上海ELISA法宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留檢測試劑盒

來源： 發(fā)布時(shí)間：2025-12-03

湖州申科生物CHO-K1HCP殘留檢測試劑盒（一步酶聯(lián)免疫吸附法），采用固相酶聯(lián)免疫吸附法原理，可對CHO-K1細(xì)胞生產(chǎn)的生物制品中宿主殘留蛋白進(jìn)行定量檢測。檢測時(shí)，向預(yù)包被抗CHO-K1HCPs綿羊多抗的酶標(biāo)板中，加入校準(zhǔn)品或待測樣品、HRP標(biāo)記的抗CHO-K1HCPs綿羊多抗共同孵育。洗滌后加入TMB底物顯色，隨后用終止液終止酶促反應(yīng)；再用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度，該吸光度與校準(zhǔn)品或待測樣品中HCPs濃度呈正相關(guān)，依據(jù)校準(zhǔn)品擬合的劑量-反應(yīng)曲線，即可算出待測樣品中HCPs的濃度。該試劑盒對待測樣品無需特殊處理，通過合適稀釋比例的適用性驗(yàn)證，即可直接使用。且試劑盒操作步驟少、檢測快速，同時(shí)具備專一性強(qiáng)、性能穩(wěn)定可靠的特點(diǎn)。
線性范圍、中間精密度、靈敏度等關(guān)鍵參數(shù)的評估，是 HCP 檢測方法驗(yàn)證的必備環(huán)節(jié)。上海ELISA法宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留檢測試劑盒

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在宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留檢測的分析方法里，ELISA法應(yīng)用較多，也是QC日常放行檢測的主要方式。該方法操作相對簡便、檢測精度較好，便于設(shè)定控制范圍與制定技術(shù)規(guī)范，適用于產(chǎn)品開發(fā)及過程控制；不過，ELISA檢測依賴抗原與抗體的特異性結(jié)合，因此以生物制品中HCP為免疫原制備的抗體質(zhì)量，對檢測結(jié)果影響極大。無論是市售ELISA試劑盒，還是實(shí)驗(yàn)室自制的多克隆抗體，若抗體的特異性與適用性不足，都可能導(dǎo)致HCP漏檢，進(jìn)而給生物制品質(zhì)量安全埋下隱患。另外，ELISA檢測HCP時(shí)采用多克隆抗體，無法針對性反映高風(fēng)險(xiǎn)HCP殘留蛋白的實(shí)際存在狀況。
Sf9宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留檢測常見問題分析聚焦四大生物制品領(lǐng)域（抗體、重組蛋白、疫苗、CGT），湖州申科宿主細(xì)胞蛋白檢測產(chǎn)品實(shí)現(xiàn)全場景適配。

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宿主細(xì)胞蛋白（HCPs）是生物制品生產(chǎn)過程中產(chǎn)生的重要工藝相關(guān)雜質(zhì)，不僅可能引發(fā)患者不良免疫反應(yīng)、超敏反應(yīng)，還可能造成產(chǎn)品蛋白降解等問題，進(jìn)而影響生物制品的安全性與有效性，因此成為生物制品質(zhì)量控制中的關(guān)鍵指標(biāo)。目前 HCPs 殘留檢測的常用方法為 ELISA 法，該方法操作簡便、靈敏度高且檢測通量較高，是 HCPs 殘留的日常放行檢測方法，各國藥典均對采用酶聯(lián)免疫法開展 HCPs 殘留檢測作出規(guī)定。不過，采用 ELISA 法檢測 HCPs 殘留仍存在不少挑戰(zhàn)：在實(shí)際生產(chǎn)工藝中，宿主細(xì)胞來源、生產(chǎn)工藝路線、純化技術(shù)、生產(chǎn)規(guī)模等因素，均可能改變 HCPs 的種類與復(fù)雜程度，給檢測帶來不確定性。

中國倉鼠卵巢細(xì)胞（Chinese Hamster Ovary，CHO）是生物制品生產(chǎn)中常用的動物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)，廣泛應(yīng)用于抗體、重組蛋白、疫苗等產(chǎn)品的制備。采用 CHO 細(xì)胞作為宿主進(jìn)行生產(chǎn)時(shí)，難免會引入宿主細(xì)胞蛋白（HCP）雜質(zhì)；即便 HCP 殘留量較低，仍可能存在免疫原性，還會帶來降低產(chǎn)品蛋白穩(wěn)定性等風(fēng)險(xiǎn)。因此，需對生物制品中的 HCP 殘留進(jìn)行定量分析，從而保障純化工藝的一致性與終產(chǎn)品的安全性。SHENTEK®CHO 宿主細(xì)胞蛋白（HCP ）殘留檢測試劑盒實(shí)現(xiàn)了關(guān)鍵試劑的全國產(chǎn)化，其通過 CHO 細(xì)胞（K1&S）補(bǔ)料分批培養(yǎng)工藝制備 HCPs，再以此免疫綿羊獲取抗體，適用于檢測 CHO 細(xì)胞系表達(dá)的生物制品（如單抗、重組蛋白、疫苗等）中的 HCP 殘留。該試劑盒具有操作步驟少、檢測速度快、專一性強(qiáng)、性能穩(wěn)定可靠的特點(diǎn)。
總蛋白檢測差異是 HCP 免疫檢測結(jié)果不同的原因之一。

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大腸桿菌具有遺傳背景明確、便于培養(yǎng)與調(diào)控、蛋白表達(dá)量高、成本低廉且培養(yǎng)周期短等特點(diǎn)，是性價(jià)比高的蛋白表達(dá)系統(tǒng)。其中，K-12系列與B系列菌株是工業(yè)級生物工程中常用的大腸桿菌菌株。K-12菌株及其衍生的DH5α、Top10、JM109等菌株，可用于大規(guī)模生產(chǎn)質(zhì)粒DNA，進(jìn)而制備細(xì)胞基因治療產(chǎn)品與病毒載體類疫苗；而源自B系列的菌株（如BL21），更適合高效轉(zhuǎn)染表達(dá)載體及常規(guī)蛋白的表達(dá)，例如病毒蛋白、重組蛋白疫苗、細(xì)胞因子、酶類等產(chǎn)品。湖州申科生物依據(jù)這兩種菌株的特性，分別研發(fā)了大腸桿菌表達(dá)菌HCP殘留檢測試劑盒與大腸桿菌克隆菌堿裂HCP殘留檢測試劑盒。
借助 SHENTEK?AutoElisa-4K HCP 自動化檢測系統(tǒng)，既降低人為偏差，又契合 21CFR Part11 數(shù)據(jù)管理要求。上海畢赤酵母宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留檢測

湖州申科擁有自主搭建的多克隆抗體庫（CHO\E.coli\293T細(xì)胞等），提供對應(yīng)覆蓋率驗(yàn)證服務(wù)。上海ELISA法宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留檢測試劑盒

方法選擇是影響宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留檢測結(jié)果的因素之一。酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）與液相色譜 - 質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（LC-MS），是當(dāng)前 HCP 檢測領(lǐng)域的兩類常用方法。據(jù)文獻(xiàn)統(tǒng)計(jì)，當(dāng)前在總 HCP 定量檢測中，ELISA 仍為主流技術(shù)；而 MS 法可用于特定蛋白（如高風(fēng)險(xiǎn)蛋白）的鑒定與定量，已成為重要的互補(bǔ)手段。此外，檢測過程中所用試劑與耗材的質(zhì)量，會直接影響檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。質(zhì)量不達(dá)標(biāo)的試劑，可能引發(fā)檢測結(jié)果出現(xiàn)假陽性或假陰性。舉例來說，若抗體的特異性與親和力不足，可能在 ELISA 檢測中產(chǎn)生交叉反應(yīng)；若抗原代表性不足或抗體覆蓋率偏低，則可能造成漏檢；而稀釋液抗干擾能力較弱時(shí)，也會對檢測準(zhǔn)確性產(chǎn)生影響。相關(guān)案例研究顯示，采用定制化方法替代原有商業(yè)化試劑盒后，抗原代表性與抗體覆蓋率明顯提升，HCP 檢測值也呈現(xiàn)整體升高的趨勢。
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