上海復(fù)雜基質(zhì)支原體檢測NAT法

來源： 發(fā)布時間：2025-12-04

支原體檢測 NAT 方法驗證需滿足全球藥典對檢測限、專屬性、耐用性、可比性等關(guān)鍵指標(biāo)的要求，且 EP、USP 新草案提出更嚴(yán)格標(biāo)準(zhǔn)。檢測限（LOD）方面，EP 要求針對每種支原體確定臨界值，需 3 次單獨(dú) 10 倍梯度稀釋、共 24 個檢測數(shù)據(jù)，95% 檢出濃度達(dá)標(biāo)；USP 要求標(biāo)準(zhǔn)菌株濃度≤10 CFU/mL 或 100 GC/mL，≥24 次檢測數(shù)據(jù)支持統(tǒng)計分析；ChP 未明確支原體專屬要求，但需滿足 “微生物檢出下限數(shù)量” 設(shè)定標(biāo)準(zhǔn)。專屬性上，EP 建議測試革蘭氏陽性菌交叉污染，USP 要求生信分析與實(shí)際樣品驗證結(jié)合，ChP 強(qiáng)調(diào)外來成分不干擾試驗。耐用性方面，EP 需驗證試劑濃度、提取與反應(yīng)程序變化，USP 涵蓋設(shè)備、反應(yīng)體系等參數(shù)波動?？杀刃陨希珽P 要求 NAT 法與藥典法 LOD 及特異性對比，替代培養(yǎng)法需達(dá) 10 CFU/mL，替代指示細(xì)胞法需達(dá) 100 CFU/mL，USP 則視樣品基質(zhì)情況要求可比性研究。
支原體檢測取樣需按產(chǎn)品體積設(shè)計，10-1000mL 樣品取總體積 1%，保障結(jié)果代表性。上海復(fù)雜基質(zhì)支原體檢測NAT法

上海復(fù)雜基質(zhì)支原體檢測NAT法,支原體檢測

2023 年美國國立衛(wèi)生研究院（NIH）的對比研究得出一個結(jié)論是并非所有商業(yè)化支原體檢測試劑盒都能滿足替代傳統(tǒng)方法的要求，研究對市面上 5 款主流試劑盒（ATCC、梅里埃、賽默飛、羅氏、MB）進(jìn)行測試，發(fā)現(xiàn)不同試劑盒對不同支原體菌株的檢測靈敏度差異明顯，部分產(chǎn)品無法達(dá)到宣稱的≤10 CFU/mL 檢測限（符合歐、日藥典替代培養(yǎng)法的要求）。例如，ATCC 試劑盒對萊氏無膽甾原體、精氨酸支原體的檢測限只為 100 CFU/mL，MB 試劑盒對硬蜱螺原體無法檢出（>1000 CFU/mL）。這一現(xiàn)象表明，試劑盒的檢測性能與支原體菌株特性密切相關(guān)，因此企業(yè)需根據(jù)待測樣品的原輔料來源和檢測目的，對試劑盒進(jìn)行嚴(yán)格的性能驗證，避免因檢測限不達(dá)標(biāo)導(dǎo)致質(zhì)量風(fēng)險。
遼寧干細(xì)胞產(chǎn)品支原體檢測驗證菌株EP 新規(guī)明確支原體驗證菌株 GC/CFU 比值＜10，需在指數(shù)階段收獲以保障活性與分散性。

上海復(fù)雜基質(zhì)支原體檢測NAT法,支原體檢測

湖州申科構(gòu)建了具有完備資質(zhì)的支原體技術(shù)服務(wù)平臺，為企業(yè)提供多元化支持。平臺擁有 BSL-2/P2 微生物實(shí)驗室備案資質(zhì)，遵循 GMP-like 質(zhì)量體系，具備支原體培養(yǎng)法、指示細(xì)胞法與 qPCR 法的檢測及驗證能力，配備符合藥典要求的支原體標(biāo)準(zhǔn)菌株庫與高靈敏度培養(yǎng)基（含液體、固體、半流體）。企業(yè)已通過 ISO13485:2016 質(zhì)量管理體系認(rèn)證（證書號 MD 709873），檢測中心獲得 CNAS 認(rèn)證（注冊號 CNAS L21942），符合 ISO/IEC 17025:2017 標(biāo)準(zhǔn)，具備國際互認(rèn)資質(zhì)。平臺可提供多元化技術(shù)服務(wù)，包括支原體 qPCR 法檢測能力建立、實(shí)驗員能力考核、質(zhì)量體系與流程搭建、實(shí)驗室設(shè)計方案優(yōu)化，以及樣品檢測（三種方法）、樣品適用性驗證、方法學(xué)驗證、傳統(tǒng)法與 qPCR 法比對、特殊菌株定制生產(chǎn)等，申報階段可配合客戶與監(jiān)管機(jī)構(gòu)完成現(xiàn)場審計。

MycoSHENTEK® 支原體 DNA 校準(zhǔn)品作為 NAT 檢測的關(guān)鍵輔助試劑，采用質(zhì)粒 DNA 制備，從根源上消除了污染風(fēng)險，使用更安全。該校準(zhǔn)品主要用于驗證支原體 NAT 檢測的靈敏度，以及校準(zhǔn)品濃度對數(shù)與 Ct 值的線性關(guān)系，為檢測方法的定量準(zhǔn)確性提供保障。產(chǎn)品采用 DNA 稀釋液進(jìn)行系列梯度稀釋，操作簡便高效，無需復(fù)雜預(yù)處理；同時具備極強(qiáng)的專屬性，不受其他種屬 DNA 干擾，耐用性突出，可在不同實(shí)驗條件下保持性能穩(wěn)定。其標(biāo)準(zhǔn)化的特性使其成為生物制品企業(yè)開展支原體檢測方法驗證、日常質(zhì)量控制校準(zhǔn)的理想選擇，助力檢測結(jié)果的準(zhǔn)確可靠。
高濃度質(zhì)粒樣品在進(jìn)行支原體檢測時，需通過濃縮離心預(yù)處理，提升支原體檢出率。

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湖州申科的支原體驗證菌株以高穩(wěn)定性與合規(guī)性為重點(diǎn)優(yōu)勢，滿足 NAT 方法驗證需求。菌株來源可靠，均取自國內(nèi)外合規(guī)機(jī)構(gòu)驗證菌株標(biāo)準(zhǔn)盤，溯源至美國 ATCC（口腔、肺炎支原體）、中國 CVCC（豬鼻支原體）等正規(guī)保藏機(jī)構(gòu)，獲正式商用授權(quán)，標(biāo)定濃度涵蓋 10CFU 與 100CFU。生產(chǎn)環(huán)境合規(guī)，在 BSL-2 生物安全實(shí)驗室開展，符合國家生物安全法標(biāo)準(zhǔn)，針對不同菌株特性逐個優(yōu)化生產(chǎn)工藝，涵蓋超 10 種菌株的主代與工作代。質(zhì)控環(huán)節(jié)嚴(yán)謹(jǐn)，采用高靈敏度培養(yǎng)基（液體、固體、半流體），保障菌落易觀察分離與 CFU 計數(shù)準(zhǔn)確性；凍存前后均通過固體平皿培養(yǎng)法測定 CFU，聯(lián)合合規(guī)機(jī)構(gòu)建立數(shù)字 PCR 標(biāo)定方法，經(jīng)實(shí)驗室間對比驗證，準(zhǔn)確監(jiān)控 GC/CFU 比，確保菌株質(zhì)量達(dá)標(biāo)。
全血基質(zhì)中100 CFU/mL支原體，湖州申科支原體檢測試劑盒通過優(yōu)化提取流程實(shí)現(xiàn)穩(wěn)定擴(kuò)增與檢出。陜西復(fù)雜基質(zhì)支原體檢測試劑盒

湖州申科已為多家頭部企業(yè)提供支原體檢測方案，支持 BLA/NDA 申報。上海復(fù)雜基質(zhì)支原體檢測NAT法

湖州申科構(gòu)建了覆蓋全領(lǐng)域、全場景的支原體檢測一站式合規(guī)解決方案。產(chǎn)品矩陣豐富，包括支原體 DNA 提取純化試劑盒（2G）、檢測試劑盒（2G，PCR - 熒光探針法）、DNA 校準(zhǔn)品、一體化檢測卡盒、外源因子全自動核酸分析系統(tǒng)，以及 10 余種支原體驗證菌株（已上市豬鼻、肺炎、口腔支原體等，即將上市發(fā)酵、精氨酸支原體等）。方案具備極強(qiáng)的場景適配性，可應(yīng)對 5% 人白、高濃度細(xì)胞等復(fù)雜基質(zhì)樣品，支持從起始材料到終產(chǎn)品的全流程檢測，滿足細(xì)胞療法、抗體、疫苗、CRO/CDMO 等不同領(lǐng)域的檢測需求。服務(wù)層面，提供從方法學(xué)建立、樣品檢測、適用性驗證、傳統(tǒng)法與 qPCR 法比對到特殊菌株定制的全流程技術(shù)支持，配合企業(yè)完成監(jiān)管機(jī)構(gòu)現(xiàn)場審計，滿足企業(yè)從 IND 到 BLA/NDA 的申報需求，實(shí)現(xiàn) “極簡操作、一步加樣、避免污染、全量檢測” 的價值。
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