江蘇E.coli表達(dá)菌宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留檢測(cè)試劑盒

來(lái)源： 發(fā)布時(shí)間：2025-10-14

宿主細(xì)胞殘留蛋白（HCP）檢測(cè)是生物制品質(zhì)量控制的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，當(dāng)前主流技術(shù)為基于抗體的免疫學(xué)方法（如 ELISA）。但實(shí)際檢測(cè)中，不同試劑盒的結(jié)果常存在明顯偏差，關(guān)鍵問(wèn)題源于其兩大關(guān)鍵組分 ——HCP 校準(zhǔn)品與檢測(cè)抗體 —— 在制備及表征上的高度可變性。作為定量基準(zhǔn)的校準(zhǔn)品，自身復(fù)雜性極高。不同供應(yīng)商制備時(shí)，所用細(xì)胞來(lái)源、培養(yǎng)及表達(dá)條件存在明顯差異，且宿主蛋白的提取純化工藝（如目標(biāo)產(chǎn)物去除策略）也各不相同，這些差異直接導(dǎo)致校準(zhǔn)品的組成、對(duì)實(shí)際樣品的代表性及儲(chǔ)存穩(wěn)定性千差萬(wàn)別。檢測(cè)抗體（尤其是多克隆抗體）需通過(guò)免疫動(dòng)物獲得，其特異性與 HCP 覆蓋度受多重因素影響：免疫原的選擇、動(dòng)物個(gè)體免疫應(yīng)答差異、免疫方案設(shè)計(jì)，以及后續(xù)抗體篩選與純化流程，都會(huì)讓不同批次或來(lái)源的抗體，在對(duì)不同 HCP 的親和力、對(duì)低豐度蛋白的檢測(cè)靈敏度等識(shí)別譜特性上，形成本質(zhì)區(qū)別。
抗體覆蓋率是 HCP 檢測(cè)關(guān)鍵指標(biāo)，影響結(jié)果可信度，需通過(guò)方法驗(yàn)證。江蘇E.coli表達(dá)菌宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留檢測(cè)試劑盒

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LC-MS/MS 作為成熟穩(wěn)定的蛋白質(zhì)組學(xué)分析技術(shù)，依托超高分辨率與準(zhǔn)確度，在生物分析領(lǐng)域中占據(jù)關(guān)鍵地位。該技術(shù)不僅可對(duì)低含量宿主細(xì)胞殘留蛋白（HCP）開(kāi)展定性檢測(cè)，還能通過(guò)構(gòu)建專(zhuān)屬蛋白質(zhì)譜庫(kù)準(zhǔn)確鑒定 HCP 的具體種類(lèi)，為深度解析殘留蛋白組成提供重要支撐。不過(guò)該技術(shù)應(yīng)用中面臨的主要挑戰(zhàn)，是如何優(yōu)化 LC-MS 方法以契合 GMP 規(guī)范對(duì)產(chǎn)品放行檢測(cè)的嚴(yán)苛要求。在質(zhì)譜檢測(cè)環(huán)節(jié)，引入表征明確的內(nèi)標(biāo)與外標(biāo)蛋白，可準(zhǔn)確分析 HCPs 的整體組成，并有效識(shí)別其中具有潛在風(fēng)險(xiǎn)的高風(fēng)險(xiǎn)蛋白。這一技術(shù)手段不僅為開(kāi)發(fā)產(chǎn)品專(zhuān)屬 HCP ELISA 檢測(cè)方法提供有力數(shù)據(jù)支撐，還可助力工藝優(yōu)化升級(jí)，加快推進(jìn)生物制品從研發(fā)到獲批上市的全流程進(jìn)度。
浙江通用型宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留檢測(cè)方法學(xué)驗(yàn)證湖州申科HCP試劑盒開(kāi)發(fā)經(jīng)抗原表征、抗體制備到體系驗(yàn)證，全流程符合法規(guī)要求。

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磷脂酶 B 樣蛋白 2（Phospholipase B-Like 2，PLBL2/PLBD2），憑借強(qiáng)共純化能力、高免疫原性及潛在酶活性，被認(rèn)定為 CHO 宿主細(xì)胞蛋白（HCP）中的關(guān)鍵高風(fēng)險(xiǎn)因子之一。當(dāng)前行業(yè)建議，需針對(duì)性開(kāi)發(fā)特定檢測(cè)方法，對(duì)這類(lèi)已知或特定蛋白進(jìn)行監(jiān)控，以更有效把控其潛在風(fēng)險(xiǎn)。SHENTEK® CHO PLBL-2 殘留檢測(cè)試劑盒（酶聯(lián)免疫吸附法）由湖州申科生物自主研發(fā)，擁有完全自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)，是一款 CHO PLBL-2 蛋白通用檢測(cè)試劑盒。該試劑盒適用于對(duì) CHO 表達(dá)系統(tǒng)生產(chǎn)的生物制品中，CHO HCP 高風(fēng)險(xiǎn)蛋白 PLBL-2 進(jìn)行定量檢測(cè)，且操作步驟少、檢測(cè)快速，兼具強(qiáng)檢測(cè)專(zhuān)一性與穩(wěn)定可靠的性能。

憑借高分辨質(zhì)譜技術(shù)，湖州申科生物推出宿主細(xì)胞蛋白定制化檢測(cè)服務(wù)組合，可滿(mǎn)足生物制品殘留蛋白的分析需求。該平臺(tái)服務(wù)內(nèi)容包括：1、HCP蛋白檢測(cè)定制化服務(wù)：借助ELISA、雙向電泳（2D）與LC-MS/MS技術(shù)，為常規(guī)生物制品檢測(cè)、高危及工藝相關(guān)蛋白數(shù)據(jù)庫(kù)搭建、特殊生物制品分析提供支持；2、抗體覆蓋率服務(wù)：運(yùn)用自主研發(fā)的IMBS技術(shù)結(jié)合質(zhì)譜，準(zhǔn)確評(píng)估ELISA試劑盒對(duì)工程細(xì)胞HCP的捕獲能力，同時(shí)完成校準(zhǔn)品表征；3、靶向HCP檢測(cè)：專(zhuān)注于高風(fēng)險(xiǎn)殘留蛋白的檢測(cè)方法開(kāi)發(fā)；4、蛋白種屬鑒定服務(wù)：利用LC-MS技術(shù)追溯樣品中的物種特異性肽段。該服務(wù)體系以多技術(shù)聯(lián)用和深度定制化策略為支撐，可滿(mǎn)足從基礎(chǔ)篩查到工藝關(guān)鍵雜質(zhì)監(jiān)控的全維度需求。
宿主檢測(cè)方法替換需橋接驗(yàn)證，確保新舊方法結(jié)果一致性與可比性。

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昆蟲(chóng)細(xì)胞桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)（IC-BEVS）是以桿狀病毒作為外源基因載體，以昆蟲(chóng)細(xì)胞作為宿主進(jìn)行外源蛋白生產(chǎn)的真核表達(dá)系統(tǒng)。BVES具有易于規(guī)模化生產(chǎn)、培養(yǎng)成本低、生物安全性高等優(yōu)勢(shì)，近年來(lái)陸續(xù)被研究用于生產(chǎn)重組蛋白、rAAV載體、亞單位疫苗（如病毒樣顆粒（VLP）疫苗）等， 在生物制品重組蛋白表達(dá)領(lǐng)域已有普遍運(yùn)用。Sf9來(lái)源于草地夜蛾細(xì)胞系（Spodoptera frugiperda cell line，Sf），是目前較常用的昆蟲(chóng)細(xì)胞系之一。SHENTEK® Sf9 HCP殘留蛋白檢測(cè)試劑盒（一步酶聯(lián)免疫吸附法），可定量檢測(cè)使用Sf9細(xì)胞系生產(chǎn)的生物制品中宿主細(xì)胞蛋白的殘留檢測(cè)。試劑盒抗體覆蓋率為70.4%-96.0%（IMBS-2D）和91.2% (IMBS-MS，Unique Peptide ≥2）。
基于HCP的復(fù)雜性，檢測(cè)中常遇到中間品，尤其是原液樣品無(wú)法達(dá)到稀釋線(xiàn)性，可能與樣品基質(zhì)的干擾有關(guān)。工藝特異型宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留檢測(cè)試劑盒

湖州申科擁有自主搭建的多克隆抗體庫(kù)（CHO\E.coli\293T細(xì)胞等），提供對(duì)應(yīng)覆蓋率驗(yàn)證服務(wù)。江蘇E.coli表達(dá)菌宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留檢測(cè)試劑盒

湖州申科生物參考USP通則<1132.1>闡述的內(nèi)容，依托公司深耕生物制品質(zhì)量控制領(lǐng)域十余年經(jīng)驗(yàn)，針對(duì)LC-MS檢測(cè)HCPs方法進(jìn)行了評(píng)價(jià)與優(yōu)化。同時(shí)通過(guò)對(duì)LC-MS檢測(cè)HCPs整體流程建立完整的質(zhì)控，建立起一套抗干擾能力強(qiáng)、穩(wěn)定性好、準(zhǔn)確度高、結(jié)果真實(shí)可靠的LC-MS檢測(cè)HCPs標(biāo)準(zhǔn)方法。檢測(cè)技術(shù)平臺(tái)分成樣品制備、質(zhì)譜檢測(cè)、數(shù)據(jù)生信分析及質(zhì)譜結(jié)果方法驗(yàn)證四部分，已使用LC-MS平臺(tái)進(jìn)行了293T、不同工藝E.coli、CHO、Vero、MDCK、Sf9等不同工程細(xì)胞HCPs抗體覆蓋率的檢測(cè)分析。
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