上?？贵w藥物熱原檢測體系

PyroSHENTEK^®熱原檢測試劑盒以 “簡化流程、提升效率” 為設(shè)計(jì)理念，采用即用型細(xì)胞，凍存細(xì)胞無需離心復(fù)蘇培養(yǎng)，復(fù)融后可直接與供試品混合共孵育，大幅節(jié)省傳統(tǒng)細(xì)胞預(yù)處理（如調(diào)整細(xì)胞狀態(tài)、鋪板培養(yǎng)）的時(shí)間成本。實(shí)驗(yàn)流程清晰可控：只需按要求制備待測供試品與內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品，各取對(duì)應(yīng)體積加入細(xì)胞懸液（每孔加樣量明確），經(jīng) 37℃、5% CO?孵育 24 小時(shí)后，離心收集上清并通過 ELISA 法檢測 IL-6 含量，全程可在 24 小時(shí)內(nèi)獲得穩(wěn)定可靠的檢測結(jié)果。這種便捷性尤其適配實(shí)驗(yàn)室高通量檢測需求，減少人員操作步驟的同時(shí)，降低了因復(fù)雜操作引入的誤差風(fēng)險(xiǎn)，兼顧效率與準(zhǔn)確性。

PyroSHENTEK^®熱原檢測試劑盒（貨號(hào) 1502100，規(guī)格 96 測試 / 盒）優(yōu)勢在于搭載 MAT 特定單核細(xì)胞系，細(xì)胞表面表達(dá)多種 Toll 樣受體（TLR），可響應(yīng)不同類型熱原。該細(xì)胞系來源清晰、可溯源，均一性強(qiáng)且無供體依賴，有效規(guī)避了傳統(tǒng) PBMC 因供體差異導(dǎo)致的結(jié)果波動(dòng)，同時(shí)安全風(fēng)險(xiǎn)低，無需擔(dān)憂外源因子污染。試劑盒采用 “標(biāo)準(zhǔn)化單核細(xì)胞 + ELISA 檢測” 一體化體系，通過嚴(yán)格的細(xì)胞質(zhì)量控制（如凍存復(fù)融后活率達(dá)標(biāo)），確保每次檢測的細(xì)胞狀態(tài)一致；搭配預(yù)包被 IL-6 抗體的酶標(biāo)板與配套試劑，進(jìn)一步減少體系誤差。從標(biāo)曲數(shù)據(jù)來看，其擬合采用 4-Parameter Logistic 模型，R2 達(dá) 1.000，EC50 為 0.119EU/mL，參數(shù)置信區(qū)間穩(wěn)定，復(fù)孔結(jié)果重復(fù)性優(yōu)異，能為熱原定量提供準(zhǔn)確如一的數(shù)據(jù)支撐，避免因體系不穩(wěn)定導(dǎo)致的檢測偏差。

熱原檢測技術(shù)自 20 世紀(jì)初問世以來，經(jīng)歷了 “動(dòng)物試驗(yàn)→體外生化檢測→細(xì)胞生物學(xué)檢測” 的三次關(guān)鍵變革，每一次變革均推動(dòng)檢測效率、準(zhǔn)確性與全面性的提升。20 世紀(jì)初至中期，熱原檢測方法只有家兔熱原試驗(yàn)，通過觀察家兔體溫變化篩查熱原，雖實(shí)現(xiàn)了廣譜檢測，但存在動(dòng)物成本高、操作繁瑣、靈敏度低、種屬差異大等局限，難以滿足制藥行業(yè)快速發(fā)展需求。20 世紀(jì) 60 年代，鱟試驗(yàn)法（LAL 法）的發(fā)明開啟了熱原檢測的 “體外生化時(shí)代”，利用鱟血變形細(xì)胞裂解物的凝血級(jí)聯(lián)反應(yīng)檢測細(xì)菌內(nèi)毒素，靈敏度提升至 ng 級(jí)，檢測時(shí)間縮短至 1-2 小時(shí)，迅速成為制藥行業(yè)常規(guī)質(zhì)控方法；但該方法依賴鱟資源，易受 β- 葡聚糖干擾，且只能檢測內(nèi)毒素，無法覆蓋非內(nèi)毒素?zé)嵩?1 世紀(jì)以來，重組技術(shù)與細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展推動(dòng)熱原檢測進(jìn)入 “全熱原管控時(shí)代”：重組級(jí)聯(lián)試劑（rCR）與重組 C 因子試劑（rFC）通過基因工程技術(shù)制備，擺脫對(duì)鱟資源的依賴，消除葡聚糖干擾，實(shí)現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)；單核細(xì)胞活化反應(yīng)測定（MAT）利用人源單核細(xì)胞檢測全類型熱原，填補(bǔ)非內(nèi)毒素?zé)嵩瓩z測空白，且結(jié)果更貼近人體實(shí)際反應(yīng)。

基于單核細(xì)胞系的穩(wěn)定性，MAT 熱原檢測可將復(fù)孔數(shù)從藥典要求的≥4 降至≥3。PyroSHENTEK®熱原檢測試劑盒數(shù)據(jù)顯示，單核細(xì)胞系標(biāo)曲的 4 復(fù)孔與 3 復(fù)孔，各濃度點(diǎn)（0.0125-1.0EU/mL）的準(zhǔn)確度（相對(duì)偏差）與精密度均在標(biāo)準(zhǔn)范圍內(nèi)，無明顯差異。這一調(diào)整的主要依據(jù)是單核細(xì)胞系消除了 PBMC 的異質(zhì)性，無需依賴多復(fù)孔抵消波動(dòng)，既能滿足熱原檢測的穩(wěn)定性與統(tǒng)計(jì)學(xué)合理性要求，又能減少試劑與耗材消耗，降低檢測成本，同時(shí)提升實(shí)驗(yàn)效率。因此樣品預(yù)測試時(shí)可選擇3復(fù)孔進(jìn)行初步檢測，產(chǎn)品放行還需按照藥典要求進(jìn)行4復(fù)孔測試。

PBMC（外周血單個(gè)核細(xì)胞）的供體差異會(huì)直接導(dǎo)致熱原檢測結(jié)果的波動(dòng)，主要體現(xiàn)在 IL-6 釋放水平的不一致。不同供體的 PBMC，其單核細(xì)胞比例、TLR 受體表達(dá)量、免疫活性狀態(tài)存在差異：有的供體 PBMC 受熱原刺激后， IL-6 釋放量高；有的則極低，甚至無明顯響應(yīng)。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示， PBMC 的標(biāo)曲各濃度點(diǎn)相對(duì)偏差有高達(dá) 171.43%的，正是這種差異的體現(xiàn)，導(dǎo)致熱原檢測結(jié)果難以標(biāo)準(zhǔn)化，無法準(zhǔn)確判斷供試品熱原是否超標(biāo)，從而增加了藥品的質(zhì)量控制風(fēng)險(xiǎn)。