上海疫苗內(nèi)毒素檢測風(fēng)險評估

來源： 發(fā)布時間：2025-10-31

內(nèi)毒素檢測鱟試劑的反應(yīng)受pH的干擾。在進(jìn)行檢測時，要調(diào)節(jié)被測溶液的pH值，使鱟試劑與供試品溶液的混合溶液pH值落在鱟試劑指定的使用pH范圍內(nèi)（一般鱟試劑作用pH值在6.0~8.0范圍內(nèi))。用于調(diào)節(jié)pH值的試液或溶液（酸或堿)，可采用BET用水配制，并將溶液在無熱原容器中儲存；必須對試液或溶液進(jìn)行驗證，以證明不含可檢出的內(nèi)毒素并且無干擾因素。調(diào)節(jié)pH試劑（酸或堿）的添加量，不應(yīng)該超過供試品的1092。如果超過10%，則在進(jìn)行計算時，將DH試劑的添加量的系數(shù)計算進(jìn)去。
動態(tài)顯色法鱟試劑監(jiān)測吸光度變化定量內(nèi)毒素，抗干擾強，適配復(fù)雜基質(zhì)樣品檢測。上海疫苗內(nèi)毒素檢測風(fēng)險評估

上海疫苗內(nèi)毒素檢測風(fēng)險評估,內(nèi)毒素檢測

在開展內(nèi)毒素檢測時，樣品的 pH 值與二價離子（Mg2?、Ca2?）水平是影響鱟試劑酶促反應(yīng)的關(guān)鍵因素，直接關(guān)系檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。鱟試劑檢測內(nèi)毒素依賴絲氨酸蛋白酶的級聯(lián)放大反應(yīng)，該反應(yīng)的合適 pH 值范圍為 6.0-8.0，若樣品過酸或過堿，會快速降低酶活性，甚至導(dǎo)致酶徹底失活，進(jìn)而出現(xiàn)內(nèi)毒素檢測假陰性。針對這一問題，可使用 0.1N 或更低濃度的 HCl/NaOH 溶液，將樣品 pH 值準(zhǔn)確調(diào)節(jié)至適宜區(qū)間，為反應(yīng)提供穩(wěn)定環(huán)境。同時，二價離子是反應(yīng)必需的輔助因子：Mg2?是內(nèi)毒素活化鱟試劑的關(guān)鍵，缺乏會直接阻斷反應(yīng)啟動；Ca2?雖參與酶促反應(yīng)，但濃度過高會反向抑制反應(yīng)效率。若樣品中含有肝素鈉、EDTA、檸檬酸鈉等螯合劑，會與二價離子結(jié)合導(dǎo)致其濃度不足，此時可通過內(nèi)毒素檢查用水稀釋樣品降低螯合劑濃度，或添加特定二價離子試劑補充，但需嚴(yán)格控制離子濃度，避免過度增強反應(yīng)引發(fā)誤差，確保內(nèi)毒素檢測能真實反映樣品中的內(nèi)毒素殘留量。
江蘇非動物源內(nèi)毒素檢測操作步驟內(nèi)毒素檢測凝膠法實驗需西林瓶等耗材，確保無外源內(nèi)毒素污染檢測。

上海疫苗內(nèi)毒素檢測風(fēng)險評估,內(nèi)毒素檢測

SHENTEK®重組級聯(lián)試劑為內(nèi)毒素檢測高效解決方案。法規(guī)層面，符合美國藥典（USP）、歐洲藥典（EP）及日本藥典（JP）要求，滿足國際標(biāo)準(zhǔn)檢測需求?？垢蓴_性強，與天然鱟具有相同反應(yīng)機制，檢測結(jié)果等效，適配復(fù)雜樣本場景。特異性表現(xiàn)突出，不含 G 因子，避免與 β - D 葡聚糖反應(yīng)產(chǎn)生假陽性，保障結(jié)果可靠。檢測靈敏度高，線性范圍達(dá) 0.005 - 5EU/mL ，可準(zhǔn)確捕捉低濃度內(nèi)毒素。反應(yīng)快速，60分鐘內(nèi)即可完成檢測，提升檢測效率。兼容性佳，能兼容動態(tài)顯色法的酶標(biāo)儀，無需額外投入設(shè)備成本。關(guān)鍵的是，無動物源試劑，遵循 3R 原則（減少、替代、優(yōu)化），不依賴鱟血，解決資源依賴問題，實現(xiàn)長期穩(wěn)定供應(yīng)。且通過重組表達(dá)生產(chǎn)，批次差異小，重復(fù)性好，穩(wěn)定性高，為生物制品、制藥等行業(yè)內(nèi)毒素檢測提供可靠、可持續(xù)的工具，助力企業(yè)把控質(zhì)量，契合綠色環(huán)保與高效檢測的雙重需求，在保障檢測準(zhǔn)確性與合規(guī)性的同時，推動行業(yè)向更環(huán)保、更高效方向發(fā)展。

低內(nèi)毒素回收（LER）又稱內(nèi)毒素掩蔽，是指無菌制劑（尤其蛋白類生物制劑）進(jìn)行內(nèi)毒素檢測時，加標(biāo)內(nèi)毒素的回收率＜50% 的現(xiàn)象，且無法通過稀釋排除，區(qū)別于傳統(tǒng)檢測干擾。LER 會導(dǎo)致內(nèi)毒素污染被低估，已被全球監(jiān)管機構(gòu)重點關(guān)注：FDA 2013 年要求生物藥 BLA 申報時提交 LER 研究報告；EMA 2023 年明確含表面活性劑（如吐溫）或螯合劑（如 EDTA）的制劑需提供 LER 數(shù)據(jù)；中國藥典 2025 版 9251 通則也新增 LER 內(nèi)容，與國際接軌。這些要求促使企業(yè)優(yōu)化內(nèi)毒素檢測流程，避免因 LER 導(dǎo)致的檢測偏差，確保藥品安全。
外源性熱原含細(xì)菌內(nèi)毒素、脂磷壁酸、酵母多糖等，單核細(xì)胞活化反應(yīng)檢查法可檢出全部熱原。

上海疫苗內(nèi)毒素檢測風(fēng)險評估,內(nèi)毒素檢測

隨著動物保護理念和法規(guī)要求升級，重組因子C法（rFC法）作為 LAL 法的替代技術(shù)逐漸普及。重組 C 因子是以基因重組的方式表達(dá)的 LAL 試劑中的 C 因子，C 因子被內(nèi)毒素活化后切割熒光底物產(chǎn)生游離熒光基團，通過檢測熒光信號可以反應(yīng)活化后的蛋白酶活性，并由此可以推算出內(nèi)毒素的含量。與傳統(tǒng) LAL 法相比，rFC 法無需依賴鱟血資源，避免了天然 LAL 試劑批間差異大、易受 β- 葡聚糖干擾等問題，且反應(yīng)特異性更強。目前，《美國藥典》、《歐洲藥典》等法規(guī)已收錄 rFC 法，歐盟更推薦其用于疫苗等高風(fēng)險產(chǎn)品檢測，在保證檢測準(zhǔn)確性的同時，符合動物福利和可持續(xù)發(fā)展要求。
70% 葡萄糖等高滲溶液會使鱟試劑蛋白變性，檢測前需用檢查用水稀釋樣本。江蘇非動物源內(nèi)毒素檢測操作步驟

凝膠法鱟試劑通過觀察凝膠形成定性內(nèi)毒素，操作簡便，適合醫(yī)療器械內(nèi)毒素檢測初篩。上海疫苗內(nèi)毒素檢測風(fēng)險評估

實驗數(shù)據(jù)充分證明，內(nèi)毒素檢測重組級聯(lián)試劑（rCR）與天然鱟試劑的檢測結(jié)果具有高度等效性，可實現(xiàn)方法無縫切換。對細(xì)胞培養(yǎng)輔料、凍干甲型肝炎疫苗、單抗 A/B 等 8 類代表性樣品的平行檢測顯示，rCR 的檢測平均值為 0.001-0.026EU/mL，天然鱟試劑為 0.002-0.034EU/mL，兩者偏差≤0.003EU/mL。加標(biāo)回收率方面，rCR 為 70%-175.4%，天然鱟試劑為 82.2%-156.6%，均處于 50%-200% 的合格范圍。批內(nèi)精密度上，rCR 的 CV 值為 0.524%-14.716%，天然鱟試劑為 0.908%-12.348%，均滿足法規(guī)對精密度的要求。這種等效性確保了實驗室在切換至重組試劑時，歷史數(shù)據(jù)和工藝控制標(biāo)準(zhǔn)的連續(xù)性，降低方法轉(zhuǎn)換風(fēng)險。
上海疫苗內(nèi)毒素檢測風(fēng)險評估