廣東醫(yī)療器械內(nèi)毒素檢測動態(tài)顯色法鱟試劑

來源： 發(fā)布時間：2025-12-02

在開展內(nèi)毒素檢測時，樣品的 pH 值與二價離子（Mg2?、Ca2?）水平是影響鱟試劑酶促反應(yīng)的關(guān)鍵因素，直接關(guān)系檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。鱟試劑檢測內(nèi)毒素依賴絲氨酸蛋白酶的級聯(lián)放大反應(yīng)，該反應(yīng)的合適 pH 值范圍為 6.0-8.0，若樣品過酸或過堿，會快速降低酶活性，甚至導(dǎo)致酶徹底失活，進而出現(xiàn)內(nèi)毒素檢測假陰性。針對這一問題，可使用 0.1N 或更低濃度的 HCl/NaOH 溶液，將樣品 pH 值準(zhǔn)確調(diào)節(jié)至適宜區(qū)間，為反應(yīng)提供穩(wěn)定環(huán)境。同時，二價離子是反應(yīng)必需的輔助因子：Mg2?是內(nèi)毒素活化鱟試劑的關(guān)鍵，缺乏會直接阻斷反應(yīng)啟動；Ca2?雖參與酶促反應(yīng)，但濃度過高會反向抑制反應(yīng)效率。若樣品中含有肝素鈉、EDTA、檸檬酸鈉等螯合劑，會與二價離子結(jié)合導(dǎo)致其濃度不足，此時可通過內(nèi)毒素檢查用水稀釋樣品降低螯合劑濃度，或添加特定二價離子試劑補充，但需嚴(yán)格控制離子濃度，避免過度增強反應(yīng)引發(fā)誤差，確保內(nèi)毒素檢測能真實反映樣品中的內(nèi)毒素殘留量。
內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品（CSE）稀釋液配制時渦旋很重要，可使內(nèi)毒素充分溶解，保證濃度準(zhǔn)確。廣東醫(yī)療器械內(nèi)毒素檢測動態(tài)顯色法鱟試劑

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內(nèi)毒素檢測重組級聯(lián)試劑（rCR）與天然鱟試劑在原料、性能和可持續(xù)性上存在本質(zhì)區(qū)別。原料方面，天然鱟試劑依賴鱟血采集，受動物資源限制，而 rCR 通過基因工程表達(dá) C、B 因子及凝固酶原，無動物源性，供應(yīng)穩(wěn)定。特異性上，天然鱟試劑因含 G 因子，易與 β-D 葡聚糖反應(yīng)產(chǎn)生假陽性，而 rCR 剔除 G 因子，只對內(nèi)毒素特異性響應(yīng)，從機制上消除干擾。批間一致性方面，天然鱟試劑受鱟個體差異影響，批間 CV 值較高；rCR 成分明確且生產(chǎn)工藝標(biāo)準(zhǔn)化，批間差異明顯降低，CV 值≤15%。兩者靈敏度相當(dāng)（0.005EU/mL），但 rCR 無需面臨鱟資源政策限制，更符合動物福利趨勢和長期質(zhì)控需求，是天然鱟試劑的理想替代。
江蘇細(xì)菌內(nèi)毒素檢測細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品可用于鱟試劑靈敏度復(fù)核、干擾試驗，適配凝膠法與光度法實驗。

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湖州申科生物動態(tài)顯色法鱟試劑用于定量測定人用和動物用注射藥物、生物制品及醫(yī)療器械等樣本中的細(xì)菌內(nèi)毒素的含量。 細(xì)菌內(nèi)毒素能特異性地活化反應(yīng)主劑中的 C 因子，活化的 C 因子活化 B 因子，活化的 B 因子進而活化凝固酶原，凝固酶水解反應(yīng)中的顯色底物，產(chǎn)生游離的pNA（對硝基苯胺）從而引起吸光度變化，根據(jù)動態(tài)檢測溶液吸光度變化率對內(nèi)毒素進行定量。本品能夠快速、高靈敏度地定量檢測樣品中的內(nèi)毒素水平，適用于各種實驗室和工業(yè)生產(chǎn)場景，確保產(chǎn)品質(zhì)量和安全性。

隨著動物保護理念和法規(guī)要求升級，重組因子C法（rFC法）作為 LAL 法的替代技術(shù)逐漸普及。重組 C 因子是以基因重組的方式表達(dá)的 LAL 試劑中的 C 因子，C 因子被內(nèi)毒素活化后切割熒光底物產(chǎn)生游離熒光基團，通過檢測熒光信號可以反應(yīng)活化后的蛋白酶活性，并由此可以推算出內(nèi)毒素的含量。與傳統(tǒng) LAL 法相比，rFC 法無需依賴鱟血資源，避免了天然 LAL 試劑批間差異大、易受 β- 葡聚糖干擾等問題，且反應(yīng)特異性更強。目前，《美國藥典》、《歐洲藥典》等法規(guī)已收錄 rFC 法，歐盟更推薦其用于疫苗等高風(fēng)險產(chǎn)品檢測，在保證檢測準(zhǔn)確性的同時，符合動物福利和可持續(xù)發(fā)展要求。
細(xì)菌內(nèi)毒素是革蘭氏陰性菌細(xì)胞壁脂多糖，細(xì)菌死亡裂解釋放，微量級即致人體發(fā)熱、休克等威脅。

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血液制品（如白蛋白、免疫球蛋白、凝血因子）來源于人血漿，內(nèi)毒素污染風(fēng)險高，且基質(zhì)中含大量蛋白質(zhì)、脂質(zhì)等干擾物質(zhì)，檢測難度較大。傳統(tǒng) LAL 法易受血漿蛋白抑制，需通過預(yù)處理去除干擾：如采用三氯乙酸沉淀蛋白、超速離心分離脂質(zhì)，或使用特定去干擾試劑（如內(nèi)毒素提取試劑）。此外，血液制品內(nèi)毒素限值較低，需選用高靈敏度檢測方法（如動態(tài)顯色法，LOD=0.005 EU/mL）。檢測過程中需嚴(yán)格區(qū)分 “內(nèi)源性內(nèi)毒素”（血漿中天然存在）與 “外源性污染”，通過工藝優(yōu)化（如巴氏滅活、納米膜過濾）降低外源性內(nèi)毒素殘留，保障臨床用藥安全。
重組級聯(lián)試劑（rCR）推動內(nèi)毒素檢測向可持續(xù)發(fā)展轉(zhuǎn)型，兼顧生態(tài)保護與藥品安全質(zhì)控。江蘇細(xì)菌內(nèi)毒素檢測

湖州申科生物提供重組級聯(lián)方法的技術(shù)轉(zhuǎn)移服務(wù)，含方法驗證報告，助力內(nèi)毒素檢測方法平穩(wěn)切換。廣東醫(yī)療器械內(nèi)毒素檢測動態(tài)顯色法鱟試劑

重組級聯(lián)試劑（rCR）通過完整模擬天然鱟試劑的酶促級聯(lián)反應(yīng)路徑，實現(xiàn)高效且特異的內(nèi)毒素檢測。其反應(yīng)機制為：內(nèi)毒素首先活化重組 C 因子，活化的 C 因子進一步活化重組 B 因子，隨后活化重組凝固酶原轉(zhuǎn)化為凝固酶，再催化顯色底物產(chǎn)生黃色信號（405nm 波長可檢測）。這一級聯(lián)放大過程有效提升了檢測靈敏度，即使微量內(nèi)毒素也能產(chǎn)生可識別信號。與單因子的重組 C 因子法（rFC）相比，rCR 的多因子級聯(lián)反應(yīng)抗干擾能力更強，尤其對復(fù)雜基質(zhì)樣品（如高蛋白單抗、疫苗）表現(xiàn)更優(yōu)。同時，rCR 剔除了天然鱟試劑中的 G 因子，避免了與 β-D 葡聚糖的非特異性反應(yīng)，從根本上減少假陽性結(jié)果，保障檢測數(shù)據(jù)的可靠性。
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