江蘇高效內毒素檢測方法驗證

來源： 發(fā)布時間：2025-10-23

檢測細菌內毒素的堂試劑方法，是一個生物反應過程，受到很多因素的干擾。在一個供試品的檢測方法固定下來之前，為了得到準確的結果，必須要了解供試品與鱟試劑之間的相互關系。供試品中的成分往往非常復雜，而且會干擾試驗檢測系統(tǒng)的功能。很多干擾的機理，并不是非常清楚。但是業(yè)界比較能夠接受的理論是，如果供試品中某些因子影響了鱟試劑中蛋白的表達功能，則被認為是干擾作用（Inhibition/Enhancement，V/E）。干擾作用產生的因素較多，一般包括試劑因素（鱟試劑、內毒素標準品）供試品因素（pH值、溫度、離子強度、濃度、水溶性、黏度、可發(fā)生鱟試劑反應的非內毒素雜質）和實驗因素（試驗器皿、細菌內毒素檢查用水、鱟試劑抗干擾能力）等。
內毒素易形成聚集體，若未充分分散，會使樣品中內毒素含量被低估，影響檢測。江蘇高效內毒素檢測方法驗證

江蘇高效內毒素檢測方法驗證,內毒素檢測

湖州申科建立了標準化的低內毒素回收（LER）技術服務流程，全周期支撐內毒素檢測優(yōu)化：7 個自然日內完成客戶溝通與 LER 確認，用天然鱟、重組鱟等方法檢測并出具報告；60 個自然日開展方法開發(fā)，分析 LER 成因（如螯合劑、蛋白質 IP）并研究去掩蔽方案；30 個自然日進行 HTS 驗證，完成 3 批 LER 實驗與干擾實驗，交付穩(wěn)定試劑盒、操作規(guī)程及培訓；再協(xié)助方法轉移與 cGMP 驗證。流程每環(huán)節(jié)均圍繞內毒素檢測展開，確保企業(yè)高效解決 LER 問題，滿足法規(guī)要求。
北京疫苗內毒素檢測結果判定重組級聯(lián)試劑（rCR）適用于細胞培養(yǎng)輔料、單抗、凍干疫苗等樣本，內毒素檢測適用范圍廣。

江蘇高效內毒素檢測方法驗證,內毒素檢測

湖州申科針對 LER 提供多平臺內毒素檢測解決方案，適配不同成因的 LER 問題：一是鱟試劑配套增強劑，通過添加分散劑、過量二價陽離子，改善 LPS 聚集體狀態(tài)，提升回收率；二是重組鱟試劑（rCR），無 G 因子干擾，完全模擬天然鱟級聯(lián)反應，靈敏度達 0.005EU/mL，易與天然方法橋接；三是重組 C 因子（rFC），靈敏度 0.005-5EU/mL，性狀穩(wěn)定，適配特定基質；四是 單核細胞活化反應測定（MAT)法，通過檢測 IL-6 覆蓋全熱原，不受 LPS 結構變化影響；五是質譜技術，驗證基質殘留對檢測的干擾。多平臺協(xié)同確保內毒素檢測準確可靠。

內毒素檢測重組級聯(lián)試劑（rCR）與天然鱟試劑在原料、性能和可持續(xù)性上存在本質區(qū)別。原料方面，天然鱟試劑依賴鱟血采集，受動物資源限制，而 rCR 通過基因工程表達 C、B 因子及凝固酶原，無動物源性，供應穩(wěn)定。特異性上，天然鱟試劑因含 G 因子，易與 β-D 葡聚糖反應產生假陽性，而 rCR 剔除 G 因子，只對內毒素特異性響應，從機制上消除干擾。批間一致性方面，天然鱟試劑受鱟個體差異影響，批間 CV 值較高；rCR 成分明確且生產工藝標準化，批間差異明顯降低，CV 值≤15%。兩者靈敏度相當（0.005EU/mL），但 rCR 無需面臨鱟資源政策限制，更符合動物福利趨勢和長期質控需求，是天然鱟試劑的理想替代。
細菌內毒素檢測中，rCR 對高蛋白（如單抗、FBS）、細胞培養(yǎng)上清等特殊樣本適配性好。

江蘇高效內毒素檢測方法驗證,內毒素檢測

生物制品（如單抗、疫苗、重組蛋白）注射劑因直接進入人體，對細菌內毒素殘留限值要求嚴苛（通常≤0.5 EU/mg 或更低），檢測面臨基質復雜、干擾物質多等挑戰(zhàn)。樣品中常見的蛋白質、螯合劑、表面活性劑等可能抑制或增強 LAL 反應，需通過預處理消除干擾：如采用稀釋法降低基質濃度、添加中和劑（如 Mg2?）修復反應體系，或使用熱滅活去除蛋白類干擾物。此外，生物制品生產全流程需進行內毒素監(jiān)控，從細胞培養(yǎng)上清、純化中間品到終產品均需檢測，確保工藝去除內毒素的有效性，符合 ICH Q6B 等法規(guī)對 “關鍵質量屬性” 的控制要求。
湖州申科凝膠法鱟試劑符合藥典要求，配抗增液抑制非特異性反應，多靈敏度可選。北京化學制藥內毒素檢測法規(guī)要求

細菌內毒素檢測中，rCR 加標回收率穩(wěn)定在 50%-200% 藥典范圍，可準確完成檢測。江蘇高效內毒素檢測方法驗證

SHENTEK®動態(tài)顯色法鱟試劑具備多重優(yōu)勢，為內毒素檢測提供解決方案。在法規(guī)遵循上，嚴格符合中國藥典（ChP）、美國藥典（USP）、歐洲藥典（EP）及日本藥典（JP）要求，確保檢測合規(guī)性，適配全球藥品監(jiān)管場景。抗干擾能力突出，試劑中預先添加葡聚糖抑制成分，有效抑制非特異性反應，應對復雜基質樣品（如含多糖類的中藥制劑等）檢測時，保障結果可靠。檢測靈敏度高，線性范圍達 0.005 - 5EU/mL，可準確捕捉低濃度內毒素殘留，滿足高風險藥品（如基因治療產品、血液制品）嚴苛檢測需求。兼容性廣，能適配 MD、TECAN、Thermo、Biotech 等不同品牌酶標儀，無需因設備更換調整試劑，降低實驗室設備適配成本。使用便捷性上，試劑盒成套裝，無需額外采購其他試劑，實驗步驟簡潔，新手也易上手操作。穩(wěn)定性出色，以凍干粉為主要成分，2 - 8℃條件下有效期超 2 年，減少試劑活性波動，保障批次間檢測一致性。適用領域廣，涵蓋胰島素等生物制品、血液制品、化學藥品及透析液等大多數(shù)樣本，從研發(fā)到生產全流程，為藥品、醫(yī)療器械等行業(yè)內毒素檢測筑牢質量防線，助力企業(yè)高效把控產品安全。
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