化定量，檢測原理和數(shù)據(jù)分析方法保持不變。這種高度兼容性使實驗室能快速完成方法驗證和切換，加速重組試劑的合規(guī)應用進程。
原料藥內毒素檢測技術升級