上海ELISA法宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留檢測(cè)常見(jiàn)問(wèn)題分析

磷脂酶 B 樣蛋白 2（Phospholipase B-Like 2，PLBL2/PLBD2），憑借強(qiáng)共純化能力、高免疫原性及潛在酶活性，被認(rèn)定為 CHO 宿主細(xì)胞蛋白（HCP）中的關(guān)鍵高風(fēng)險(xiǎn)因子之一。當(dāng)前行業(yè)建議，需針對(duì)性開(kāi)發(fā)特定檢測(cè)方法，對(duì)這類已知或特定蛋白進(jìn)行監(jiān)控，以更有效把控其潛在風(fēng)險(xiǎn)。SHENTEK^® CHO PLBL-2 殘留檢測(cè)試劑盒（酶聯(lián)免疫吸附法）由湖州申科生物自主研發(fā)，擁有完全自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)，是一款 CHO PLBL-2 蛋白通用檢測(cè)試劑盒。該試劑盒適用于對(duì) CHO 表達(dá)系統(tǒng)生產(chǎn)的生物制品中，CHO HCP 高風(fēng)險(xiǎn)蛋白 PLBL-2 進(jìn)行定量檢測(cè)，且操作步驟少、檢測(cè)快速，兼具強(qiáng)檢測(cè)專一性與穩(wěn)定可靠的性能。

湖州申科生物專注于研發(fā)貼合實(shí)際生產(chǎn)工藝的商業(yè)化宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留檢測(cè)試劑盒，依托不同工藝下 HCP 的差異化分析，針對(duì)性推出各細(xì)分工藝領(lǐng)域的 HCP 檢測(cè)試劑盒。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示：針對(duì) CHO-S 與 CHO-K1 兩種宿主細(xì)胞，兩類細(xì)胞共享 2458 種相同 HCP（占比 79.7%），但各自存在 392 種和 236 種特異性 HCP，充分體現(xiàn)工藝差異帶來(lái)的殘留蛋白特異性。進(jìn)一步對(duì)比 B3 表達(dá)菌與 K2 克隆菌，盡管二者共享 1489 種相同蛋白（分別占比 88% 和 85%），但仍各自檢出 208 種和 258 種獨(dú)有蛋白，差異率為 12%-15%。這些結(jié)果直接證實(shí)，不同工藝路線與克隆株選擇會(huì)影響 HCP 殘留譜的構(gòu)成。據(jù)此，湖州申科提出 “工藝定制化檢測(cè)” 策略：通過(guò)準(zhǔn)確識(shí)別共性與特異性 HCP，針對(duì)性研發(fā)細(xì)分試劑盒產(chǎn)品。

中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞（Chinese Hamster Ovary，CHO）是生物制品生產(chǎn)中常用的動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)，廣泛應(yīng)用于抗體、重組蛋白、疫苗等產(chǎn)品的制備。采用 CHO 細(xì)胞作為宿主進(jìn)行生產(chǎn)時(shí)，難免會(huì)引入宿主細(xì)胞蛋白（HCP）雜質(zhì)；即便 HCP 殘留量較低，仍可能存在免疫原性，還會(huì)帶來(lái)降低產(chǎn)品蛋白穩(wěn)定性等風(fēng)險(xiǎn)。因此，需對(duì)生物制品中的 HCP 殘留進(jìn)行定量分析，從而保障純化工藝的一致性與終產(chǎn)品的安全性。SHENTEK^®CHO 宿主細(xì)胞蛋白（HCP ）殘留檢測(cè)試劑盒實(shí)現(xiàn)了關(guān)鍵試劑的全國(guó)產(chǎn)化，其通過(guò) CHO 細(xì)胞（K1&S）補(bǔ)料分批培養(yǎng)工藝制備 HCPs，再以此免疫綿羊獲取抗體，適用于檢測(cè) CHO 細(xì)胞系表達(dá)的生物制品（如單抗、重組蛋白、疫苗等）中的 HCP 殘留。該試劑盒具有操作步驟少、檢測(cè)速度快、專一性強(qiáng)、性能穩(wěn)定可靠的特點(diǎn)。

定制化試劑盒之所以成為宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留檢測(cè)的優(yōu)先選擇，原因之一在于其構(gòu)建的定制化檢測(cè)體系，更契合商業(yè)化生產(chǎn)中HCP工藝雜質(zhì)的控制需求。在HCP校準(zhǔn)品與HCP抗體這兩大關(guān)鍵試劑組分符合要求的基礎(chǔ)上，定制化方法的建立與優(yōu)化依托真實(shí)的純化中間品及原液樣品開(kāi)展，通過(guò)優(yōu)化檢測(cè)條件提升對(duì)低濃度HCPs的檢測(cè)靈敏度，從而滿足工藝驗(yàn)證與過(guò)程控制的需求。進(jìn)入臨床三期階段，生產(chǎn)工藝需開(kāi)展系統(tǒng)驗(yàn)證，以保障工藝的穩(wěn)定性與可重復(fù)性。此時(shí)，定制化HCPELISA檢測(cè)方法可更準(zhǔn)確地監(jiān)測(cè)生產(chǎn)工藝中HCP的去除成效，為工藝驗(yàn)證提供堅(jiān)實(shí)支撐。在過(guò)程控制環(huán)節(jié)，借助工藝特異型HCPELISA檢測(cè)方法，可實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)生產(chǎn)過(guò)程中的HCP水平，擁有更強(qiáng)的生產(chǎn)異常預(yù)警能力，能及時(shí)排查生產(chǎn)風(fēng)險(xiǎn)，保障產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定。編輯分享將定制化試劑盒用于HCP殘留檢測(cè)的優(yōu)勢(shì)分點(diǎn)列出推薦一些關(guān)于定制化試劑盒在HCP殘留檢測(cè)中應(yīng)用的研究報(bào)告除了文中提到的方法，還有哪些可以提高HCP檢測(cè)靈敏度的技術(shù)？

在關(guān)鍵物料開(kāi)發(fā)基礎(chǔ)上，湖州申科生物 HCP ELISA 檢測(cè)試劑盒的開(kāi)發(fā)流程還包含第三大關(guān)鍵階段 —— 檢測(cè)體系開(kāi)發(fā)及驗(yàn)證，這一環(huán)節(jié)直接關(guān)系檢測(cè)方法的可靠性。公司會(huì)開(kāi)展嚴(yán)格的檢測(cè)體系開(kāi)發(fā)與驗(yàn)證工作，驗(yàn)證方案完全契合 ICH 指導(dǎo)原則及藥典中關(guān)于分析方法驗(yàn)證的標(biāo)準(zhǔn)要求，確保檢測(cè)體系的科學(xué)性與合規(guī)性。同時(shí)，為進(jìn)一步保障產(chǎn)品品質(zhì)，公司在生產(chǎn)全流程中嚴(yán)格落實(shí)物料質(zhì)量控制，并全程在潔凈車間環(huán)境中完成生產(chǎn)，從過(guò)程管控層面確保試劑盒方法的穩(wěn)健性、重現(xiàn)性與法規(guī)符合性。這套從抗原源頭把控，到關(guān)鍵抗體制備，再到檢測(cè)體系驗(yàn)證與潔凈生產(chǎn)的標(biāo)準(zhǔn)化、合規(guī)化全流程開(kāi)發(fā)模式，并非單一環(huán)節(jié)的質(zhì)量管控，而是形成了完整的品質(zhì)保障鏈條，成為湖州申科 宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留檢測(cè)產(chǎn)品品質(zhì)與可靠性的重點(diǎn)支撐。

為更優(yōu)管控工藝、保障產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定，各國(guó)監(jiān)管機(jī)構(gòu)均要求提供所用宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留檢測(cè)ELISA試劑盒的抗體覆蓋率數(shù)據(jù)。通常需開(kāi)展覆蓋率分析的場(chǎng)景主要有以下四類：①臨床II期后，若仍使用商品化試劑盒，需評(píng)估其抗體覆蓋率是否能持續(xù)滿足質(zhì)量監(jiān)控需求；②臨床III期及后續(xù)階段，若產(chǎn)品研究者開(kāi)發(fā)了平臺(tái)化或工藝專屬型HCP監(jiān)測(cè)方法，此類試劑盒使用前需評(píng)估其覆蓋率水平與商業(yè)化試劑盒覆蓋率水平的差異；③申報(bào)階段若未提交覆蓋率數(shù)據(jù)，監(jiān)管機(jī)構(gòu)可能向企業(yè)提出補(bǔ)充提交的要求；④產(chǎn)品上市后，若發(fā)生生產(chǎn)場(chǎng)地變更、工藝變更、HCP分析方法變更等情況，研究者需評(píng)估變更前后抗體覆蓋率水平的差異，以及該差異對(duì)藥品質(zhì)量與安全性的影響。