原料藥內(nèi)毒素檢測(cè)鱟試劑

來源： 發(fā)布時(shí)間：2025-12-02

在進(jìn)行內(nèi)毒素檢測(cè)時(shí)，干擾試驗(yàn)又叫增強(qiáng)或抑制試驗(yàn)，主要目的是確證檢測(cè)內(nèi)毒素的方法是否受樣品干擾。在建立細(xì)菌內(nèi)毒素檢查方法中，驗(yàn)證試驗(yàn)前，要去除樣品可能含有的內(nèi)毒素，以確保建立方法的準(zhǔn)確可靠。藥典規(guī)定：①當(dāng)進(jìn)行新藥的內(nèi)毒素檢查試驗(yàn)前，或無內(nèi)毒素檢查項(xiàng)品種建立內(nèi)毒素檢查法時(shí)，需進(jìn)行干擾試驗(yàn)；②當(dāng)鱟試劑、供試品的配方、生產(chǎn)工藝改變，或試驗(yàn)環(huán)境下發(fā)生了任何有可能影響試驗(yàn)結(jié)果的變化時(shí)，需重新進(jìn)行干擾試驗(yàn)。生產(chǎn)廠家常發(fā)生的一些微小變更，會(huì)影響到評(píng)估結(jié)果，進(jìn)而影響到供試品對(duì)鱟試劑的干擾試驗(yàn)。因此，生產(chǎn)廠家應(yīng)制定一個(gè)重復(fù)進(jìn)行干擾試驗(yàn)的周期，并進(jìn)行跟蹤和記錄。
β- 葡聚糖刺激 G 因子致假陽(yáng)性，用含抗增液的鱟試劑可優(yōu)化內(nèi)毒素檢測(cè)結(jié)果。原料藥內(nèi)毒素檢測(cè)鱟試劑

原料藥內(nèi)毒素檢測(cè)鱟試劑,內(nèi)毒素檢測(cè)

內(nèi)毒素檢測(cè)方法易受樣品基質(zhì)干擾，法規(guī)要求在方法應(yīng)用前必須進(jìn)行干擾驗(yàn)證，選擇標(biāo)準(zhǔn)曲線中點(diǎn)或一個(gè)靠近中點(diǎn)的內(nèi)毒素濃度，作為供試品干擾試驗(yàn)種添加的內(nèi)毒素濃度計(jì)算回收率，若回收率在 50%-200% 范圍內(nèi)，表明無明顯干擾；若回收率異常，需通過過濾、中和、透析、加熱處理等方式優(yōu)化樣品前處理。方法學(xué)確認(rèn)還需涵蓋線性范圍（如 0.005-5 EU/mL）、精密度（批內(nèi) CV≤15%）、檢測(cè)限（LOD≤0.01 EU/mL）等指標(biāo)，確保方法在實(shí)際樣品檢測(cè)中穩(wěn)定可靠，符合《美國(guó)藥典》 <85>、《中國(guó)藥典》通則 1143 等藥典要求。
原料藥內(nèi)毒素檢測(cè)鱟試劑70% 葡萄糖等高滲溶液會(huì)使鱟試劑蛋白變性，檢測(cè)前需用檢查用水稀釋樣本。

原料藥內(nèi)毒素檢測(cè)鱟試劑,內(nèi)毒素檢測(cè)

樣品中的脂質(zhì)體與表面活性劑，會(huì)通過不同機(jī)制干擾內(nèi)毒素檢測(cè)，需結(jié)合基質(zhì)特性選擇處理方式。脂質(zhì)體的干擾體現(xiàn)在兩方面：一是脂質(zhì)雙分子層會(huì)包裹內(nèi)毒素，使其無法與鱟試劑接觸，導(dǎo)致假陰性；二是脂質(zhì)體的膠體性質(zhì)會(huì)干擾凝膠形成（凝膠法）或光度信號(hào)讀?。岫?/ 顯色法）。針對(duì)完整脂質(zhì)體制劑，可先用生理鹽水稀釋降低脂質(zhì)體濃度，減少包裹作用；若需徹底釋放內(nèi)毒素，還可使用 DMSO、乙醇或甲醇等溶劑裂解脂質(zhì)體，暴露被包裹的內(nèi)毒素。表面活性劑的干擾則源于其對(duì)物質(zhì)結(jié)構(gòu)的改變：既可能破壞內(nèi)毒素的聚集體結(jié)構(gòu)，影響其活性；又可能導(dǎo)致鱟試劑中蛋白質(zhì)變性，抑制反應(yīng)。對(duì)此，可通過內(nèi)毒素檢查用水或生理鹽水稀釋樣品，降低表面活性劑濃度，消除其對(duì)結(jié)構(gòu)的破壞作用。這些針對(duì)性處理能有效解決脂質(zhì)體與表面活性劑的干擾，確保內(nèi)毒素檢測(cè)結(jié)果真實(shí)可靠。

重組試劑（rCR、rFC）是解決 LER 的重要工具，優(yōu)化內(nèi)毒素檢測(cè)性能。重組鱟試劑（rCR）通過基因工程表達(dá) C、B 因子及凝固酶原，剔除 G 因子，完全模擬天然鱟級(jí)聯(lián)反應(yīng)，靈敏度達(dá) 0.005EU/mL，與天然方法橋接容易，能避免 LPS 結(jié)構(gòu)變化導(dǎo)致的假陰性；重組 C 因子（rFC）靈敏度 0.005-5EU/mL，性狀穩(wěn)定、均一性好，雖需熒光酶標(biāo)儀，但對(duì)部分 LER 場(chǎng)景（如無蛋白質(zhì)干擾）適配性強(qiáng)。二者擺脫了天然鱟試劑的局限，為內(nèi)毒素檢測(cè)提供更抗 LER 的選擇，契合行業(yè)技術(shù)趨勢(shì)。
樣本含內(nèi)毒素結(jié)合物時(shí)，可嘗試用分散劑減少抑制，保障內(nèi)毒素正常檢出。

原料藥內(nèi)毒素檢測(cè)鱟試劑,內(nèi)毒素檢測(cè)

內(nèi)毒素檢測(cè)重組級(jí)聯(lián)試劑（rCR）在方法橋接方面具有明顯優(yōu)勢(shì)，可大幅度降低實(shí)驗(yàn)室的轉(zhuǎn)換成本。在設(shè)備兼容性上，rCR 無需額外采購(gòu)新設(shè)備，完全適配天然鱟動(dòng)態(tài)顯色法現(xiàn)用的酶標(biāo)儀（如 Molecular Devices、Tecan sunrise、Thermo MultiSkan ET 等品牌），支持 405nm 波長(zhǎng)動(dòng)態(tài)讀數(shù)和 37℃恒溫孵育。操作流程上，rCR 的樣品處理、試劑混合、加樣孵育等步驟與天然鱟試劑一致，實(shí)驗(yàn)室無需重新培訓(xùn)操作人員或修改 SOP。顯色系統(tǒng)方面，rCR 沿用與天然試劑相同的 PNA 顯色底物，通過黃色信號(hào)變化定量，檢測(cè)原理和數(shù)據(jù)分析方法保持不變。這種高度兼容性使實(shí)驗(yàn)室能快速完成方法驗(yàn)證和切換，加速重組試劑的合規(guī)應(yīng)用進(jìn)程。
鱟試劑靈敏度復(fù)核至關(guān)重要，存放半年需重測(cè)，避免內(nèi)毒素檢測(cè)出現(xiàn)假陰性或假陽(yáng)性。浙江醫(yī)療器械內(nèi)毒素檢測(cè)動(dòng)態(tài)顯色法鱟試劑

脂質(zhì)體樣本用重組鱟試劑檢測(cè)，可稀釋或用 DMSO 裂解，釋放包裹的內(nèi)毒素以便檢出。原料藥內(nèi)毒素檢測(cè)鱟試劑

針對(duì)單核細(xì)胞活化反應(yīng)測(cè)定法（MAT）通過檢測(cè)內(nèi)毒素的生物活性，有效規(guī)避低內(nèi)毒素回收（LER）對(duì)內(nèi)毒素檢測(cè)的影響。其原理是：熱原（包括被掩蔽的 LPS）活化單核細(xì)胞表面的 TLR 受體，釋放 IL-6 等細(xì)胞因子，通過 ELISA 檢測(cè) IL-6 濃度，結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)曲線推算熱原含量。即使 LPS 因 LER 改變超分子結(jié)構(gòu)，只要仍具生物活性，就能被 MAT 法識(shí)別。這種 “檢測(cè)活性而非結(jié)構(gòu)” 的特性，使 MAT 法成為 LER 場(chǎng)景下內(nèi)毒素檢測(cè)的重要補(bǔ)充，與其他方法協(xié)同構(gòu)建高效可靠的熱原防控體系。
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